Диссертация (1139722), страница 45
Текст из файла (страница 45)
Затем надосадочную жидкость осторожно (избегая потери порошка) сливают,оставляя 10 мл, приливают 10 мл 5 % р-ра NaOH, нагревают на плитке до кипения и кипятят 3060 секунд. После чего в стакан приливают 20-30 мл деминерализованной воды, дают отстояться1-2 мин и надосадочную жидкость сливают, повторяя операцию до тех пор, пока надосадочнаяжидкость не станет прозрачной (3-4 раза). Последний раз жидкость медленно (избегая потерьчастиц) сливают, оставляя около 1 мл. Затем скальпелем или лопаточкой осторожно (поднимаяпо стенке стакана) порошок переносят на предметное стекло в каплю включающей жидкости(глицирин-вода (1:1) или раствор хлоралгидрата), избегая попадания в нее частиц оболочки(зеленоватых пленочек), равномерно распределяют порошок в капле препаравальной иглой,накрывают покровным стеклом и исследуют под микроскопом.
В случае необходимости (приналичии пузырьков воздуха) препараты прогревают над пламени горелки. Делают не менее 1020 микропрепаратов.Описанная методика пробоподготовки позволяет предварительно разрушить оболочкутаблетки и не допустить попадания ее в микропрепараты.
Деструкция ядра достигается за счет222его собственной распадаемости в кипящей воде и тем самым исключается стадия разрушениятаблетки путем растирания, приводящая к дополнительному измельчению растительных частици, как следствие, ухудшению их диагностичности. Одновременно происходит растворениерастительного экстракта и сахара, входящих в состав препарата. Дальнейшая обработкараспавшейся таблетки (кипячение в 2,5 % растворе NaOH в течение 30-60 секунд) позволяет вщадящем режиме размягчить и просветлить растительные ткани. Промыванием просветленногорастительного порошка методом декантации удаляются растворенный сахар, экстракт и мелкие(до 10 мкм) растительные частицы, не несущие диагностических признаков.При исследовании микропрепаратов видны:-фрагменты бесцветных прозрачных стекловидных пластин с бороздчатостью ввиде тонких параллельных полосок; реже обломки кремовато-серых пластин с шершавойматовой поверхностью (рис.
105Б, 108) (грудной щит сепии);-группы желтых сильно одревесневших узкополостных механических волоконпрямых или изогнутых в виде дуги, иногда сопровождаемых цепочками призматическихкристаллов оксалата кальция (Рис. 105); фрагменты экзокарпа, состоящие из мелкихполигональных прямостенных клеток с утолщенными стенками (плоды мелии);АБРисунок 106. Диагностика плодов мелии по группам механических волокон. Ув.х90.А - порошок плодов мелии, группа механических волокон эндокарпа.Б – препарат «Вентеронова», осколок грудного щита сепии; группа механических волоконплода мелии.-группы желтоватых узких механических волокон с одревесневшими пористымистенками (корневища коптиса);-небольшие фрагменты покровной ткани из 1-3 изодиаметричных или вытянутыхпрямостенных клеток с пористыми стенками (поры округлые, удлиненные, иногда образующиесетчатую структуру); обрывки широкополостных сосудов ксилемы с крупно-сетчатым223утолщением клеточных стенок (очень редко) (корневища хохлатки);-участки паренхимной ткани с многочисленными друзами, реже призматическимикристаллами оксалата кальция размером от 7 до 25 мкм (рис.
107А); обломки простых волосковс толстыми стенками и нежнобородавчатой поверхностью (очень редко) (плоды эводии);-фрагменты эпидермиса, состоящие из удлиненных, чаще четырехугольных клеток свыраженной четковидной утолщенностью клеточных стенок (Рис. 108 А) (луковицы рябчика);-желтоватые каменистые клетки разной формы и степени одревеснения пористыхклеточных стенок, некоторые с красно-бурым содержимым (корневища хохлатки, корневищакоптиса, плоды мелии, плоды эводии, семена абрикоса);-фрагменты сосудов ксилемы – широких и узких с различной вторичнойутолщенностью клеточных стенок (пористые, сетчатые, лестничные) (морфологические группысырья – корневища (луковицы), плоды, семена);-бесцветные прозрачные кристаллы в виде желобовидных прямых или слегкаизогнутых палочек длиной 35-100 шириной 15-20 мкм (гидроксиметил-целлюлоза);-многочисленные недиагностируемые растительные фрагменты и минеральныебесформенные частицы.АБРисунок 107.
Диагностика плодов эводии фрагменту околоплодника. Ув. х100.А – препарат «Вентеронова», фрагмент околоплодника плодов эводии.Б – плоды эводии, друзы оксалата кальция околоплодника плодов эводии.224АБРисунок 108. Диагностика луковиц рябчика по фрагменту эпидермиса. Ув. х100.А - фрагмент эпидермиса луковиц рябчика в препарате «Вентеронова».Б – порошок луковиц рябчика, эпидермис с устьицами.Рисунок 109. Диагностика грудного щита сепии в препарате «Вентеронова». Ув.
х100.А - фрагмент грудного щита сепии в препарате «Вентеронова».Б - порошок грудного щита сепии (менее 1,0 мм) (Sepia officinalis, Sepiidae).Как показали проведенные микроскопические исследования, при использованииразработанной пробоподготовки удается подтвердить подлинность 5-ти из 6-ти видоврастительных порошков, включенных в состав таблеток, а также сырья животногопроисхождения, по присущим им и сохранившимся в результате производства препаратаспецифическим диагностическим признакам (строение элементов грудного щита сепии,механические волокна корневищ коптиса и плодов мелии, покровная ткань корневищ хохлатки,эпидермис луковиц рябчика, простые волоски и фрагменты околоплодника с друзами оксалатакальция плодов эводии). Не смотря на хорошую проявляемость каменистых клеток в225микропрепаратах (в 100% случаях), их диагностическая значимость была сведена к нулюсхожим строением этого признака у 5 видов растительного сырья (корневищ коптиса, корневищхохлатки, плодов эводии, плодов мелии, семян абрикоса).
Поэтому диагностика последних поналичию каменистых клеток – единственному сохраняющемуся диагностически значимомуэлементу у семян абрикоса при такой высокой дисперсности – практически невозможна. Крометого, из-за высокой дисперсности используемого растительного сырья, а также в результатепроведения пробоподготовки теряют свою диагностичность ряд анатомических признаков(кристаллический песок луковиц рябчика, головчатые волоски и вместилища с эфирныммаслом плодов эводии, содержимое клеток семядолей семян абрикоса). Вместе с тем анатомодиагностическую картину препарата "Вентеро-Нова" дополняют кристаллы гидроксиметилцеллюлозы - вспомогательного вещества, имеющего характерное строение и не удаляющегося впроцессе проведения пробоподготовки.Согласно выполненным расчетам частоты встречаемости анатомо-диагностическихпризнаков в микропрепаратах характерные для корневищ коптиса и плодов мелии волокна,фрагменты околоплодника с друзами оксалата кальция плодов эводии, фрагменты покровнойткани корневищ хохлатки, обломки грудного щита сепии, каменистые клетки определяются в100% случаев, фрагменты сосудов – в 90%, фрагменты эпидермиса луковиц рябчика – в 5%.Такимобразом,врезультатепроведенныхисследованийбыларазработанапробоподготовка к микроскопическому анализу таблеток "Вентеронова" и определеныхарактеристики их подлинности.Таким образом, в ходе проведенных исследований была изучена и доказана возможностьприменениямикроскопическогомногокомпонентныхлекарственныханализасредствсцельювосточнойопределениямедицины.подлинностиУстановлено,чтодиагностируемость компонентов напрямую зависит от сложности состава лекарственногосредства.
(В малокомпонентных препаратах с разными морфологическими группами сырья оналегче, чем в многокомпонентных с сырьем одинаковых морфологических групп).Определить подлинность или групповую принадлежности сырья (компонента препарата)удавалось осуществить по наиболее характерным в условиях высокой дисперсностианатомическим признакам. К ним относятся в основном элементы механических и проводящихтканей (фрагменты волокон, сосудов, каменистые клетки), а также включения оксалата кальция,в то время как высокодиагностичные, даже в высокодисперсном сырье «листовые»эпидермальныеэлементыдиагностическую значимость.вмногокомпонентныхсмесяхзначительноутрачивают226ОБЩИЕ ВЫВОДЫ1.Проведенное информационно-аналитическое исследование показало, что в качествефармацевтической субстанции растительного происхождения используются не тольковыделенные индивидуальные или очищенные суммарные биологиически активные соединенияи экстракционные формы, но и лекарственное растительное сырье, которое в цельном,измельченном и порошкованном виде предназначено для производства лекарственныхрастительных препаратов и твердых дозированных лекарственных форм.Из 270 видов лекарственного растительного сырья, разрешенного к медицинскомуприменению 147 видов (54%) используются только для получения индивидуальных, суммарныхБАВ и экстракционных препаратов, а 123 вида (46%) для производства лекарственныхрастительных препаратов и твердых дозированных лекарственных форм.Предложенаклассификациялекарственныхсредствнаосновелекарственногорастительного сырья как фармацевтической субстанции растительного происхождения,дифференцирующая лекарственные растительные препараты для приготовления водныхизвлечений (фасованное в пачки, фильтр-пакеты, брикеты, гранулы) и твердые дозированныелекарственные формы.2.На основании сравнительного экспериментального микроскопического изучения 90видов цельного и измельченного лекарственного растительного сырья, относящегося к 7морфологическим группам, выявлены и охарактеризованы маркеры анатомического строения.•Дляморфологическихгрупп«листья»,«травы»и«цветки»ведущимимикроскопическими маркерами как в цельном, так и измельченном сырье являютсяособенности строения эпидермиса и его образований, дополнительными - секреторные икристаллические образования эпидермиса и мезофилла.
Для безлистных трав основнымимаркерами являются эпидермальные особенности стебля, его механические и проводящиеэлементы.•Для любых типов плодов ведущими маркерами являются особенности строенияэкзокарпа, а также механические и секреторные образования мезокарпа.•иВ измельченных подземных органах и корах диагностический признак расположениясоотношенияДиагностическитканей,существенныйзначимымиостаютсядляцельногоотдельныепроводящей, механической и секреторной тканей.сырья, теряетэлементыпокровной,свое значение.паренхимной,227Установлены3.закономерностивариабельностиивизуализациианатомо-диагностических признаков лекарственного растительного сырья в зависимости от различныхфакторов: размера частиц, способа измельчения, специфической обработки сырья (сырьетрадиционнойкитайскоймедицины),использованиявспомогательныхвеществвлекарственных растительных препаратах.Не выявлено существенного влияния на проявляемость анатомо-диагностических•признаков растительных порошков, измельченных в среде жидкого азота.Установлена•изменчивостьанатомо-диагностическихпризнаковрастительныхпорошков корня солодки и травы термопсиса, измельченных в турбулентном токе воздуха.Установлено влияние специфичной первичной обработки сырья традиционной•китайской медицины на диагностику запасного питательного вещества в подземных органах.Доказано, что форма и размер крахмальных зерен утрачивает свое значение.Определено, что вспомогательные вещества – микрокристаллическая целлюлоза и•кроссповидондополняютмикроскопическуюхарактеристикуподлинноститвердыхдозированных лекарственных форм с лекарственным растительным сырьем.На4.основаниипроведеннногомикроскопическогоисследованиявпервыеохарактеризованы анатомо-диагностические признаки 21 вида лекарственного растительногосырья европейской и восточной медицины (листья копытня Зибольда, листья шалфеяпредсказателей, трава репешка аптечного, трава лаконоса ягодного, плоды мелии тоозендан,плоды эводии рутоплодной, семена сосны кедровой сибирской, корневища лигустикума, корнидудника даурского, корни сапожниковии, корни астрагала перепончатого, корневища ариземыединокровной, корни пиона молочноцветкового, корни лаконоса ягодного, корневища хохлаткияньхусо, корневища и корни горечавки, луковицы рябчика хубэйского, клубнелуковицыбезвременника осеннего, корневища сыти круглой, корневища коптиса, корни баптизиикрасильной); дополнены и уточнены микроскопические карактеристики подлинности 74фармакопейных фармацевтических субстанций растительного происхождения (в том числеживотного происхождения и грибов).Всоответствииссовременнымифармакопейнымитребованиямианатомо-диагностические признаки всех объектов исследования документально подтверждены болеечем 500 фотоиллюстрациями, приведенными в диссертационной работе и публикациях по темедиссертации.2285.Разработаны методические подходы к определению биологически активных веществ сиспользованием гистохимических реакций на дубильные вещества, эфирные и жирные масла,полисахариды,одревесневшиеэлементы,кристаллическиеобразования,расширяющиевозможности микрохимического анализа за счет функций: доказательства наличия иопределения локализации биологически активных веществ, визуализации диагностическихпризнаков и возможности дифференциации близкородственных видов лекарственногорастительного сырья.6.Выявлены оптимальные условия пробоподготовки микроскопического анализа,позволяющие визуализировать диагностические признаки лекарственного растительного сырьяв зависимости от морфологической группы и измельченности:•для цельного сырья сочных плодов целесообразно готовить микропрепаратыэкзокарпия и семенной кожуры с поверхности, давленый препарат мезокарпия и поперечныйсрез семени;•для цельных луковиц – микропрепарат наружнего эпидермиса и кроющих чешуй споверхности, поперечный срез луковицы;•для порошков различных морфологических групп оптимальная визуализациямикроскопических маркеров достигается при размере частиц до 0,16 мм и использованиипросветляющих реактивов с учетом состава биологически активных веществ и гистологическойструктуры.7.Выявленыособенностимикроскопическойдиагностикисырьяживотногопроисхождения и грибов на примере бадяги, грудного щита сепии, чаги, трутовика настоящегои пории кокосовидной.•Доказано, что микроскопическими маркерами у лекарственного растительного сырьяживотного происхождения являются элементы внутреннего скелета исследуемых организмов,•у грибов – строение, ветвление, размеры и цвет гиф мицелия.8.На основании проведенного микроскопического исследования разработаны методикипробоподготовкииопределеныанатомо-диагностическиепризнакилекарственногорастительного сырья (в том числе сырья животного и грибного происхождения) в 5 видахмонокомпонентных и 11 видах многокомпонентных твердых дозированных лекарственныхформ (от 3 до 14 компонентов).229Предложен алгоритм идентификации природного сырья (растительного, животногопроисхождения и грибов) методом микроскопического анализа в составе подобныхлекарственны средств.9.Полученные в результате проведенных исследований материалы, посвященные общимподходам к микроскопической идентификации лекарственного растительного сырья в составемногокомпонентных твердых дозированных лекарственных форм, предложены в качестведополненийдляобщихфармакопейныхстатей"Техникамикроскопическогоимикрохимического исследования лекарственного растительного сырья и лекарственныхрастительных препаратов» и «Таблетки».Перспективы дальнейшей разработки темы.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
