Автореферат (1139718), страница 5
Текст из файла (страница 5)
Установлены линейные зависимости между содержанием БАВ иплощадьюхроматографическойзонывдиапазонеизучаемыхконцентраций.Разработанные методики количественной оценки данных ВЭТСХ были апробированына изучаемом ЛРС. Характеристики методик и результаты определения представлены втабл. 4.Таблица 4 – Параметры разработанных методик ВЭТСХ для идентификации иколичественного определения БАВ в ЛРС (в пересчете на абсолютно сухое сырье)№п/пБАВ3АскорбиноваякислотаГлутаминоваякислотаКверцетин4Танин125678ГалловаякислотаГлюкозаКсилозаРамнозаДиапазонлинейности,мг/млR2УравнениепрямойРезультаты определения БАВ, %ЛистьяПлоды облепихикрапивыкрушиновиднойдвудомной1,5-4,50,9941 у=9233,6x-1550,10,053±0,0150,047±0,0010,5-3,50,9707 у=18190x+135600,011±0,0010,330±0,036у=3,6734x+1,1792у=4,4805x+0,7287у=6,0083x-0,1537у=16,601x-5,3268у=4,8778x+13,128у=16,327x-158,66у=3,7854x+23,337у=3,3692x+8,7440,643±0,040-0,724±0,016-1,0-6,00,5-4,55,0-7,00,3-1,51,5-4,015,0-35,015,0-30,010,0-30,00,99160,97210,95310,96600,91540,99470,97440,97340,579±0,05614,070±1,2630,273±0,0562,315±0,1310,041±0,00135,569±3,446Менее 0,05 %1,705±0,09822Разработанные методики могут быть также использованы для стандартизации и оценкикачества других видов ЛРС и ФП.2.
Определение основных групп БАВ в исследуемом ЛРСВ процессе комплексного изучения основных групп БАВ (каротиноидов,флавоноидов, дубильных веществ, аминокислот, хлорофиллов, органических кислот,антоциановыхсоединений,углеводов,сахаров,некоторыхмакроэлементоввитаминов) в исследуемом ЛРС, разработаны и валидированыметодикииихколичественного определения. Полученные результаты представлены в табл. 5.Таблица 5 - Определение комплекса БАВ в изучаемом ЛРС (в пересчете на абсолютносухое сырье)№п/п12345БАВСумма органическихкислотСуммагидроксикоричныхкислотАскорбиноваякислотаАнтиокислительнаяактивность, мг/гСумма каротиноидовСодержание БАВ, %Листья крапивы Плоды облепихидвудомнойкрушиновидной*4,450±0,33012,874±0,161Титриметрия (в пересчетена кислоту яблочную)2,030±0,0200,210±0,011СФМ (в пересчете накислоту хлорогеновую)0,042±0,0030,064±0,003Титриметрия15,570±0,71017,130±0,1300,210±0,010 %51,190±1,920 мг%Сумма антоциановыхсоединений7,470±0,550Сумма дубильных7веществ2,750±0,080Сумма свободных85,518±0,056аминокислот9 Сумма флавоноидов1,552±0,034Сумма10полисахаридов и15,314±1,531простых сахаровСумма11хлорофилловых0,371±0,007соединений12Кальций2,312±0,034Танин и кислота1,524±0,029галловая при(танина);13совместном1,199±0,036присутствии(кислоты галловой)Экстрактивные26,480±1,18015вещества* - свежие плоды6Метод анализа2,831±0,1136,614±0,4870,534±0,0154,860±0,3331,085±0,121Титриметрия (в пересчетена кверцетин)СФМ (в пересчете на βкаротин)СФМ (в пересчете нацианидин-3-о-глюкозид)ПерманганатометрияСФМ (в пересчете на танин)СФМ (в пересчете накислоту глутаминовую)СФМ (в пересчете на рутин)20,901±3,057СФМ (Пикриновый метод впересчете на глюкозу)-СФМ1,050±0,092Комплексонометрия0,202 (танина);0,8999 (кислотыгалловой)СФМ57,940±3,320ОФС ГФ XIII (методика 1)23При разработке методик идентификации и количественного определения БАВ визучаемом ЛРС устанавливались оптимальные параметры получения извлечения,обеспечивающие полноту экстракции каждой группы БАВ, такие как степеньизмельченности сырья, соотношения сырья и экстрагента, время и кратностьэкстракции.
Обобщенные экспериментальные данные представлены в табл. 6 и 7.Таблица 6 – Оптимальные параметры выделения БАВ из листьев крапивы двудомной№п/п123456БАВРезультаты определенияЛРС:времяразмеркратностьэкстрагентэкстрагент экстракции, мин. частиц, мм экстракцииСуммаорганическихводакислотКальцийводаСумма70% этанолкаротиноидовСумма дубильныхводавеществСумма свободныхводааминокислотСумма96% этанолфлавоноидов1:2501200,5-1,011:50600,5-1,011:100600,5-1,021:125300,2-0,511:50601,0-2,021:5045менее 0,21Таблица 7 – Оптимальные параметры выделения БАВ из плодов облепихикрушиновидной№п/п1234567БАВРезультаты определенияЛРС:времякратностьэкстрагентэкстрагент экстракции, мин экстракцииразведеная HCl1:50602КальцийСумма95% этанолкаротиноидовСумма антоциановыхподкисленныйсоединений80% этанолСумма дубильныхводавеществСумма свободныхводааминокислотСумма флавоноидов70% этанолСумма полисахаридов и вода: конц.
HClпростых сахаров(10:1)1:1009011:10018011:2003011:706021:304511,5:80902Валидацию разработанных методик (табл. 8) проводили по основным параметрам(специфичность, предел обнаружения, линейность, правильность, воспроизводимость).24Таблица 8 - Валидационные характеристики разработанных методик количественного определения БАВ в ЛРС№п/пБАВ1Суммафлавоноидов+2Сумма дубильных веществ+3 Сумма свободных аминокислот456Сумма гидроксикоричныхкислотСуммакаротиноидовСуммахлорофилловСпецифичность++++Валидационные характеристикиЛинейность (уравнение прямой,ПределПравильностьR2, диапазон линейности)обнаруженияЛистья крапивы двудомнойу=0,0747х-0,029; R2=0,9969;2,33×10-4 г/г сырьяR=98,19%-43,10 – 9,30×10 г/г сырья2-6у=0,0572х-0,0462; R =0,9993;1,88×10 г/мл1,90 – 22,60×10-6г/мл;2-4у=0,0537х+0,0219; R =0,9962;1,12×10 г/млR=103,05%1,12 – 16,79×10-4 г/млR= 99,27%--R=100,00%R=99,99%СходимостьМетрологическиехарактеристикиSD = 3,24%;RSD =2,09%SD = 2,71%;RSD = 1,04%SD = 5,36%;RSD = 0,97%SD=2,05%;RSD=1,01%SD=0,90%;RSD=4,29%SD=0,71%;RSD=1,90%ε=5,37%; εср=2,19%ε=3,93%; εср=2,80%ε=2,49%; εср=1,02ε=2,67%; εср=2,10%ε=18,49%; εср=6,17%ε=6,50%; εср=2,10%танин+7Танин и галловая кислота присовместном присутствииСумма антоцианов2 Сумма свободных аминокислот1,0×10-6 г/млRср.=99,39%SD=2,07%;RSD=3,15%Rср.=99,39%SD =3,28%;RSD=3,93%ε=8,02%; εср=3,03%галловая кислота+1275 нм: y=0,135x-0,1089R2=0,9916305 нм: y=0,2355x-0,1821R2=0,9927; 2,0 – 24,0×10-6 г/мл++3Суммакаротиноидов+4Сумма дубильных веществ+5Сумма полисахаридов ипростых сахаров+275 нм: y=0,1818x-0,1744R2=0,99571,0×10-6 г/мл305 нм: y=0,057x-0,0609R2=0,9958; 2,0 – 28,0×10-6 г/млПлоды облепихи крушиновидной высушенныеу=0,2428х-0,0581; R2=0,9990;0,48×10-5 г/мл0,96 – 4,78×10-5 г/млу=0,0681х-0,056; R2=0,9955;0,78×10-4 г/мл-45,81 – 11,63×10 г/млу=0,1512х+0,0289; R2=0,9937;0,39 мкг/мл0,77 – 4,59 мкг/мл2у=0,0607х-0,0348; R =0,9992;1,04×10-6 г/мл-61,04 – 20,84×10 г/млу=0,1533х+0,13; R2=0,9893;1,50 мкг/мл6,80 – 54,40 мкг/мл-SD = 2,08%;RSD = 4,36%SD = 0,93%;RSD = 4,10%SD = 0,71%;RSD = 4,10%SD = 2,095%;RSD=2,392%SD = 4,15%;RSD =4,14%ε=5,07%; εср=1,91%ε=10,28%; εср=3,43%ε=2,58%; εср=1,15%ε=1,82%; εср=0,74%ε=4,65%;εср=1,90%ε= 32,76%;εср=14,62%25Валидационные характеристики разработанных методик свидетельствуют осоответствии полученных результатов критериям приемлемости.Для подтверждения полученных результатов, исследование специфическогопрофиля и установление количественного содержания БАВ в ЛРС проводилось сиспользованием комплекса физико-химических методов анализа.Методомкапиллярногоэлектрофорезаисследовансоставсвободныхорганических кислот (как в кислотной, так и в солевой форме), а также полныйаминокислотный состав изучаемого ЛРС.
Результаты представлены в табл. 9 и 10.Таблица 9 - Результаты определения органических кислот методом капиллярногоэлектрофореза в исследуемых объектах (в пересчете на абсолютно сухое сырье)№п/пОрганическаякислота1234Яблочная кислотаЯнтарная кислотаМасляная кислотаМолочная кислотаСодержание органических кислот, %Листья крапивыПлоды облепихидвудомнойкрушиновидной высушенныеМенее 0,058,920,110,37Менее 0,05Менее 0,050,56Менее 0,12Таблица 10 - Аминокислотный состав исследуемых объектов (в пересчете на абсолютносухое сырье)№п/п1234567891011121314151617АминокислотаАргининЛизин*ТирозинФенилаланин*ГистидинЛейцин*Изолейцин*Метионин*Валин*ПролинТреонин*СеринАланинГлицинЦистинГлутаминоваякислотаАспарагиноваякислотаВсегоСодержание аминокислот, %ЛистьяПлоды облепихиПлоды облепихикрапивыкрушиновиднойкрушиновиднойдвудомной высушенные (с косточкой) свежие (без косточки)1,171,230,801,070,490,140,780,350,361,010,350,430,460,290,220,600,431,590,900,410,220,300,060,071,110,430,221,030,490,720,410,291,220,600,361,270,460,141,471,190,440,220,630,35Менее 0,0071,961,600,072,993,330,2920,2111,834,9926Преобладающими аминокислотами в косточке плодов облепихи крушиновиднойявляются аспарагиновая и глутаминовая кислоты.
Плоды без косточки (кожица имякоть) в большом количестве содержат аргинин и пролин.ВисследуемомЛРСкрапивыдвудомнойпреобладаютаспарагиновая,глутаминовая кислоты, аргинин, лейцин, аланин, серин и треонин. В целом, листьякрапивы двудомной являются более богатым источником аминокислот по сравнению сплодами облепихи крушиновидной. Содержание незаменимых аминокислот в составекомплекса аминокислот листьев в 2,6 раза превышает таковое в комплексе аминокислотплодов облепихи крушиновидной высушенных.Исследование содержания и состава фенольной фракции БАВ в изучаемом ЛРСпроводилось с помощью метода ВЭЖХ-ДМД-МС (рис.
1 и 2). В плодах облепихикрушиновиднойобнаруженыфлавонолгликозиды–производныекверцетина,кемпферола и изорамнетина, основными из которых были изорамнетин-3-рутинозид(18,2% от суммы флавоноидов), изорамнетин-3-софорозид-7-рамнозид (13,1%) иизорамнетин-3-глюкозид-7-рамнозид(12,6%).Средиминорныхсоединенийидентифицированы 3-рутинозид-7-рамнозиды изорамнетина, кверцетина и кемпферола,3-софорозид-7-рамнозиды кверцетина и кемпферола, рутин, 3-глюкозид и 3-рамнозидизорамнетина. Присутствие в плодах кверцетин-3-рутинозид-7-глюкуронида в качествемаркерного компонента отмечено впервые.Флавоноиды в листьях крапивы двудомной представлены флавонолгликозидами –производными кверцетина, кемпферола и изорамнетина, среди которых преобладалрутин (50,9% от суммы флавоноидов).
Идентифицированы также изорамнетин-3рутинозид (25,2%), изокверцитрин (17,1%) и кемпферол-3-рутинозид (6,8%). РезультатыВЭЖХ-анализа показали, что основными производными гидроксикоричных кислот влистьях крапивы двудомной являются 2-кофеоиляблочная кислота (37,2% от суммыпроизводных), хлорогеновая кислота (18,2%) и розмариновая кислота (10,2%).Хроматограмма извлечения из листьев крапивы двудомной представлена на рис. 2.Средиминорныхидентифицированыпроизводныхизомерыгидроксикоричныхкофеоилхинныхкислоткислотбыли(неохлорогеновая,криптохлорогеновая кислоты), кафтаровая, кофейная и п-кумаровая кислоты.27Рис. 1.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
