Диссертация (1139576), страница 16
Текст из файла (страница 16)
Методы клинического обследования пациентовКлинико-лабораторноеобследованиепациентовсвоспалительнымизаболеваниями пародонта было выполнено с учетом требований МКБ 10,Государственного стандарта и методических рекомендаций по обследованиюстоматологических пациентов с заболеваниями пародонта, основанных навыявлении состояния гигиены полости рта, выраженности воспалительнойреакции, рецессии десны, деструкции пародонта и резорбции кости зубныхальвеол [17, 111].При опросе пациентов в первую очередь выявляли жалобы наболезненность и кровоточивость десен, ощущение дискомфорта, подвижностьзубов, образование десневых карманов, задержку пищи в них, выяснялианамнестические данные, определяли длительность заболевания, характерпроводимого лечения и его эффективность.Большинство пациентов с ХП и КАП предъявляли типичные для даннойпатологии жалобы: воспаление, болезненные ощущения и кровоточивость десен (особенно причистке зубов и приеме жесткой пищи) (80%); образование десневых карманов и задержку пищи между зубами после еды(75%); ощущение подвижности зубов и изменение положения зубов в зубном ряду(75%); обнажениепришеечнойобластикорнейзубов,повышеннуючувствительность к холодной и горячей пище, сладкому, кислому и др.вкусовым раздражителям (30%);84 прогрессирующую потерю зубов (50%); плохое пережевывание пищи (50%); неприятный запах во рту и при выдыхании (15%); гнойные выделения из десневых карманов (12%); жжение языка или десен было характерно для больных КАП (12%).При ХГ по данным проведенного нами анкетирования на первое местовыходили жалобы на неприятные ощущения со стороны десен, иногдаболезненность десневых сосочков, покраснение и отечность края десны.Диагноз обычно ставили при обращении пациента к врачу-стоматологу поповоду кариеса зубов или необходимости протезирования.
Реже причинойобращения были типичные пародонтологические жалобы. Многие пациентывообще не предъявляли жалоб.Длительность заболевания при ХПЛ в среднем составила 4,8 года, около 9лет — у пациентов с ХПС и ХПТ с сезонными периодическими обострениями.Практически во всех случаях обострение заболевания пародонта наблюдались 2–3 раза за год.
Всем пациентам ранее была проведена традиционноепародонтологическое лечение: удаление мягких (зубной налет) и твердых(зубной камень) отложений, профессиональная гигиена (по показаниям —кюретаж пародонтальных карманов), а также противовоспалительная иантибактериальная терапия.При осмотре полости рта выявляли признаки первичного или вторичногокариеса зубов и его осложнений почти у 100% пациентов, о чёмсвидетельствовало обнаружение кариозных полостей или полостей и частичноразрушенных пломб. Определялись обильные наддесневые и поддесневыезубные отложения, чаще (у 75% пациентов) на нижних резцах (оральнаяповерхность), верхних молярах (вестибулярная поверхность), нижних молярах(язычная поверхность). Аномалии положения зубов выявлены у половиныпациентов (50%), травматические узлы — у 40%.85Также наблюдались различные виды патологии прикуса, которые моглиспособствовать развитию патологии пародонта (28% пациентов).
Со сторонымягких тканей выявлено: аномалии положения уздечки верхней губы (низкоеприкрепление) — у 6%, уздечки нижней губы (высокое прикрепление) — у 24%,мелкое преддверие (полости рта) — у 16%. Признаки незначительногоувеличения регионарных лимфоузлов, их болезненность выявлены у 32%пациентов с хроническими воспалительными процессами в тканях пародонта.Обследованиепациентовсзаболеваниямипародонтавключало:определение нозологической формы, степени тяжести (легкая, средняя,тяжелая), характера течения заболевания (обострение, ремиссия); выявлениевозможных факторов (общих и местных), которые могли способствоватьразвитию воспалительного процесса в пародонте.
Как известно, традиционнуюоснову объективных клинических параметров составляет индексная оценкасостояния тканей пародонта, которая включает определение и расчет следующихобщепринятых индексов [17, 81, 111]:1. Упрощенного индекса гигиены ИГ (индекса Green — Vermillion).2. Папиллярно-маргинально-альвеолярного индекса (ПМА) (индекса C.Parma).3.
Модифицированного индекса кровоточивости ИК (индекса Mulleman).4. Пародонтального индекса ПИ (индекса A. Russel).5. Определение глубины пародонтальных карманов ПК (пуговчатымзондом).6. Определение патологической подвижности зубов (по Д. А. Энтину).7. Проведение рентгенологического исследования (ортопантомограммы)Учитывая, что индексная оценка состояния тканей пародонта, как известно,являетсямеждународным стандартом мониторинга развития патологиипародонта и контроля эффективности различных методов лечения, в своемисследовании мы проводили анализ взаимосвязей и возможных корреляциймеждуиндекснымииммунологическимиоценкамиимикробиологическими,параметрамиивыявленнымианарушениямитакжеэтих86параметров.2.3.
Характеристика стоматологических материаловДля проведения данного исследования были выбраны наиболеераспространенные в медицинской практике полимерные пластмассы дляпроизводства съемных зубных протезов и шинирования зубов на основеполиакриловых пластмасс марки «Фторакс» (Украина) и Temp Basic A195H16 (ZirkonZhan, Италия), сплав диоксида циркония (ZirkonZhan,Италия) состава ZrO 2 — 95,0%, Y 2 O 3—4,0% , Al 2 O 3 — < 1,0% , SiO 2 —0,02% , Fe 2 O 3 — 0,01%, , Na 2 O — 0,04%.При исследовании решали две основные задачи:1. Оценкапервичноймикробнойадгезиитест-штаммовидальнейшее формирование микробной биопленки;2.
Оценка колонизации шин из данных материалов, установленныхпациентам для лечения заболеваний пародонта.2.4. Характеристика штаммов микроорганизмовКлинические изоляты грамотрицательных и грамположительныхбактерий(P.aeuruginosa,S.aureus),какнаиболеезначимыемикроорганизмы в развитии различных воспалительных процессов,быливыбраныдляизученияпроцессоввзаимодействиямикроорганизмов с образцами пластмасс.Для изучения адгезии и моделирования биопленки анаэробных бактерийиспользовали штаммы — клинические изоляты следующих видов бактерий:Porphyromonas gingivalis и Tannerella forsythia (пародонтопатогенные виды 1порядка), Prevotella intermedia и Fusobacterium nucleatum (пародонтопатогенныевиды 2 порядка), Streptococcus sanguinis, Veillonella parvula, Enterococcusfaecalis, Actinomyces naeslundii (представители резидентной микробиоты полости87рта), а также дрожжевых грибов Candida albicans.В контрольных экспериментах использовали референтные штаммыStaphylococcus aureus АТСС 29213, Candida albicans NCTC 885-653 и CandidaKrusei ATCC 24408.Для модели экспериментального пародонтита у крыс в качествекандидатного пробиотика использовали референтные штаммы Veillonellaparvula ATCCTM 10790, Veillonella dispar 585/3, Streptococcus salivarius ATCCR13419 и Streptococcus salivarius K12.2.5.
Методы микроскопического исследования2.5.1. Световая и иммунолюминесцентная микроскопияСветовуюмикроскопиюосуществлялинаисследовательскомстереомикроскопе (для изучения колоний микроорганизмов, выросших напитательных средах) и микроскопе ECLIPSE 50i (Nicon, Япония) прииспользовании иммерсионного объектива.
Данная микроскопическая техникапозволяла проводить фотосъемку препаратов исследуемого материала (мазковчистых культур, колоний, содержимого пародонтального кармана и биопленок)на цифровую камеру, входящую в комплект микроскопа.Для иммунологических исследований использовали люминесцентнуюмикроскопию на данном микроскопе. В качестве исследуемого материала бралидесневую жидкость и смывы из пародонтального кармана с помощьюизотонического раствора хлорида натрия.
Для идентификации клеточныхрецепторов CD282 (TLR-2) / СD284 (TLR-4) использовали соответствующиемоноклональныеантителамеченныеFITC.Послефиксациипараформальдегидом готовые препараты исследовали на микроскопе ECLIPSE50i (Nicon, Япония) с увеличением в 1000 раз. Документировали свечение нацифровую камеру микроскопа.882.5.2. Сканирующая электронная микроскопияПосле инкубации образцы фиксировали10%-ным растворомнейтрального формалина.
Следует отметить, что в процессе подготовкиобразцов не применялитрадиционное для СЭМ обезвоживаниеспиртами или ацетоном. Отсутствие дегидратации образцов позволилосохранить их нативную структуру и в частности — структуруэкзоклеточного матрикса биопленок, на 90% состоящего из воды [256].Поверхностьобразцовизполиакрилаизучалитакжесиспользованием сканирующего электронного двулучевого микроскопаQuanta 200 3D (FEI Company, USA) в режиме высокого вакуума, приускоряющих напряжениях 5 и ЮкУ, с предварительным напылениемзолотом (999) в установке SPI-Module Sputter/Carbon Coater System (SPIInc. USA).2.5.3 Просвечивающая трансмиссионная электроннаямикроскопияДля оценки морфофункционального состояния бактерий, длительнонаходившихсяпроведеноОбразцынаповерхностиультраструктурноебылиприготовленыискусственныхисследованиепоматериалов,соскобовобщепринятойбылобиопленки.методикедляисследования методом ультратонких срезов и проанализированы впросвечивающем электронном микроскопе JEM 100В (JEOL Japan).Оценка жизнеспособности бактерий, сформировавших биопленкунасроках 1,5 и3мес., была проведена посредством посевабактериального налета с поверхности пластмасс в питательный бульон ина агаризированную среду LB (Luria-Bertani broth).892.5.4.
Сканирующая зондовая атомно-силовая микроскопияВ данной работе для исследований методом АСМ использовали зондовуюнанолабораторию «Интегра Прима» (ЗАО «НТ-МДТ», Россия). Для полученияизображения рельефа был использован метод полуконтактной сканирующейзондовоймикроскопии[43,56,146].Данныйметодоснованнавзаимодействии с поверхностью колеблющегося на резонансной частотекантеливера (лазерной иглы) с частотой несколько сотен кГц. Прииспользовании данного метода контактное давление кантиливера наповерхность существенно меньше по сравнению с контактными методами[20]. Это позволяет проводить измерения на мягких и легко разрушающихсяматериалах (таблица 6).Таблица 6Основные характеристики зондового атомно-силового микроскопа ирежимов работы при проведении экспериментального исследованияПараметрыРазмер образцаМасса образцаXY позиционирование образцаПоле сканирования — X × Y × ZНелинейность с датчиками обратнойсвязи (XY)Уровень шумов Z: СКВ в полосе 1000 ГцУровень шумов XY: СКВ в полосе 200ГцЗначениядо 100 мм — по диаметру,до 15 мм — по высотедо 300 г5 × 5 мм100 × 100 × 10 мкм0,15%0,06 нм ÷ 0,07 нмот 0,1 нм до 0,2 нм2.6.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
