Диссертация (1139571), страница 3
Текст из файла (страница 3)
baumannii. Установлено, что 82% изолятов являлись носителямикарбапенемазы OXA-72, а 15% изолятов – карбапенемазы OXA-23. В популяцииА. baumannii клона СС944Oxf наряду с OXA-23-позитивными изолятами показаноналичие носителей ОХА-72. Выявлено, что все CC944Oxf-изоляты А. baumannii, заисключением одного, обладали геном БЛРС blaCTX-M-115.Впервые проанализировано клональное разнообразие карба-Р изолятов K.pneumoniae.
Установлено, что среди них доминировали два сиквенс-типа – SТ395(37%) и SТ307 (24%), а основным механизмом устойчивости к карбапенемамбыла продукция карбапенемазы OXA-48, которая в большинстве случаевсочеталась с наличием БЛРС.Дополнены данные о популяционной структуре карба-Р P.
aeruginosa.Выявлено преобладание трех генотипов из числа международных клоноввысокого риска – SТ654 (30%), SТ235 (23%) и SТ111 (13%). Более 50% карба-Р P.aeruginosa продуцировали VIM-подобную МБЛ.На основе ретроспективного когортного исследования впервые былаописана динамика серотипового состава и профиля чувствительности кантибиотикам носоглоточных изолятов S. pneumoniae. Впервые в России была14полностью расшифрована композиция серотипов серогруппы 6; было показано,что наряду с распространенными серотипами 6А и 6В в циркуляцииприсутствовали серотипы 6С (1,3%) и 6D (0,9%), не входящие в состав ПКВ13.Получены новые сведения о молекулярных механизмах, определяющихрост резистентности S. pneumoniae и S. pyogenes к макролидам. Показаноувеличение распространенности ermB-механизма устойчивости, придающегобактериям MLSB-фенотип, т.е.
перекрестную устойчивость к макролидам,линкозамидам и стрептограмину В.Впервые получены данные о составе и эволюции клонального спектраизолятов S. pneumoniae серотипов 14 и 19А. Установлена связь между ростомрезистентности пневмококков серотипа 14 к пенициллину и макролидам склональными перестановками в циркулирующей популяции этих бактерий.В международных базах данных МЛСТ A. baumannii, K. pneumoniae, P.aeruginosa и S. pneumoniae аннотированы 43 новых сиквенс-типа и 14 новыхаллелей генов «домашнего хозяйства» (Таблица 1).Таблица 1Новые сиквенс-типы и аллели в международных базах данных МЛСТ дляштаммов A.
baumannii, K. pneumoniae, P. aeruginosa, S. pneumoniaeПатогенP. aeruginosaA. baumanniiSTГен (аллель)№ аллели2592aroE2192757aroE2261127gdhB1181128gpi2601130rec103rpoD107108106Ссылка[310]113111321129[93]15Продолжение таблицы 1ПатогенK. pneumoniaeS. pneumoniaeST302412624136651263512636126311366212621126181262112634126221263012632126301293112930136631366412619126201262312625126261262712629126331263712638136581365913660136611368713688Ген (аллель)rpoBspiaroxptrecgkigdhddl№ аллели159519574376377684822334516519523528512741742809810850851Новые комбинации известныхаллелейСсылка[233][278]16Теоретическая и практическая значимость работыВыявленные особенности микробиоты и знания о распространенностиустойчивых к антибиотикам госпитальных изолятов грамотрицательных бактерийвпедиатрическихстационарахпозволяютуточнитьспектрпрепаратов,используемых для эмпирической антимикробной терапии, и будут способствоватьповышению ее эффективности.
Данные о динамике колонизации обосновываютвнедрение мер инфекционного контроля при госпитализации пациентов в ОРИТ.Полученныеданныеогенетическихмеханизмахустойчивостикантибиотикам у ведущих госпитальных оппортунистических патогенов впедиатрических стационарах вносят фундаментальный вклад в пониманиеприроды резистентности грамотрицательных бактерий, а также обосновываютзначимость использования молекулярных методов для ее детекции.Исследование популяционной структуры генотипов карба-Р изолятовосновных возбудителей ИСМП при помощи метода МЛСТ позволило установитьих взаимосвязь с международными клонами высокого эпидемического риска, атакже выявить эндемичные клоны.Сведения о современном спектре серотипов S.
pneumoniae свидетельствуюто его высоком охвате существующими ПКВ, что позволяет прогнозироватьэффективность серотипспецифической вакцинации.Полученные данные о разнообразии генотипов S. pneumoniae и егодинамикевскрываютзакономерностиэволюциигенетическойструктурыпневмококковой популяции и указывают на то, что одним из важных факторовэтой эволюции является устойчивость к антибиотикам.Нарастание устойчивости S. pneumoniae к пенициллину и макролидамобосновывает необходимость динамического наблюдения за их популяцией.Доминирующий механизм резистентности S. pneumoniae и S.
pyogenes кмакролидам,аименноermB-опосредованноеметилированиемишениантибиотика, предопределяет перекрестную устойчивость ко всем макролидам, втом числе 16-членным, линкозамидам и стрептограмину В, что не позволяет17рекомендовать указанные группы антибиотиков для эмпирической терапииинфекций в детской популяции.
Сохранение на высоком уровне активностиамоксициллина в отношении S. pneumoniae подтверждает обоснованность выбораданного препарата и его модификаций в качестве основы эмпирической терапииострых респираторных инфекций бактериальной этиологии в педиатрии.По результатам исследования в международные базы данных внесенысведения о новых вариантах генотипов бактерий A. baumannii, K.
pneumoniae, P.aeruginosa и S. pneumoniae, которые будут способствовать осуществлениюмониторинга за циркуляцией актуальных бактериальных возбудителей.Результатыисследованийиразработоквнедренывнаучно-исследовательскую работу лаборатории молекулярной генетики и клеточнойбиологии и лаборатории микробиологии ФГАУ «НМИЦ здоровья детей»МинздраваРоссии,атакжевматериалылекцийпорациональнойантибактериальной терапии у детей, и используются в учебной программе накафедре педиатрии в ФГАОУ ВО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова МинздраваРоссии (Сеченовский Университет).Методология и методы исследованияМетодологиянастоящегоисследованияспланированасогласнопоставленной цели. Предметом исследования стали проблемы, связанные сувеличением антибиотикоустойчивости клинических штаммов A.
baumannii, P.aeruginosa и K. pneumoniae, выделенных у детей. Кроме того, былипроанализированы серотипы и профиль чувствительности к антибиотикамштаммов S. pneumoniae и S. pyogenes, выделенных у детей в г. Москве.Анализ научной литературы, посвященной проблеме, проведен на основеформально-логических методов исследования. Планирование и проведениеисследований, направленных на решение поставленных задач, осуществлялось наоснове общенаучных и специфических методов.18Положения, выносимые на защиту1. В педиатрических ОРИТ выявлено преобладание грамотрицательныхвозбудителей A. baumannii, P. aeruginosa, K. pneumoniae.2. Устойчивостьккарбапенемамграмотрицательныхбактерийпреимущественно обусловлена выработкой карбапенемаз: A.
baumannii –продукция OXA-72, ОХА-23, P. aeruginosa – VIM, K. pneumoniae – ОХА-48.3. Подавляющее большинство изолятов A. baumannii принадлежит к двумклональным линиям, СС92Oxf/СС2Pas и СС944Oxf/ST78Pas, представленным 14различными Oxford-сиквенс-типами.4. В популяционной структуре карба-Р изолятов P. aeruginosa лидировалипредставители пяти сиквенс-типов: ST111, ST235, ST446, ST654 и ST2592,которые суммарно составляли 78%.5. Шесть ведущих педиатрических серотипов S.
pneumoniae, включаясеротипы 3, 6А, 6В, 14, 19F и 23F, суммарно составили 63%.Множественнойустойчивостьюкантибиотикамобладают23%циркулирующих в Москве штаммов S. pneumoniae. Основная долярезистентных изолятов приходилась на пневмококки пяти наиболеераспространенных серотипов (6А, 6В, 14, 19F и 23F) и серотипа 19А.6. В последние годы произошло нарастание устойчивости стрептококков кмакролидам: S. pneumoniae до 35-45%, S. pyogenes до 15%.Личное участие автора в получении результатовЛичное участие соискателя в получении результатов, изложенных вдиссертации, заключалось в проведении микробиологической части исследования(культуральныйпосев,идентификациямикроорганизмов,определениерезистентности к антибиотикам диско-диффузионным методом и методом Етестов, определение минимальных подавляющих концентраций меропенема иимипенема, фенотипические методы определения МБЛ у грамотрицательных19бактерий и MLSв-фенотип у стрептококков) в лаборатории микробиологии ФГАУ«НМИЦ здоровья детей» Минздрава России.Молекулярно-генетическаячастьисследования(выделениеДНК,постановка ПЦР, учет и интерпретация результатов ПЦР) осуществлялосьавтором совместно со старшим научным сотрудником к.м.н.
Алябьевой Н.М. влаборатории экспериментальной иммунологии и вирусологии ФГАУ «НМИЦздоровья детей» Минздрава России. Секвенирование культур A. baumannii, P.aeruginosa, K. pneumoniae, S. pneumoniae проводилось совместно с к.б.н.Пушковым А.А. в лаборатории молекулярной генетики и клеточной биологииФГАУ«НМИЦздоровьядетей»МинздраваРоссии.Выявлениегеновкарбапенемаз проводилось совместно с к.б.н.
Савиновой Т.А. (лабораториямолекулярной микробиологии ФГАУ «НМИЦ здоровья детей» МинздраваРоссии).Биоинформатическаяобработкарезультатов(генетическихисследований) проводилась совместно с Маянским Н.А. (ФГАУ «НМИЦ здоровьядетей» Минздрава России), Карасевой О.В.
(«НИИ неотложной детской хирургиии травматологии» Департамента здравоохранения города Москвы).Внедрение результатов в практикуРезультаты исследований в качестве диагностических технологий внедреныв практическую работу подразделений ФГАУ «НМИЦ здоровья детей»Минздрава России, «НИИ неотложной детской хирургии и травматологии»Департамента здравоохранения города Москвы, ГБУЗ «Городская клиническаябольница № 15 им.
О.М. Филатова» Департамента здравоохранения городаМосквы.20Степень достоверности и апробация результатов исследованияО достоверности результатов работы свидетельствует использованиесертифицированных микробиологических методов, которые характеризуютсявысокой чувствительностью и специфичностью. Проведен достаточный объемисследований, что позволило корректно осуществить статистическую обработкуполученных данных. Комплексное молекулярно-генетическое определение геновβ-лактамаз позволило получить сопоставимые результаты с традиционнымимикробиологическими методами оценки чувствительности, что свидетельствует одостоверности полученных результатов.Диссертация апробирована на заседании лабораторного отдела НИИпедиатрии ФГАУ «НМИЦ здоровья детей» Минздрава России (протокол № 4 от22.12.2017г.).Материалы диссертации были доложены и обсуждены на XVII, XVIII, XIXКонгрессе педиатров России, Москва, 2014, 2015, 2016; на XVI, XVII, XVIII, XIX,XX Международных конгрессах по антимикробной терапии МАКМАХ/ESCMID,Москва, 2014, 2015, 2016, 2017; на 26 (Амстердам, 2016), 27 (Вена, 2017), 28(Мадрид, 2018) Европейском конгрессе по клинической микробиологии иинфекционным заболеваниям (ECCMID); на XIX, XX Кашкинских чтениях,Санкт-Петербург, 2016, 2017.Соответствие диссертации паспорту научной специальностиНаучные положения диссертации соответствуют формуле специальности03.02.03 – «микробиология», области исследований «Морфология, физиология,биохимия и генетика микроорганизмов».21ПубликацииРезультаты проведенного диссертационного исследования в полном объемеизложены в 22 научных работах, из которых 18 оригинальные статьи и четыреобзора литературы.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
