Н.А. Юрина, А.И. Радостина - Гистология (1135282), страница 50
Текст из файла (страница 50)
Срезокрашивают железным гематоксилином Вейгерта в течение 2 — 5 мин. Вместо гематоксилина Вейгерта можно использовать гематоксилин Эрлиха. Дифференцировки не требуется, так как срезы дифференцируются в пикрофуксине. Для приготовления раствора пикрофуксина к 100 мл насыщенного водного раствора пикриновой кислоты добавляют 10 мл 1% водного раствора кислого фуксина. Раствор пикрофуксина хранится длительное время. После окрашивания железным гематоксилином срезы ополаскцвают в дистиллированной воде и переносят в пикрофуксин на 3 — 5!мин. Затем промывают дистиллированной водой, обезвоживают в спиртах, начиная с 96%, проводят через ксилол и заключают в бальзам.
В воде смывают фуксин. Если пропустить промывку в воде — обсушить срез фильтровальной бумагой, что иногда делают, мышечная ткань может быть окрашена в розовый цвет, а не в желтый, как полагается. Если промывать в воде слишком долго, фуксин смывается полностью. Пикриновая кислота смывается в спирте, поэтому обезвоживать нужно быстро. В результате окрашивания ядра клеток должны быть темно-коричневыми (или темно-фиолетовыми при окрашивании гематоксилином Эрлиха), коллагеновые волокна — красными, мышечная ткань, цитоплазма различных клеток и эритроциты— желтыми.
Приготовление тотальных препаратов В некоторых случаях объект исследуют целиком без приготовления срезов и, следовательно, без предварительного уплотнения. Обычно такими объектами являются тонкие структуры — серозные, мозговые, зародышевые оболочки, тонкостенные сосуды и т. д. Препараты объектов, исследуемых целиком, называются тотальными. При изготовлении тотальных препаратов сальника, брыжейки, мозговых оболочек из них вырезают кусочки и опускают в фиксатор. При изучении зародышевых оболочек можно ввести фиксатор шприцем в амнион.
Если орган может при фиксации изменить свою форму и деформировать покрывающую его оболочку (например, серозную оболочку передней брюшной стенки), его прикалывают стеклянными иглами оболочкой вверх к пластинке пробки и опускают в фиксатор объектом вниз. При исследовании сосуда фик- ааз сирующую жидкость вводят на некоторое время в его просвет, затем сосуд разрезают вдоль, материал накалывают на пробку эндотелием вверх и фиксируют описанным выше способом. Окрашивание н заключение тотальных препаратов производятся так же, как ненаклеенных целлоидиновых и замороженных срезов. ОБРАБОТКАБИОПСИЙНОГО МАТЕРИАЛА Биопсия — это взятие материала от живого организма с целью морфологического исследования.
С помощью биопсий уточняется диагноз, а также оцениваются степень поражения органа патологическим процессом, стадия процесса. Материал при этом может быть получен во время хирургического вмешательства, путем приготовления соскобов с поверхности слизистой оболочки исследуемого органа, с помощью пункций — взятия материала с помощью специальных игл (пункция грудины для взятия костного мозга, пункции лимфатических узлов, печени, почек), использованием для взятия кусочка слизистой оболочки полых органов приборов, предназначенных для осмотра внутренней поверхности этих органов (гастроскопа, бронхоскопа, ректоскопа и др.). Порядок регистрации поступившего в патологоанатомическую лабораторию материала, его маркировки, описания и хранения определяется правилами, установленными Министерством здравоохранения РФ. Биопсийный материал обрабатывают в течение 3 — 4 дней.
Однако во время операции по поводу опухоли неизвестной природы нередко бывает необходимо проведение срочной (экстренной) биопсии, когда на основании данных морфологического исследования хирург решает вопрос о необходимом объеме операции: удалить ли только опухоль или значительную часть окружающей здоровой ткани, а может быть и весь пораженный орган с региональными лимфатическими узлами. В этом случае за 15 мин материал должен быть зафиксирован, нарезан„покрашен и заключен. Врач описывает материал макроскопнчески, вырезает из него, если он достаточно велик, наиболее характерный кусочек (или кусочки) и поручает лаборанту его дальнейшую обработку.
Кусочек кладут в пробирку и заливают небольшим количеством 10'/~ формалина (кислого нли нейтрального). Пробирку 2 — 3 раза нагревают до появления пара и пузырьков (не доводя до кипения), промывают в течение 2 мин в проточной воде и режут на замораживающем микротоме. Замороженные срезы переносят на несколько секунд в 96% спирт, затем в дистиллированную воду, окрашивают гематоксилин-эозином, обезвоживают и заключают в бальзам. Если ответ может быть дан в течение суток, фиксацию можно проводить формалином в термостате при 56 — 60' С в течение 2 ч, промывку осуществляют в проточной воде в течение 30 мнн и дальнейшую обработку проводят, как описано выше.
Вместо уплотнения с помощью замораживания можно использовать быструю заливку в парафин. Приэтомкусочки 224 толщиной не более 2 мм фиксируют в безводном ацетоне (2 порции) в течение 2 — 3 ч„переносят на 20 — 30 мин в хлороформ, на 20 — 30 мин в хлороформ-парафин прн 37' С, затем в парафин 1 н парафин 11 по 30 мин — 1 ч в каждом н осуществляют заливку. Весь процесс занимает 5 — 6 ч. Ускоренная заливка в целл о и дни более продолжительна, чем парафиновая. Кусочек материала толщиной не более 2 мм фиксируют в жидкости Карнуа в течение 2 — 4 ч (или в двух порциях 96'/о спирта по 3 — 4 ч), обезвоживают в абсолютном спирте 3— 4 ч, переносят в густой (10'/о) целлоидин на 12 — 18 ч (на ночь), затем кусочки вынимают нз целлоидина, переносят на деревянные кубики (с избытком целлоидина и даже немного наливая его сверху на кусочки) „оставляют подсыхать на воздухе 20 — 60 мнн н погружают в хлороформ на 30 — 60 мин.
После 10 мин пребывания в хлороформе для лучшего уплотнения кусочка внутри самого материала целлоидин над кусочком срезают, обнажая материал. Залитые блоки переносят в 70'/о спирт, режут н окрашивают обычным способом. При срочной заливке в целлоидин материал получается менее плотный, чем при обычной заливке, поэтому обычно не удается получить срезы тоньше 15 мкм. Гистологическое исследование соскобов слизистой оболочки матки. Соскобы слизистой оболочки матки представляют собой массу, состоящую из различных по величине обрывков ткани, пропитанных кровью.
Материал фиксируют 10% раствором формалина или 96% спиртом и заливают в парафин или целлоидин (целлоидин предпочтительнее). При небольшом объеме материала его обрабатывают целиком. Если масса материала большая, его разбирают, подбирая различные по характеру кусочки. Кусочков нужно стараться взять больше с тем, чтобы поверхность готового блока составляла 1,5 — 2 смз.
Благодаря своей рыхлости материал хорошо поддается ускоренным методам заливки. Принимая во внимание неоднородность материала, срезы необходимо делать с разной глубины блоков. Мазки костного мозга, пунктатов других органов кроветворения, экссудатов исследуются с помощью методов, описанных в главе 6. ЦИТО- И ГИСТОХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ Цито- и гнстохимические методы предназначены для выявления химического состава клеток н тканей. При биохимическом исследовании компоненты клетки отделяются друг от друга путем разрушения клеток н дифференциального центрифугнрования, и затем производится их биохимический анализ.
Суть гистохнмнческого исследования заключается в том, что распределение отдельных химических компонентов клеток и тканей изучается с помощью реакций„проводимых непосредственно на гистологических срезах. При этом известен точный химический механизм этих реакций. Для проверки специфичности реакции часто применяют ферментатив- 225 ный контроль.
Например, ШИК-реакция окрашивает не только гликоген, но и другие углеводные соединения. Если на одном срезе провести ШИК-реакцию, а соседний срез предварительно обработать амнлазой (фермент, разрушающий гликоген), а потом осуществить ШИК-реакцию, то отсутствие окраски на втором срезе подтвердит специфичность реакции, т. е. наличие гликогена. Гистохимическое выявление ферментов основано на обнаружении результатов ферментативной активности. Вследствие ферментативной активности нз субстрата в определенных условиях может возникать окрашенный продукт илн такой продукт, который может быть превращен в цветной и таким образом обнаружен на срезе. Методика проведения некоторых гнстохимическнх реакций приведена в соответствующих главах.
Например, реакции на гликоген„ нукленновые кислоты и активность некоторых ферментов описаны в главе 3, реакция на активность ацетилхолинэстеразы — в главе 11 ит. д. РАСТВОРЬЬ ОСМОТИЧЕСКОЕ ДАВЛЕНИЕ. БУФЕРНЫЕ СМЕСИ Раствором называется однородная смесь, состоящая из распюрителя, растворенного вещества и продуктов их взаимодействия. Концентрацией раствора называется количество растворенного вещества, содержащееся в определенном количестве растворителя. Чаще всего концентрацию выражают в весовых процентах. Например, чтобы приготовить 10% раствор какого-то вещества, нужно взять 10 г этого вещества и 90 г воды. Масса 1 мл чистой воды равна 1 г, поэтому 90 г и 90 мл воды — это практически одно и то же. Мол я рный раствор — это раствор, содержащий 1 моль распюренного вещества в 1 л распюра.
М о л ь — количество граммов растворенного вещества, численно равное его молекулярной массе. Например, молекулярная масса ХаОН равна 40 (Ха— 23, Π— 16, Н вЂ” 1). Следовательно, 1 моль ХаОН равен 40 г. Нормальный раствор — это раствор, в 1 л которого содержится 1 г растворенного вещества.
Грамм-эквивалентом вещества называется количество граммов вещества, эквивалентное в химических реакциях одному грамм-иону водорода. М о л я р н о с т ь вещества в растворе (молярная концентрация) равна числу граммов вещества в растворе, деленному на его молекулярную массу. Общая молярность раствора равна сумме молярных концентраций растворенных веществ. Если два раствора разной молярности разделены полупроницаемой мембраной (проницаемой для воды, но не для растворенных в ней веществ), то вода будет проходить через мембрану в более концентрированный раствор, пока молярность не уравняется.
Это явление называется о с м о с о м. Если молярностн двух растворов, разделенных полупроницаемой мембраной, равны, вода не переходит из одного раствора в другой. Такие растворы 22В Т а б л н д а 1. Притотоалеиие иориалвиввк раеваороа сериоа, хлориетоаодородиой и ав«твой кислот пво Р. Лолли, 3969) Концснврацна Ъ,н,.„,„д,д,) рдддвщр„, ' 1г'.в в7~0) " Серная кислота 95 35,51 96 35,93 97 36,31 98 36,68 99 37,03 100 37,34 1,8337 1,8355 1,8364 1„8361 1,8342 1,8305 28,2 27,86 27,6 27,3 27,1 26,8 называют изоосмотическими. В биологии все значительно сложнее, так как клеточная мембрана не является в полном смысле слова полулроницаемой.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
