Н.А. Юрина, А.И. Радостина - Гистология (1135282), страница 46
Текст из файла (страница 46)
Затем материал переносят на 2 — 7 дней в баночку с притертой пробкой, содержащей 2% целлоидин (2 г целлоидина на 100 мл спирта с эфиром в отношении 1:1)— жидкий целлондин, после чего материал помещают нй такой же срок в 4'/о (4 г целлоидина на 100 мл спирта с эфиром) и 8% (8 г целлоидина на 100 г спирта с эфиром) целлоидин. При растворении целлоидина лучше сначала залить его соответствующим количеством спирта, а через 24 ч добавить равное количество эфира. Из густого целлоидина кусочки материала помещают в глубокую чашку и заливают густым (8 — 10%) целлоидином. Чашку накрывают крьппкой или стеклянной пластинкой, под которую подкладывают полоску бумаги для того, чтобы растворитель постепенно испарялся и целлоидин уплотнялся.
Этот процесс занимает 2 — 3 дня, прн этом объем целлоидина уменьшается наполовину и больше. Необходимо наливать целлоидин в чашку с таким расчетом, чтобы после уплотнения над кусочком находился слой целлоидина в 2 — 3 мм. Для ускорения уплотнения целлоидина можно на следующий день накрыть чашку стеклянным колпаком, поместив под него открытую склянку с хлороформом или ватку, смоченную хлороформом. Если на поверхности целлоидина образуется пленка, ее следует удалить, чтобы глубокие слои целлоидина равномерно уплотнялись. Хорошо уплотненный целлоидин имеет консистенцию мягкой резины и почти прозрачен. Помутнение целлоидина свидетельствует о плохом обезвоживании, при этом процедуру следует повторить, освободив материал от целлоидина в спирте с эфиром.
Наклеивание блоков на деревянный кубик. За заливкой в парафин или в целлоидин следует наклеивание блоков. При наклеивании парафиновых блоков после удаления металлической формы или бумажной коробочки лезвием безопасной бритвы или острым скальпелем вырезают парафиновые блоки так, чтобы материал был окружен со всех сторон слоем парафина толщиной 1 — 2 мм. 20в После этого с помощью горячего металлического шпателя расплавляют на деревянном кубике немного парафина, прикасаются нагретым шпателем к нижней поверхности блока и придавливают блок к кубику. Прн наклеивании целлоиднновых блоков следует учесть, что блоки после наклеивания хранят в 70% спирте, который экстрагирует из дерева вещества, вредно влияющие на целлоидин и исследуемый материал, поэтому кубики используют дубовые или березовые (не сосновые!), кипятят несколько раз в воде со спиртом, высушивают и помещают в сменяемый 2 — 3 раза спирт-эфир.
Подготовленные таким образом кубики пригодны для наклеивания целлоидиновых блоков. Перед наклеиванием блок вырезают острым ножом н погружают его нижнюю поверхность на 1 — 2 мин а спирт-эфир. На вынутый из спирта с эфиром деревянный кубик капают несколько капель густого целлоидина н придавливают к нему блок. После наклеивания блок в течение 5 — 10 мин держат на воздухе, затем опускают в 70% спирт. Целлоиднновые блоки хранятся в 70% спирте длительное время. Приготовление гистологических срезов Для получения тонких срезов, пригодных для гистологического исследования, используют специальные приборы, называемые м и крото м а ми. Для резания парафиновых и целлоиднновых блоковприменяют санныеи ротационные микротои ы.
Санными называются микротомы, у которых нож и объектодержатель помещаются на салазках и скользят по рельсам. В санном микротоме различают станину, в верхней части которой имеются две илн три шлифованные поверхности (рельсы), по которым двигаются ножевые салазки (рис. 79). На боковой поверхности располагаются пластины, по которым двигаются объектные салазки.
М н кроме три ч е с ки й в инт представляет собой стержень с нарезкой, служащий для подачи блока под нож. Установив на специальной шкале определенное количество делений, можно регулировать толщину срезов (т. е. высоту, на которую микрометрический винт подает объект после каждого среза). Блок закрепляют в о б ъе ктод ержател е — зажиме для блока, расположенном на объектных салазках. Зажим чаще всего состоит из 2 рамок: наружной и внутренней. Блок зажимают на внутренней рамке между ее неподвижной стенкой и скользящей щечкой.
Рамки могут совершать качательные движения по переднезадней и поперечной осн, что позволяет расположить верхнюю поверхность блока горизонтально. Каждая рамка имеет свой винт и свою ручку-фиксатор для закрепления в желательном положении. В передней части салазок объектодержателя имеется металлическая пластинка, в которой находится канал для стержня объектодержателя. Стержень закреплен в канале винтом, отпуская который можно поднимать н опускать объектодержатель.
Ножевые салазки (ползун) снаб- 209 I ф Рис. 79. Санный микротом (А) и положение ножа при резке (Б). дм 1 — станина; 2 — ножевые салазки с ножом; 3 — мщсрометрический винт; 4 — дамка с ограничителем; 5 — объектные салазки с обьектодержатслем (но В. Г, Елисееву и др., 1967). Б: а — угол левана; б — режущий угол; в — верхний угол скоса; г — нижний угол скоса; д — угол наклона леван» (но Б. Ромейсу, 1952).
жены зажимом для ножа. Зажим позволяет зафиксировать нож под определенным углом к плоскостирезания. Приготовление замороженных срезов. Замороженные срезы получают с помощью замораживающих микротомов или в криостате. Замораживающий микротом снабжен замораживающим столиком, на котором замораживается объект. В столике имеются камера и приспособление для подачи в камеру углекислоты„соединенное специальным шлангом с баллоном, в котором находится углекислота. Баллон закрепляется вверх дном в вертикальном положении на специальной подставке.
Вместо углекислотной установки для замораживания тканей может быть использован термоэлектрический охлаждающий столик (ТОС). Более быстро и лучшего каче- 210 ства срезы можно получить в криостате. К р и о с т а т представляет собой холодильник, в котором поддерживается температура минус 5'С вЂ” 40'С. Чаще всего рабочей температурой является температура минус 14'С вЂ” минус 20'С. В холодильник вмонтированы микротом (криотом),имеется освещение. В передней стенке криостата имеется окошечко, в боковых стенках — отверстия с рукавами для рук оператора. Микротом в криостате обычно ротационный, ткани примораживаются к латунным держателям„держатель фиксируется на специальном стержне.
Микротомный нож закреплен неподвижно, а объект при резке подводится к ножу. Существуют различные методы дальнейшей обработки срезов: 1) срез снимают на теплое (с температурой, равной комнатной) илн холодное (с температурой, равной температуре крностата) покровное илн предметное стекло и фиксируют в момент таяния; 2) срез снимают на теплое или холодное покровное илн предметное стекло, дают ему оттаять н подсушивают на воздухе, после чего он может быть фиксирован или не фиксирован в зависимости от дальнейшего исследования; 3) срез переносят в теплый или холодный раствор реактива (инкубационной среды при гнстохимическом исследовании ферментов); 4) срез переносят в банку с теплым или холодным фиксатором„5) срез подвергают лиофильной сушке.
Микро томные ножи бывают прямые (когда обе стороны ножа плоские) и плосковогнутые (одна сторона плоская„другая — вогнутая). Первые применяются для получения парафиновых, вторые — для получения целлоидиновых срезов. Кроме того, существуют двояковогнутые микротомные ножи. В месте пересечения плоскостей широких поверхностей микротомного ножа образуется угол, называемый у г л о м л е з в и я(см. рис. 79). Микротомные ножи затачиваются под углом, большим, чем угол лезвия, н этот угол заточки называется режущим углом.
Плоскости заточек микротомного ножа, образующие режущий угол, получили название фасеток. Ширина фасеток должна быть 1,5 — 2 мм. Точка ми кр от о ми ы х ноже й имеет важное значение в работе лаборанта-гистолога, так как именно от состояния ножа зависит качество среза. Ножи подвергают электролитической точке либо точат на точильных камнях. Электролитическая т о ч к а основана на растворении металла в электролите под действием электрического тока. При этом режущий край истончается и образуется фасетка. Точка на точильных камнях производится на брусках бельгийского камня с мелким зерном и затем на белом камне — арканзасе с еще более мелким зерном. На стержень ножа надевают ручку, а на спинку прямого ножа — обушок (рис.
80, А, Б). Плосковогнутые ножи точат с направителем, наложенным на плоскую поверхность, а двояковогнутые ножи — без обушка и без направителя. У каждого ножа должен быть свой постоянный обушок или направитель. Точку производят на смазочном вазелиновом масле или воде. Чем плотнее среда, на которой точится нож, тем точка идет медленнее, но фасетка получается ровнее. Можно начи- 211 Рнс. БО. Заточка ьзикротомных ножей. А — инструмент двл заточки микротомимх ножей; а — ручка; б — обушок дл» точки микротомного ножа (ло В.
Г. Елисееву и др., 19бу); Б — аорлдок вождении микротомиого ножа оо точильному иамию (ио Д. Кисели, 1962). пать точку на воде, а заканчивать — на масле. Точат нож на камне, начиная от ручки, всегда продвигая лезвием вперед. Лезвие ножа ведут от одного края бруска до другого так, чтобы через этот последний край нож прошел своим концом, затем перевертывают нож через обушок и таким же образом проводят другой стороной ножа по бруску (см. рнс. 80, Б).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
