А.И. Нетрусов, М.А. Егоров - Практикум по микробиологии (1125598), страница 7
Текст из файла (страница 7)
Культуры на плотных питательных средах мсокно заливать на сутки дезинфицирующим раствором, после чего их вь|брасывают и посуду моют. Неаккуратное обращение с культурами микроорганизмов приводит к возникновению бакгериального аэрозоля. 2.3. ВЕДЕНИЕ ЛАБОРАТОРНЫХ ЗАПИСЕЙ Журнал лабораторных работ является документом, позволяющим контролировать правильность полученных результатов.
В нем должны быть записаны сведения, имеющие отношение к выполнению данной работы. Запись необходимо вести четко, аккуратно и в определенном порядке, например: 1. Название опьгга и его цель, дата постановки и окончания. 2. Обьект исследования. 3. Условия проведения опыта.
4. Основной принцип используемого метода анализа. 5. Полученные результаты. Цифровой материал приводят в таблицах. Если необходимо, делают граФики, диаграммы, рисунки. Каждая лабораторная работа должна заканчиваться собственными наблюдениями и выводами, записанными в журнале. Журнал является собственностью лаборатории, в которой проводилась работа, и всегда хранится в лаборатории.
РАЗДЕЛ И ПРИНЦИПЫ ВЫДЕЛЕНИЯ И ИЗУЧЕНИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ Глава 3 СОСТАВЛЕНИЕ СРЕД И КУЛЬТИВИРОВАНИЕ МИКРООРГАНИЗМОВ Культивирование микроорганизмов является одним из основных методов микробиологии. От умения культивировать микроорганизмы в лабораторных условиях в значительной степени зависят успехи их изучения и практического применения. Культивирование основано на знании метаболизма микроорганизмов и понимании значения физико-химических условий среды, необходимых для их жизнедеятельности. 3.1. ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ Потребности микроорганизмов в питательных веществах чрезвычайно разнообразны и определяются особенностями их метаболизма. Во-первых, питательная среда должна включать доступный для клетки источник энергии.
Для одних организмов (фототрофов) таким источником служит свет, для других— органический (хемоорганотрофы) или неорганический (хемолитотрофы) субстрат. Во-вторых, среда должна содержать все необходимые компоненты для реализации конструктиених процессов в клетке, причем. синтетические способности микроорганизмов могут варьировать от использования СО, в качестве единственного источника углерода (автотрофы) до потребности в более восстановленных соединениях углерода — кислотах, спиртах, углеводах и др. (гетеротрофы). Последние чаше всего получают и углерод, и энергию, мстаболизируя одно и то жс органическое соединение, т.е., строго говоря, являются хемоорганогетеротрофами. По способности использовать те или иные источники азота микроорганизмы также существенно отличаются друг от друга. Одни из них довольствуются молекулярным азотом воздуха и не требуют добавления в среду каких-либо азотсодержащих соединений.
Другие требуют присутствия в среде неорганических солей азота. Третьим нужна одна или несколько аминокислот. Отдельные аминокислоты в ь'- или 11г,-форме добавляют к сгерильной среде в концентрации от 0,1 до 0,05 г на 100 мл непосредственно перед засевом ес микроорганизмами.
Для этого рекомендуется использовать растворы аминокислот, в 31 которых концентрация превышает содержание аминокислоты в среде в ! 00 раз. Глицин, алании, пролин, лизин и орнитин растворяют в дистиллированной воде, фенилаланин и триптофан — в дистиллированной воде, подщелоченной ХаОН, остальные аминокислоты — в дистиллированной воде, подкисленной НС1.
Аминокислоты — цистин и цистеин, а также амиды — глутамин и аспарагин неустойчивы к нагреванию, поэтому их стерилизуют фильтрованием. Остальные аминокислоты можно стерилизовать при 0,5 ати* в течение 15 мин. Потребности микроорганизмов в некоторых аминокислотах часто удовлетворяют, добавляя к среде гидролизат белка. Состав гидролизатов неодинаков и зависит от исходного субстрата, а также способа получения. Чаще других используют гидролизат казеинп, который готовят в лаборатории, как правило, кислотным гидролизом, еше чаще используют готовый препарат гидролизата казеина или готовят его в лаборатории (см.
приложение 4). Его вносят в среду от 1,0 до 0,1 г на ! 00 мл в зависимости от потребности микроорганизмов. Наиболее требовательные организмы культивируют на средах„содержащих белки или продукты их неполного расщепления — нентовы, представляющие собой смесь поли- и олигопептидов, аминокислот, органических азотных оснований, солей и микроэлементов. Пептоны получают в результате воздействия протеолитических ферментов на белки животного или растительного происхождения.
В питательныс среды пептон добавляют в количестве от 1 — 2 до 20 г на 1 л. Необходимо иметь в виду, что аминокислоты и пептон могут использоваться микроорганизмами не только как источник азота, но и как источник углерода и энергии. Многие микроорганизмы требуют наличия в среде так называемых факто,ров роста, к которым относятся пурииы, иирииидины и аминокислоты.
Чтобы подчеркнуть потребность микроорганизмов в факторах роста, принято использовать термины «прототрофы» и «ауксотрофы». Проеознро45ы не нуждаются в факторах роста, для ауксоиЧхзфов абсолютно необходимо наличие в среде одного или нескольких факторов роста. Этим термином особенно широко пользуются в литературе по генетике. Если потребности микроорганизмов в факторах роста ограничены одним или несколькими вшяаминами, то рекомендуется вносить их в культуральные среды, используя следующие концентрации: тиамин (витамин В,), пантотенат Са, рибофлавин (витамин Вз), никотиновая кислота (ниацин), пиридоксин, пиридоксамин, холин, кобаламин (витамин Вп)— по 1 мкг на 1 мл среды; фолиевая кислота и пара-аминобензойная кислота— 0,05 мкг на 1 мл среды; биотин — 0,005 мкг на 1 мл среды. Витамины добавляют к стерильной среде непосредственно перед ее засевом. Для этого рекомендуется использовать растворы, в которых концентрация витамина превышает его содержание в среде в 100 раз.
Растворы готовят в стерильной посуде и используют стерильную дистиллированную воду. Исключение составляют рибофлавин и фолиевая кислота. Рибофлавин расгворяктг в 0,02 н. уксусной кислоте, а фолиевую кислоту — в 0,01 н. ХаОН, доводя затем концентрацию )з1аОХ в растворе до 0,001 н. Полученные растворы стерилизуют прогреванием в кипящей водяной бане 3 мин. Раствор тиамина рекомендуется стерилизовать фильтрованием, так как при нагревании тиамин разрушается.
При 32 * «ати» вЂ” атмосферное давление избыточное. температуре 4 'С растворы витаминов сохраняются не менее месяца. Растворы Фолиевой кислоты, пиридоксина и рибофлавина хранят в темноте, так как они чувствительны к свету. Примерами смесей, содержащих разлнчныс факторы роста, могут служить дрожжевой экстракт, дрожжевой автолизат, а также кукурузный экстракт. Дрожжевой экстракт вносят в среду для культивирования от 0,05 до 0,5 г на 100 мл, дрожжевой автолизат — в таком количестве, чтобы концентрация аминного азота составляла 5 — 30 мг на 100 мл среды.
Дрожжевой экстракт имеется в продаже. Дрожжевой автолизат легко приготовить в лабораторных условиях (см. приложение 4). Кукурузный экстракт — готовый продукт заводов крахмалопаточной промышленности. Он содержит аминокислоты, витамины, большое количество органических кислот (молочной, уксусной и муравьиной) и минеральные соли. Кукурузный экстракт вносят в среды в количестве от 0,2 до 5%; стерилизуют при 0,5 ати. Для построения вещества клетки микроорганизмам необходимы фосФор, сера, калии и ряд других элементов. Они должны содержаться в питательной среде в досгупной для микроорганизмов Форме. Потребности разных групп микроорганизмов в сере, фосфоре и других зольных элементах удовлетворяются обычно за счет минеральных солей. Поэтому «минеральный Фон» сред для культивирования многих микроорганизмов может быть близким по составу.
Так, потребности значительного числа микроорганизмов в сере удовлетворяются сульфатами, хотя в клетке сера находится в основном в восстановленной Форме, в виде сульфгидрильных ~руин. Значительно реже встречаются микроорганизмы, требующие наличия в среде восстановленной серы. В этом случае в среду вносят сульфиды, чаще всего Хазб, или органические соединения, содержащие сульфгидрильные группы, например цистеин. Соли фосфорной кислоты удовлетворяют потребности микроорганизмов в Фосфоре.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
