А.И. Нетрусов, М.А. Егоров - Практикум по микробиологии (1125598), страница 5
Текст из файла (страница 5)
Влияние микроорганизмов не всегда позитивно: некоторые из них вызываот тяжелые заболевания у человека, животных и растений. Нередки случаи, когда микроорганизмы приводят к порче сельскохозяйственной продукции, эазрушению подземных частей зданий, трубопроводов и металлических конструкций шахт. Изучение свойств таких микроорганизмов позволяет разработать эффективные способы защиты от вызываемых ими повреждений. С другой =тороны, положительное значение микроорганизмов в хозяйственной деятельности человека невозможно переоценить.
С помощью грибов и бактерий готовят хлеб, вино, пиво, квас, молочные продукты, закваски. При участии микробов получают ацетон и бутанол, уксус, лимонную кислоту, некоторые вита..шны. ряд ферментов, антибиотики и каротиноиды. Микробы участвуют в трансформации стероидных гормонов и других соединений. Их используют ггчя получения белка и ряда аминокислот. Реализуется идея использования .шкробных ферментов в диагностических целях. Применение микробных комплексов для превращения сельскохозяйственных отходов в биогаз (смесь метана и углекислоты) или этанол открывает возможность создания принципиально новых систем восполнения энергетических ресурсов. Микроорганизмы используют для целей гидрометаплургии, извлекая металлы из беднь|х руд 23 или труднодоступных месторождений.
В последние годы микроорганизмы, особенно прокариоты, широко применяют в качестве объектов генной инженерии для клонирования генов н создания векторов, экспрессии гетерологичных белков. Потенциал микроорганизмов в практическом отношении неисчерпаем. Углубление знаний о жизнедеятельности этих микроскопических, но макро- значимых существ открывает новые направления их эффективного использования в биотехнологии. Глава 2 УСТРОЙСТВО 11лИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ЛАБОРАТОРИИ И ПРАВИЛА РАБОТЫ В НЕЙ Микробиологи имеют дело с популяциями (культурами) микроорганизмов, состоящими из миллионов особей. Культуру, содержащую микроорганизмы одного вида, называют частой. Если в культуре содержится более одного вида микроорганизмов, она носит название смешанной.
В микробиологической практике используют главным образом чистые культуры микроорганизмов. Ввиду того что в воздухе и на поверхности предметов (на столах, инструментах, одежде), а также на руках, волосах и т.д. всегда имеется большое количество разнообразных микроорганизмов, следует постоянно заботиться о сохранении чистоты изучаемых культур. Требование чистоты культур в значительной степени определяет специфику устройства микробиологической лаборатории и правила работы микробиолога. Микробиологическая лаборатория включает ряд помещений, где проводят работу с микроорганизмами или подготовку к ней. Под лабораторные комнаты отводят наиболее светлые, просторные помещения, естественная освещенность которых должно составлять не менее 110 лк.
Поверхность столов и пол всех лабораторных помещений покрывают легко моющимся материалом — пластиком или линолеумом, а стены на высоту 170 см от пола окрашивают в светлые тона. Основное рабочее помещение оборудовано столами лабораторного типа, шкафами и полками для хранения аппаратуры, посуды и реактивов. Столы имеют подводку электроэнергии и снабжены газовыми горелками. Кроме основного рабочего помещения лаборатория имеет стерилизационную, где размещены автоклавы и сушильные шкафы, термостатированную комнату лля выращивания микроорганизмов, помещение для хранения культур микроорганизмов, холодильную комнату, моечную и т.д.
Пересевы микроорганизмов осуществлшот в боксах разных конструкций — от изолированных помещений до настольных камер (ламинароа), чистота атмосферы рабочего пространства в которых обеспечивается циркуляцией стерильного воздушного потока внутри камеры. Работа в ламыыарыом боксе. Конструкция ламинарного бокса позволяет стерильно работать с микроорганизмами в нестерильном помещении. Лалшнарлые боксы бывают двух степеней защиты — класса 1 и класса П.
Ламинары класса 1 24 Рис. 2.1. Ламииарььый бокс (поясиеиие в тексте) оборудованы притяжной вентиляцией нестерильного воздуха из помещения и выходом этого воздуха в то же помещение после фильтрации (защита от микробных аэрозолей) и в строгом смысле слова не пригодны лля стерильной работы. Ламинары с защитой класса 11 (рис. 2.1) образуют внутри бокса поток стерильного воздуха, забор которого происходит из помещения, и который стерилизуется, проходя через бактериальные фильтры. Таким образом, внутренние поверхности бокса остаются стерильными. Конструкция позволяет также проводить стерильные посевы микрооргаыизмов в струе стерильного воздуха, прошедшего через бактериальные фильтры и распределенного внутри ламинара в виде ламинароного потока (без завихрений). Работа в ламинаре, однако, предполагает использование асептической техники (работа у пламени горелки).
Перед началом работы ламииар должен быть вымыт с помощью растворов нейтральных детергеитов и все доступные внутренние его поверхности должны быть простерилизоваиы химическими дезиифектантами (70%-й этанол). В течение рутинной работы ламииар необходимо мыть раз в месяь 1, снимая съемные детали поверхности и прочищая пространство под ними. После промывки панели прибора вновь стерилизуют этанолом. Бактериальные филюры ламииара необходимо подвергать процессу химической дезинфекции один раз в течение 1 — 2 мес в зависимости от интенсивности использования.
Химическую дезинфекцию впузреььььей поверхности ламииара и в особенности его фильтров проводят парами формальдегида. С этой целью 50 мл 37%-го раствора формальдегида (формалин) наливают в фарфоровую чашку, ставят иа подставку и нагревают чашку лля медленного (30 мин) испарения формальдегида. Воздушный насос ламииара должен быть при этом включен для равномерного распределения паров дезиифектаита по внутреннему объему камеры, воздушььюь заслонка выхода воздуха закрыта, так же как и передняя крышка прибора.
При стерилизации ламииара люди должны покинуть помещение. После полного испарения формалина нагреватель и воздушиьш насос выключают, ламипар оставляют иа сутки для дезинфекции и затем проветривают его от остатков паров формальдегида. Для этого открывают передикло крышку прибора, включают воздушный насос и открывают заслонку выхода воздуха. Прибор осгавляют в рабочем состоянии иа 15 — 20 мии, и далее ои готов к работе. При продувке прибора от паров формальлегида помещение необходимо хорошо проветрить, а люди на это время должны его покинуть.
2.1. ПОДГОТОВКА МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ЛАБОРАТОРИИ К РАБОТЕ Микробиологическую лабораторию необходимо содержать в чистоте. В ней не должно находиться никаких лишних предметов. Следует регулярно проводить гигиеническую уборку лабораторных помещений. Обеспечить полную стерильность лаборатории очень трудно и это не всегда необходимо, но значительно снизить количество микроорганизмов в воздухе и на различных поверхностях в лабораторных помещениях возможно.
Для этого применяют различные способы дезинфекции. Слово «дезинфекция» означает обеззараживание, т.е. уничтожение возбудителей инфекционных болезней на обьектах внешней среды. Однако при дезинфекционной обработке погибают не только патогенныс, но и сапротрофные бактерии. Иногда процесс дезинфекции оказывает стерилизующее действие. Обработка помещений микробиологической лаборатории Пол, стены и лгебель в микробиологической лаборатории обрабатывают пылесосом н протирают раствором различных дезицфицируюгцих веществ.
Обработка пылесосом обеспечивает освобождение предметов от пыли и удаление с ннх значительного количества микроорганизмов. Установлено, что при 4-кратном проведении щеткой пылесоса по поверхности предмета с него удаляется примерно 47% микроорганизмов, а при 12-кратном — до 97 %. В качестве дезинфицирующих растворов чаще всего пользуются 2 — 3%-м раствором соды (бнкарбоната натрия), 3 — 5%-м водным раствором фенола (карболовой кислоты) или лизола (препарата фенола с добавлением зеленого мыла), 0,5 — 3%-м водным раствором хлорамина и некоторыми другими дезинфектантами.
Воздух в лаборатории очищают проветриванием — это наиболее простой способ. Продолжительная вентиляция помещения через форточку (не менее ЗΠ— 60 мнн) резко снижает количество микроорганизмов в воздухе, особенно прн значительной разнице в температуре между наружным воздухом и воздухом помещения. Более эффективный н наиболее часто применяемый способ дезинфекции воздуха — ультрафиолетовое облучение лучами с длиной волны от 260 нм. Зти лучи обладают высокой анти- микробной активностью и могут вызывать гибель не только всгетативных клеток, но и спор микроорганизмов. Воздействие ультраФиолетовых лучей должно быть непосредственным и длительным.
Это связано прежде всего с тем, что ультрафиолетовые лучи обладают слабой проникающей способностью. Например, они не проходят через обычное стекло, легко попющаются частицами пыли. Кроме того, листы белой бумаги, пластины алюминия и хрома, а также предметы, изготовленные нз них, могут заметно отражать ультрафиолетовые лучи. Поэтому в зависимости от степени загрязнения возауха для его сп.рилизации требуется облучение от ЗО мин до нескольких часов.
В качестве источника ультрафиолетового излучения используются бакгггерицидные лалгггы. Излучателем в них служит электрическая луга, возникающая в парах ртуги низкого давления. Более 80% испускаемого нми спектра приходится на волну длиной 254 нм. Обычно бактерицидные лампы представляют собой трубки различного диаметра и длины, изготовленные из специального стекла, пропускающего излучение с длиной волны 254 нм. Каждая трубка вмонтирована в корпус-держатель и может быть снабжена отражателем. Необходимо иметь в виду, что ультрафиолетовые лучи могут вызывать тяжелые поражения глаз, поэтому нри работе с бактерицидными лампами нужно строго следить за тем, чтобы нн прямые, нн отраженные ультрафиолетовые лучи не попадали в глаза.
Б небольших помещениях при включенной бактерицидной лампе находиться нельзя. Следует также учитывать, что при длительной непрерывной работе бактерицидной лампы интенсивность излучения снижается. Б этих случаях облучение целесообразно вести с перерывами. Рабочее место, где непосредственно работают с культурами микроорганизмов, требует особенно тщательной обработки. Рабочий стол следует дезинфицировать не только до начала работы, но и после ее окончания.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
