А.И. Нетрусов, М.А. Егоров - Практикум по микробиологии (1125598), страница 6
Текст из файла (страница 6)
Для протирания поверхности стола можно использовать растворы лизола и хлорамина, а также 70%-е (по объему) растворы изопропилового или этилового спиртов. Спирты весьма эффективны в отношении вегетативных форм микроорганизмов. Названные спирты можно также применять для дезинфекции рук. Б тех случаях, когда поверхность стола имеет водоотталкивающее покрытие, особенно удобен лизол. Поверхность рабочего стола можно дезинфицировать и ультрафиолетовыми лучами. При этом следует учитывать, что бактерицидное действие лучей тем выше, чем ближе облучаемая поверхность к источнику излучения.
В лаборатории не разрешается курить, хранить и унотреблязпь еду, напитки, жевательную резинку. Рабопшть следует в халатах. 2.2. ПРАВИЛА РАБОТЫ С КУЛЬТУРАМИ МИКРООРГАНИЗМОВ В лаборатории микроорганизмы выращивают на плотных и жидких питательных средах, которые разливают в пробирки, колбы, матрасы и чашки Петри (рис. 2.2). Посуду н питательные среды предварительно стерилизуют.
Способы приготовления питательных сред и стерилизации подробно описаны ниже (см. гл. 3). 4 5 6 Рис. 2.2. Посуда для культивирования микроорганизмов: 1 — качалочная колба; л — качалочная колба е отбойникал1и; 3 — коническая колба; 4 — чашка Петри; 5 — пробирка; 6 — матрас 27 Рис.
2.3. Бактериологическая петля (1) и бактериологическая игла (2) )~"% — '" +~150 / 1450 — ~ 520 350 300 Рис. 2.4. Значения температуры ('С) в разных участках пламени газовой 1 2 горелки Отбор проб Отбор клеток микроорганизмов„вмран1еннмх на плотной среде в пробирке, осуществляют следующим образом. Пробирку с культурой берут в левую руку так, чтобы поверхность питательной среды с налетом микроорганизмов была обращена кверху и Внесение микроорганизмов в стерильную среду называется посевом, или инакуляиией.
Посев микроорганизмов требует соблюдения определенных правил, которые необходимо выполнять, чтобы предохранить исследуемую культуру от загрязнения посторонними микроорганизмами. Перед посевом следует тщательно надписать на пробирке (колбе или чашке Петри) название микроорганизма и дату посева. Клетки микроорганизмов для посева или приготовления препаратов берут бактериологической петлей или иглой (рис. 2.3), сели микроорганизмы выращены на плотной среде. В том случае, когда микроорганизмы выращены в жгщкой питательной среде, лучше пользоваться не петлей, а стерильной пипеткой.
Бактериологические петли и иглы делают, используя тонкую проволоку из вольфрама или нихрома, которую закрепляют в металлическом или стеклянном держателе. Диаметр бактериологической петли — 4 — 5 мм. Бактериологическую петлю (иглу) перед взятием клеток микроорганизмов стерилизуют. Для этого проволоку накаливают докрасна в пламени горелки и одновременно обжигают примыкающую к петле часть держателя, которую будут вводить внутрь сосуда, содержащего микроорганизмы.
Петлю рекомендуется держать в пламени горелки почти вертикально, чтобы проволока была равномерно раскалена на всем протяжении. При прокаливании необходимо помнить, что наивысшая температура развивается в верхней и периферической частях пламени (рис. 2.4), поэтому не следует опускать петлю непосредственно к горелке.
Сразу же после стерилизации петлю (иглу) вводят в сосуд с микроорганизмами. Чтобы не повредить клетки микроорганизмов, петлю (иглу) вначале охлаждают, прикасаясь ею к внутренней поверхности сосуда или к питательной среде, свободной от клеток микроорганизмов, н только после этого захватывают небольшое количество микробной массы. хорошо видна. Пробирку держат в горизонтальном или несколько наклонном положении. В правую руку берут петлю так, как держат карандаш, и прокаливают в пламени горелки. Затем, не выпуская петли, мизинцем и безымянным пальцем правой руки прижимают ватную пробку к ладони, вынимают ее из пробирки и держат так во время последующих манипуляций.
Края открьпой пробирки с культурой микроорганизмов обживют н пламени горелки и после этого вводят в пробирку стерильную петлю. Взяв небольшое количество микробной массы с поверхности субстрата, вынимают петлю из пробирки, следя за тем, чтобы переносимый материал не касался стенок или краев пробирки. Горлышко пробирки снова обжигают в пламени горелки, затем обжигают ватную пробку и закрывают ею пробирку. Если конец ватной пробки загорится, то не следует бросать пробку. Ее нужно быстро ввести н пробирку, где вата сама потухнет.
Ни в коем случае яельзя дуьпь иа загоревшуюся пробку, так как это только усилит гореььие! Если в момент пересена ватная пробка упадет на пол или на стол, то не следует снова встанлять ее в пробирку. Нужно взять новую стерильную пробку и начать всю операцию заноно. Закрытую ватной пробкой пробирку с культурой ставят в штатив, а извлеченный материал используют для приготовления препарата шьи для пересела культуры в свежую среду. Если культуру пересенают на скошенную агаризованпую среду, то петлю вводят в пробирку до конца и, слегка касаясь ею поверхносги агара, проводят снизу вверх либо зигзагообразную, либо прямую черту — штрих. При этом стараются не повредить поверхности плотной среды.
В случае пересева в жидкую среду (в колбы или пробирки) петлю с микробной массой погружают непосредственно в среду. Оставшиеся на петле после пересева или приготовления препарата клетки микроорганизмов пцательно сжигают в пламени горелки. Прокаливание петли в этом случае начинают с участка проволоки, примыкающего к кольцу, для того чтобы микробная масса, оставшаяся на петле, подсохла. Затем петлю переводят в вертикальное положение и прокаливают докрасна.
Такой пор«шок стерьшизации петли необходим потому„что при быстром нагревании влажной льикробной массы происходит ее разбрызгивание и образуется аэрозоль, загрязняющий воздух. Только после прокаливания петлю можно положить на место. Из жидкой среды клетки берут пипеткой. Пипетку за верхний конец вынимают из бумаги или пенача, в которых ее стерилизовали, и вводят в пробирку- или колбу с культурой, соблюдая все правила предосторожности, описанные ньппе.
Отбирать жидкую культуру пипеткой можно с помощью резиновой груши. Использованную пипетку следует немедленно перенести в дезинфицирующий раствор„например 3 — 5%-й водный раствор фенола или 2%-й раствор хлорамина, не касаясь ею окружающих предметов. Когда необходимо провести рассев микроорганизмов из жидкой питательной среды на поверхность плопиви среды в чашке Петри, поступают следующим образом. Расплавленную на кипящей водяной бане стерильную питательную среду, содержащую агар или желатину, разливают в стерильные чашки Петри.
Для этого сосуд со средой берут в правую руку, вынимают из него пробку, зажимая ее мизинььем и безымянным пальцем левой руки, обжигают горло сосуда в пламени горелки и, приоткрыв большим и средним пальцами левой руки крышку чашки Петри, быстро наливают в чашку расплавленную среду н таком количестве (20 — ЗО мл), чтобы дно чашки было полностью покрыто.
Крышку тотчас закрывают и чашку оставляют на горизонтальной поверхности до тех пор, пока не застынет среда. Для посева приоткрывают крышку чашки Петри и на поверхность плотной среды наносят каплю или «петлю» жидкой культуры, которую осторожно распределяют стекллииым стерильным шпателем (шпатель Дригальского) либо петлей Все описанные манипуляции слелует проводить около пламени горелки, но не в пламени, по возможности быстро, чтобы не загрязнить культуру посторонними микроорганизмами.
Не рекомендуется делать резкие движения и ходить около работающего с чистой культурой, так как движение воздуха увеличивает вероятность случайного ее загрязнения. 29 После пересевов пробирки или другие сосуды, в которых выращивают микроорганизмы„помещают в териослюьты, где с помощью терморегуляторов (сьь гл. 3) поддерживается постоянная температура. Посуду с культурами микроорганизмов, подлежащими выбрасыванию, следует автоклавировать, чтобы убить клетки, и только после этого мыть.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
