А.И. Нетрусов, М.А. Егоров - Практикум по микробиологии (1125598), страница 173
Текст из файла (страница 173)
Среда Сегала. Жидкая среда (г/л): гидролизат казеина — 7,5; дрожжевой автолизат — 10,0; 3-замещенный цитрат натрия — 3,0; КС1 — 2,0; М8804 7НзΠ— 20,0; ГеС1з — 0,023; 1'!аС1— 250,0; вода дистиллированная — 1000 мл. Комгюненты среды последовательно растворяют в 800 мл воды, доводят рН до 7,5 — 7,8 с полющью 1 М КОН, затем смесь автоклавируют при 1 ати 5 мин.
Среду охлаждают и фильтруют от осадка. Доводят рН до 7,4 с помощью 1 М НС1, а объем до 1000 мл и стерилизуют автоклавированием при 0,5 ати. Если необходима твердая среда, то к жидкой среде после первого автоклавирования и доведения рН добавляют 20 г/л агара, нагревают до его расплавления, а затем автоклавируют. Среду разливают в чашки Петри при 60 — 70 С, чтобы предотвратить преждевременное затвердение. СРЕДЫ ДЛЯ ГЕНЕТИЧЕСКИХ ЭКСПЕРИМЕНТОВ С Е.
СОМ 91. Минимальная среда А. Среда состава (г): КзНРО4 — 10,5; КНгРО4 — 4,5; ()4Н,)г804 — 0,5; вода дистиллированная — 1000 мл. Среду стерилизуют при 1,0 ати 20 — 30 л~ин. После автоклавирования при посеве добавляют 1 мл/л 1 М стерильного раствора М8804 7Н,О и 10 мл/л 20%-го стерильного раствора глюкозы. Аминокислоты добавляют до конечной концентрации 40 мкг/мл (в случае О-, Ь-формы) и 20 мкг/мл (в случае 1. -формы), Витамины добавляют до конечной концентрации 1 мкг/мл. 92. Среда ЕВ (Лурия-Бертраин). Среда состава (г): триптон — 10„0; дрожжевой экстракт — 5,0; НаС! — 5,0; вода дистиллированная — !000 мл. Среду стерилизуют при 0,5 ати 20 — 30 мин.
НЕКОТОРЫЕ СРЕДЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В САНИТАРНОЙ МИКРОВИОЛОГИИ 93. Среда Эпдо (селективная среда для энтеробактерий). 100 мл стерильного МПА (рН 7,4) расплавляют на водяной бане и охлаждают до 70 С, прибавляют 1 г лактозы (х.ч.), предварительно растворенной в стерильной пробирке в небольшом количестве дистиллированной воды и прокипяченной. В отдельных пробирках готовят: 2 — 3 мл спиртового насыщенного раствора фуксина и 10 мл 10% водного распюра 1Чаз80з В стерильную пробирку вносят 1 мл фуксина и прибавляют раствор сульфита натрия до обесцвечивания фуксина (бледно-розовый цвет).
Приготовленную смесь вливают в расплавленный МПА с лактозой, хорошо перемешивают и разливают гю стерильным чашкам. Правильно приготовленная срела в горячем виде имеет бледно-розовый цвет, а при застывании становится бесцветной. Среду используют сразу, без стерилизации. Среда выпускается в сухом виде. Ее готовят по прописи на этикетке. 94. Среда Кесслера (среда для выделения бактерий группы кишечной палочки). К 1 л водопроводной воды добавляют 10 г псптона и 50 мл бычьей желчи„кипятят смесь при гюмешивании 20 — 30 мип на водяной бане и фильтруют через вату. Прибавляют 2,5 г лактозы (х.ч.), доводят объем водой до 1 л, устанавливают РН 7,4 — 7,6, после чего добавляют 2 мл 1 % водного раствора генцианового фиолетового для подавления роста грамположительных бактерий, разливают (по 5 или 10 мл) в пробирки с 581 поплавками или комочками ваты и стерилизуют 10 мин при 1 ати.
Среда выпускается в сухом виде. Ее готовят по прописи на этикетке. 95. Среда КОДА (среда для выделения бактерий группы кишечной палочки). Выпускается в сухом виде. Состоит из пептона, гидролизата рыбы, додецилсульфата натрия, хлорида натрия, лактозы, бромтимолового синего.
Среду готовят по прописи на этикетке. 96. Полужндкаа среда с глюкозой. В 1 л дистиллированной воды растворяют 10 г пептона; 5 г ХаС!; 4 — 5 г агар; доводят до кипения, устанавливают рН (7,2 — 7,4), добавляют 1 мл 1„6% спиртового раствора бромтнмолового синего. В расплавленную среду вносят 5 г глюкозы, нагревают до кипения, разливают в пробирки столбиком высотой около 3 см и стерилизуют 15 мин при 0,5 атц. 97. Среда Козера. В 1 л дистиллированной воды растворяют 1,5 г фосфата натрий-аммония [Ха(б!Н4)НРО,), 0,2 г сульфата магния, 3 г нейтрального цитрата натрия, ! г фосфата калия однозамещенного.
Раствор разливают в пробирки по 5 мл и стерилизуют 30 мин при 1 ати. Среда прозрачная, при росте цитрат-асснмилируюших бактерий становится мутной. 98. Среда Клиглера. К 1 л МПА добавляют 10 г лактозы, 10 г сахарозы и 1 г глюкозы. После растворения углеводов добавляют по 10 мл 2% раствора сульфата железа, 0,8% раствора тиосульФата натрия (!чазЯзОз-7НзО) и 0,4% раствора сульфита натрия (г4а,ЯОз). Эта смесь служит реактивом на присутствие сероводорода.
Добавляют 24 мл 1% ~юдно-спирювого раствора фенолового красного (рН 7,4). Среду разливают в пробирки по 5 мл н стерилнзуют 20 — 30 мин прн 0,5 ати. Среда выпускается в сухом виде. Ее готовят по прописи на этикетке. 99. Селеннтовая среда (селенитовый бульон) — среда для накопления сальмонелл. Среда состава (г): однозамещенный кислый селснит натрия (ХаНбеОз) — 4,0; пептон — 5,0; Ха, Н РО4 — 7,0; 14аНзРО~ — 3,0; лактоза — 4,0; вода дистиллированная 1000 мл. Для приготовления среды используют два раствора. Раствор 1: к 950 мл раствора фосфатов добавляют пептон и лактозу.
Среду разливают во Флаконы и стерилизуют при 0,5 ати. При пргнотовлении среду подтитровывают, чтобы при добавлении пептона и селенита натрия готовая среда имела рН 6,9 — 7,!. Раствор хранят при 4 — 10 С 1 — 2 мсс. Раствор 2 однозамещенный кислый селеннт натрия растворяют в 40 мл стерильной дистиллированной воды. Раствор готовят непосредственно перед приготовлением среды. В каждый флакон с 50 мл раствора ! добавляют по 2 мл раствора 2 и перемешивают. Среда выпускается в сухом виде.
Ее готовят по прописи на этикетке. 100. Висмут — сульфит агар (ВСА) — селективная среда для сальмонелл. Выпускается в сухом виде. Состоит из агара, гидролизата рыбы, глюкозы, нитрата висмута. сульфита натрия, соли Мора, фосфата натрия, бриллиантового зеленого. Среду готовят по прописи на этикетке. Готовая среда имеет зеленоватую окраску. 101. Солевой бульон (среда для накопления стафилококков).
В 1000 мл МПБ (среда )Х2 1) растворяют 65 г ХаС1, устанавливают рН 7,4 и стерилизуют при 1 ати. 102. Молочно-солевой агар (среда для культивирования стафилвкокков). Непосредственно перед использованием к 100 мл расплавленного и охлажденного до 60 — 70 С стерильного МПА (рН 7„4), содержащего 6,5 г ХаС1, добавляют 10 мл стерильного обезжиренного молока (среда )Хь 5), перемешивают и разливают по стерильным чашкам Петри. 103.
Желточно-солевой агар Чнстовнча (среда для культивирования стафилококков). Непосредственно перед использованием к 100 мл расплавленного и охлажденного до 60 — 70 'С стерильного МПА (рН 7,2), содержащего 10 г ЫаС1, добавляют 1Π— 20 мл желточной взвеси, перемешивают и разливают по стерильным чашкам Петри. Для при- 582 готовления желточной взвеси желток ассптичсски извлекают из яйца, взбалтывают с 200 мл стерильного изотонического раствора !л!аС! (0,85 % раствор !л!аС1, рН б,9 — 7,0).
104. Среда Вильсона — Блера (среда для культивирования мезофильиых анаэробов). Непосредственно перед нспольюванием к !00 мл расплавленного и охлажденного до бΠ— 70'С стерильного МПА (рН 7,2), содержащего ! % глюкозы, лобавляюг 10 мл 20% раствора сульфита натрия и 1 мл 8% раствора хлорида железа (ГеС1,).
Оба раствора готовят на стерильной дцстиллированной воде. СРЕДЫ ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ПРОСТЕЙШИХ Иногда для сравнения рекомендуется употреблять несколько сред одновременно, а также помещать пробы гючвы в стерильную дождевую илп дистиллированную воду. Однако в такой воде численность простейших гораздо меньше, чем в питательной среде, и онн быстро исчезают или инцистируются. Агаровые среды разливают по чашкам Петри, стерилизуют, затем заражают исследуемой почвой и помещиот в термостат при температуре 20 — 25 'С. В течение ряда дней среды исследуют для обнаружения развившихся простейших. Некоторыс простейшие появлюстся очень быстро, цо скоро инцистируются или погибают, другис виды появляются не сразу и развиваются в течение нескольких недель.
105. Настой из навоза. Приготавливают 5%-й настой из лошадиного или коровьего навоза„оставляют на сутки, затем разбавляют до 1 — 2 %, фильтруют и стерилизуют. 106. Сенной отвар (ереда для культивирования Рагатееипи). 15 г измельченного сена кипятят 15 мин в дистиллированной воде, затем фильтруют. Среду наливактг в чашки Коха (высотой б см, диаметром !О см) или в стеклянные банки. В каждый сосуд вносят несколько прокипяченных стебельков сена. Сосуды оставляют на ночь открытыми, чтобы в среду могли попасть бактерии. Затем их закрывают неплотно прилегающей крышкой.
Через 1 — 2 дня вносят парамеций. 107. Почвенный экстракт. Берут огородную илн садовую почву, высушивают на воздухе и затем помещают в колбу с водой из расчета 10% по весу или лаже ! кг на литр воды. Суспензию кипятят !5 мин, нейтрализуют, раствор отжимают через тряпку, затем разбавляют и фильтруют, после чего стерилизуют.
Почвенную вытяжку употребляют иногда вместе с 3 — 4%-м сенным настоем. 108. Настои из овощей. Овощи (картофель, салат, морковь) кипятят до разваривания и готовят 1 — 5%-й настой, который употреблякгг после стерилизации. 109. Рисовая среда. Несколько зерен риса помещают в чашку Петри со стерильной водой. Через 2 — 3 сут в чашку вносят пробу почвы. 110.
Плотные среды для жгутиконосцев. Используют агаризованные (15 — 20 г/л агара) среды Виноградского (см. среды 7ч! 59 и 60) и Омелянского для низрифицирующих бактерий. 111. Плотная среда для амеб и мелких инфузорий. Среда состава: маннит — !О г; К,НРО, — 1 ц почвенная вытяжка — 1000 мл; шар — ! 5 г. 112. Мясной агар.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
