А.И. Нетрусов, М.А. Егоров - Практикум по микробиологии (1125598), страница 174
Текст из файла (страница 174)
Среда состава (г): лгясной экстракт — 0,3 — 0,5; )чаС! — 0,5; агар — 20,0. Вода— 1000 мл. 113. Среда Чокли для хищных амеб. Среда состава (мг): (л(аС! — 80; ХаНСОл — 4; КС! — 4; СаС1, — 4; СаНл(РО4), 2НзО— 1,б. Вода бидистиллированная — !000 мл. Приблизительно 2 раза в неделю к культурам необходимо добавлять кормовые организмы (как правило, таких инфузорий, как Рагатес)ит и Софйдат). 4.44) СРеда ддя автотрафнь4к протистов (бйаГели и др.). Среда состава (мл): жидкое удобрение для комнатных растений — 1; вода бидистпллированная — 1000 мл.
115. Среда для аксенического культивирования инфузорий (Рагаьчес)ит, Тетги)4утепа). Среда состава (г): протеозопептон — 10,0; !4аС! — 5,0; декстроза — 2,0; дрожжевой экстракт — 8,0; вода бидистнллированная — 1000 мл. Среду стерилизуют 20 — 30 мин прн 0,5 ати. СРЕДА ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ РАСТЕНИЙ В ЛАБОРАТОРНЫХ УСЛОВИЯХ 116. Среда Хоглацда. Маточный раствор (г/л): КНз РО4 — 136,!2; К!904 — 101,11; Са(!х!Оз)з. 4НзО— 236,16; М8804 — 247,0; РеВОТА — 6,92; раствор микроэлементов (г1л): КС! — 3,726, НзВОз — 1,546; Мп804.
Н40 — 0,338; 2п804.7Н40 — 0,575; СобО4'5НзΠ— 0,125; НзМо04 — 0„081. Для приготовления среды Хогланда в 1 л дистиллированной воды растворяют 0,5 мл маточного раствора КН,РО,, 2,5 мл раствора К!4!Оз, 2,5 мл Са(1404)4 4НзО, 1 мл М8804, 0,5 мл ГеЕОТА н 0,5 раствора микроэлементов. Среду стерилизуют 30 мин при 1,0 ати. ПРИЛОЖЕНИЕ 5 РЕЦЕПТЫ КРАСИТЕЛЕЙ И ИНДИКАТОРОВ 1. Фуксин основной (насьпценный спиртовой раствор). Фуксин основной — !0,0 г; этансл 96 — 100 мл. 2. Фуксин основной карболовый (фуксин Циля).
5%-й водный раствор свежеперегнапного фенола — 100 мл! насгященный спиртовой раствор фуксина основного — 10 лш. Приготовленную смесь через 48 ч отфильтровывают. Краситель отличается устойчивостью. 3. Фуксин основной, водный раствор. Карболовый фуксин 1(иля — 1 мл; вода дистиллированная — 9 мл. Водный фуксин готовят непосредственно перед употреблением, так как он нестоек. 4. Метиленовый синий, насыщенный раствор. Метиленовый синий — 3,0 г; этанол 96' — 100 мл. Раствор оставляют на 2 — 3 дня, несколько раз перемешивают (взбалтывают), затем фильтруют. Раствор устойчив.
5. Метнленовый синий 1: 40. Насыщенный спиртовой раствор метиленового синего — 1 мл; вода дистиллированная — 40 мл. б. Метпленовый синий (по Леффлеру). Насьпценный спиртовой раствор метиленового синего — 30 мл; вода дистиллированная — 100 мл; КОН, 1%-й водный раствор — 1 мл. 7. Генпиановый фиолетовый карболовый. Раствор 1: генциановый фиолетовый — 1,0 г; этанол 96' — 1О мл. Ристеор 2: 5%-й водный раствор свежепереп4анного фенола — 100 мл. После полного растворения генцианового фиолетового растворы смешивают.
8, Кристаллический фиолетовый, водный раствор. Кристаллический фиолетовый — 20 мг; вода дистиллированная — 100 мл. 9. Эритрозин кврболовый. Эритрозин — 3,0 г; вода дистиллированная — 100 мл; фенол свсжеперегнанный — 5,0 г. После растворения эритрозина и Фенола смеси дают отстояться. 1О. Сафрвиин, водный раствор. 2,5%-й раствор сафранина в 96 -м этаноле — 10 мл; вода дистиллированная — 100 мл. 11. Реактивы для окраски жгутиков.
Протрава. 12 г таннина растворяют при нагревании в 48 мл дистиллированной воды, к раствору прибавляют 30 мл насыщенного водного раствора железного купороса (РеБО„) и 6 мл насыщенного спиртового раствора фуксина. Раствор отфильтровывают и сохраняют в банке с притертой пробкой. Протрава бывает готовой к употреблению через несколько дней пссле приготовления и может храниться в течение нескольких месяцев.
Краситель. Карболовый фуксин Циля и вода дистиллированная в соотношении 1: 1. Протраву и карболовый фуксин Циля готовят заранее. Разбавленный фуксин следует готовить незадолго до употребления. Непосредственно перед работой протраву и разбавленный фуксин необходимо профильтровать через складчатый бумажный фильтр, так как осадки красок, легко образуюгциеся на стенке сосуда при наличии даже небольших количеств белка, будут сильно мешать окрашиванию и рассмотрению объекта. 12.
Реактивы для окраски жгутиков по методу Фонтана. 7)роправа. таню~и — 5,0 г; Фенол кристачлический — 1,0 г; вода дистиллированная — ! 00 мл. Реактивы для серебрення: серебро азотнокислое — 5,0 г; вола дистиллированная— 100 мл. Раствор серебра следует готовить без фильтрования и хранить в темной склянке.
К 3 — 4 мл 5%-го раствора азотнокислого серебра по каплям прибавляют раствор аммиака до помутнения и образования осадка, а затем осторожно — до растворения осадка. После этого вновь прибавляют раствор азотнокислого серебра до появления легкой опалесценции. Полученный раствор аммиачного серебра разводят дистиллированной водой в 10 раз. 13. Анилиновый черный. Анилиновый черный — 1,5 г; этанол 96 — 50 мл; уксусная кислота 80%-я — 10 мл„' вода дистиллированная — 40 мл. После растворения краску фильтруют и через 3 дня она готова к угютреблению. 14.
Красители для выявления липидов. 1. Судан П! — 0,5 г; молочная кислота концентрированная — 100 мл. 2. Сулан черный  — 0,3 г; спирт этиловый, 70%-й горячий — 100 мл. Раствор выдерживают в течение нескольких часов при 60 'С в закупоренной склянке, затем охлаждают и фгпьтруют. 15. Малахятг>вый зеленый, водный раствор. Малахитовый зеленый (малахитгрюн) — 7,5 г; вода дистиллированная — 100 мл. 16.
Раствор Люголя в модификации Грама. Йод кристаллический — 1,0 г; калий йодистьш — 2,0 г; вода дистиллированная— 300 мл. В ступку емкостью 30 — 50 мл помешают навеску йода и йодистого калия, растирают смесь пестиком, добавляют 1 мл дистиллированной воды и, продолжая растирать кристшшы, добавляют еще 5 мл воды. Йод растворяется в йодистом калии. Раствор количественно переносят в склянку и доводят обьций обьем до 300 мл.
Срок годности раствора не более 30 дней; хранят его в темной посуде. 17. Раствор Люголя для выявления гликогенв и граиулезы. Йод кристаллический — 1,0 г; калий йодистый — 3,0 г, вода дистиллированная— 300 мл. Раствор готовят так же, как и предыдущий. 18. Приготовление туши для негативного коитрастироввиия.
Тушь черная — 10 мл; вода дистиллированная — 30 мл. Разведенную тушь цеьггриФугируют, надосадочный слой разливают в пробирки и стерилизуют при 0,5 ати. Сохранить тушь можно также, добавляя к ней раствор тимерсола (1: 1000) в соотношении 1: 2 и твин-80 (1: 100) — 1 капля на 100 мл раствора. 585 19. Бумага, пропитанная раствором уксуспокпслого свинца. Нарезают полоски фильтровальной бумаги (0,2 — 0,4» 5 — 6 см), погружают их в 5%-й водный раствор уксуснокислого свинца РЬ(СНзСОО)п высушивают на воздухе и стернлизуют в чашке Петри автоклавированием при 0,5 ати.
Перед употреблением бумага бесцветна, а при наличии сероводорода она приобретает черно-бурый цвет. 20. Реактивы для определения белка по Лаури. Раствор А: 2%-й раствор ХагСОз в 0,1 н. ХаОН. Раствор Рл готовится в день определения. 0,1 г Си804 5Н,О растворяют в 20 мл 1%-го раствора К-Ыа тартрата (ссгнетовой соли). Этот раствор сохранлетсл не более Зб мшд 1 мл полученного раствора смешивают с 50 мл раствора А. Даже едва мутный раствор ие пригоден для исоользования! Реактив гролина.
В колбу объемом 1500 мл вносят 700 мл дистиллированной воды, 100 г ИагУтО,. 2НгО, 25 г 1МазМоО,. 2Н,О, 50 мл 85%-й Н,РОл н !00 мл конц. НС1. Полученную смесь кипятят на слабом огне в течение !О ч с обратным холодильником (можно дробно). К охлажденной смеси добавляют 150 г сернокислого лития (Ы80,), 50 мл дистиллированной воды и 15 капель брома. Избыток брома удалякп. кипячением в течение 15 мин без холодильника. Раствор охлаждают. Он лолзхен быть желтым. Если раствор зеленый, добавляют еще несколько капель брома и вновь выпаривают избыток последнего.
Объем раствора доводят до 1000 мл и сохраняют в холодильнике в темной склянке с притертой пробкой. Основной раствор обычно бывает 2 н. Белок определяют с помощью 1 н. раствора Фолина. Для этого титрованием 0,1 и. ХаОН с фенолфталеипом определяют концентрацию основного раствора и разбавляют его дистиллированной водой до 1 н. в продаже имеется готовый реактив Фолина. 21. Реактив Эрлиха. Пара-дигветиламинобензальдегид — 1,0 г; этанол 96' — 95 мл; НС! концентрированная — 20 мл. Модифицировагшый реактив Эрлиха: 5 г и-диметиламинобензальдегнда растворяют в 100 мл кислого спирта.
Кислый спирт: к 92 мл этилового спирта 96' добавляют 8 мл концентрированной НС1. 22. Реактив Эрлиха в модификации Ковача. Пара-диметиламинобепзальдегид — 1,0 г; амиловый или изоамиловый спирт — 15 мл; НС! концентрированная — 1О мл. 23. Реактив Нессвера. К! — 70,0 г; Н81, — 100,0 г; КОН вЂ” !00,0 г. Раствор 1. Навески К1 и Н81з растворяют в 400 мл листиллированной волы. Раствор 2. Навеску КОН растворяют в 500 мл дистиллированной воды.
Растворы ! и 2 смешивают и доводят общий объем до ! л. В случае образования осадка верхний прозрачный слой декантируют. Раствор хранят в темной стеклянной посуде. В продаже имеется готовый реактив Несслера. 24. Реактив Грпсса. Раствор 1: 0,5 г сульфаниловой кислоты растворяют в 30 мл ледяной уксусной кислоты. Добавляют 100 мл дистиллированной воды и фильтруют. Раствор сульфаннловой кнслсчы устойчив в течение месяца. Раствор 2 0,1 г о-нафтилаглина растворяют в 100 мл кипящей дистиллированной воды.
Остужают и добавляют ЗО гел ледяной уксусной кислоты. Раствор а-нафтиламина фильтруют и хранят не более недели. Непосредственно перед упогреблением смешивают равные объемы этих растворов. 25. Реактивы для крахмала-йодной пробы на нитрпты. Крахмал — 0,4 г; ХпС!г — 2,0 г; вода дистиллированная — 100 мл. ХпС1г растворяют в 10 мл воды, кипятят и добавляют крахмал.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
