Дж. Уилсон, Т. Хант - Молекулярная биология клетки - Сборник задач (1120987), страница 37
Текст из файла (страница 37)
Сравнительный анализ содержания О-белка в просветах и мем- бранах аппарата Гольджв и везнкул (задача 8-45) Среднее еодержавв Измеряемый параметр Плотность на срезе через аппарат Гольджв в неинфицироеанных клетках Плотность на срезе через аппарат Гольджв в инфицированных клетках Плотность ва срезе через отпочковываюшиеск н зрелые везикулы Гольджв в инфицированных клетках Плотность по длине мембран цистерн Гольджв в инфицированных клегках Плотность по длине мембран в везнкул Гольджп в инфицированных клетках 5?мкм' 271?мкмз 233)мкм б/мкм 4/мкм 8-45 Везикулярный транспорт по конститутивному пути между стопка ми Гольджи и наружу, к плазматической мембране, осуществляет ся, по-видимому, в везнкулах, не покрытых клатрнном. Особев ность такого вида транспорта, называемого объемным, заключа ется в том, что содержимое аппарата Гольджи не концентрируете~ в везикулах.
Зная, что транспорт в везикулах, покрытых клатрк ном, связан со значительным концентрированием веществ, вк сомневаетесь в том, что при объемной конститутивной секреции в происходит концентрирования. Чтобы выяснить, концентрируются ли вещества в везикула при конститутивном пути, вы заражаете клетки вирусом везику парного стоматита (ЧЯЧ) и следите за появлением вирусноп О-белка. Ваша смелая идея заключается в том, чтобы сравнит~ концентрацию О-белка в полости стопок Гольджи с его концентра цией в транспортных везикулах, не покрытых клатрнном. Вь хотите измерить концентрацию О-белка, приготовив тонкие срезе клеток, инфицированных вирусом ЧЪЧ, и проинкубировав их с~ специфическими антителами к О-белку, меченными частицаьв золота.
Частички золота видны на электронных фотомикрогрз. фиях как маленькие черные пятнышки, поэтому довольно прося подсчитать их в полости транспортных везикул (как полностьк сформированных, таки отпочковываюшихся)и в аппарате Голы жи. Вы определяете концентрацию О-белка двумя способамк 1) по числу частиц золота на поперечном срезе и 2) по числ) частиц золота на линейном участке мембраны. Этн результате представлены в табл. 8-5. Концентрируется ли содержимое везикул, участвующих ~ объемном транспорте, или нет? Клеточное ядро ДНК и белки, входящие в состав хромосом (МБК 9.1) 9-1 Заполните пропуски в следующих утверждениях. А.
Каждая молекула ДНК упакована в, а вся генетическая информация, хранящаяся в хромосомах организма, составляет его Б. Для функционирования хромосом необходимы три элемента последовательности ДНК: по крайней мере одна для того, чтобы могло осуществляться копирование хромосом, одна для обеспечения последующего разделения двух копий при митозе и две для поддержания целостности хромосомы в период между делениями клеток.
В. В спирали ДНК каждая область, где синтезируется функциональная молекула РНК,представляет собой Г, В генах высших эукариот короткие сегменты кодирующей ДНК, которые называются , обычно разделены длинными последовательностями некоднрующей ДНК, которые называются Д. В многоклеточном организме клетки каждого типа содержат свой особый набор , которые, действуя в разных сочетаниях, способствуют экспрессии разных генов.
Е. Молекулы белков, связанные с молекулой ДНК, тормозят ее движение при гель-электрофорезе, что позволяет с помощью чувствительного метода, называемого выявлять сайт-специфические ДНК-связывающие белки. Ж. Некоторые ДНК-связывающие белки содержат один или более доменов, известных под названием ; в их состав входит около 30 аминокислот, образующих одну структурную единицу вокруг атома х,п, который связан с двумя остатками цистеина и двумя остатками гистидина. 3. Некоторые бактериальные сайт-специфические ДНК-связывающие белки содержат последовательность из 20 аминокислотных остатков, образующих структуру из двух а-спиралей, разделенных коротким витком; ее называют структурой И.
Связывание, при котором два белка помогают один другому прочнее связаться с ДНК, называется К. Наиболее стабильная структура ДНК вЂ э так называемая ДНК, однако необычные последовательности нуклеотидов могут образовывать другие типы спиралей: правозакрученную ДНК и левозакрученную ДНК. Л.
В структуре эукариотических хромосом преобладают нуклеопротенновые частицы , которые играют большую роль в упаковке и организации всей ДНК в клеточном ядре. 12й Глава й Укажите, какие из следующих утверждений правильные, а хе кие-нет. Если утверждение неверно, объясните почему. В каждой хромосоме содержится одна длинная молекула ДНК. Теломера обеспечивает точность репликации хромосомы, так чв не происходит утраты ни одного нуклеотида на конце хромосомх тем самым решается проблема репликацни концов. На основе данных о частоте мутаций популяционные биолсп сделали вывод, что с регуляцией и кодированием жизненно важни белков связана лишь небольшая часть (несколько процентоу генома млехопитающих.
В генах высших эукариот патроны обычно превосходят экзоны н размеру и по количеству. Из сравнения ДНК относительно близких организмов, наприме человека и мыши, можно заключить, что консервативные послед< вательности представляют собой важные в функциональном отие шенин экзоны и регуляторные области, а неконсервативные посл< довательности — это некодирующая ДНК. Узнавание каждой из четырех возможных нуклеотидных пя (А — Т, Т вЂ” А„Π— С, С вЂ” Са) происходит благодаря специфичном му расположению «крайних» атомов, которые выступают в бои шую бороздку спирали ДНК.
Радиоактивно меченные фрагменты ДНК можно использовать нр выявлении сайт-специфических ДНК-связыяауощих белков мет< дом торможения в геле, при очистке белков методом аффиннн хроматографии ДНК и нри отборе бактерий, экспрессируюшв определенный белок. Структура, называемая «цинковым пальцем», присутствует тольх в эукариотических сайт-специфических ДНК-связывающих белка а структура спираль- виток-спираль обнаруживается толы в белках бактериального происхождения.
Если ДНК-связывающий белок образует симметричный димер, т узнаваемы им последовательность скорее всего также обдали симметрией. Если два сайт-специфических ДНК-связывающих белка взву модействуют с частично перекрывающимися последовательна стями ДНК, то связывание каждого из них стимулируется ~ присутствии другого; такое связывание называют кооперати ным. В В-форме ДНК сдвиг оснований относительно друг друга, п~ и угол поворота спирали между парами оснований, зависит я того, какие нуклеотиды в последовательности соседствуют др~ с другом. Для того чтобы ДНК свернулась в тугую спираль внутри клети необходимо, чтобы в ней присутствовали особые последовате»' 9-2 А Б В Г обработке аенатуранн н ренатур Я<,О <З,е <с,я в,т К з,а Рис.
9-К Е рибосомн< <Е<татту<нет против нс мнни-хрот в т.н.н. 8-1428 М. Комплекс ядерной ДНК эукариотическнх клетох со структурным белками- н „содержащимися в больши количествах, называют Н. Пять типов гисгонов можно разделить на две основные грунин гнстоны и гистоны О. Области ДНК, в которых нет нуклеосом, легко разрушаются по; действием следовых холичесгв дезоксирибонухлеазы; эти участи называют П. В живых клетках нуклеосомы располагаются тесно одна за другое образуя нить , в котором ДНК скоцденсирована силу нее, чем в расправленной структуре, называемой «бусины в витке». Клеточное ядро 129 ности, например АААААХ)ч1)Х)Ч, повторяющиеся через каждые 10 — 11 нуклеотидов.
Глотовы-это белки относительно небольшого размера, несущие много положительно заряженных аминокислот. Положительный заряд способствует тому, что гистоны тесно связываются с ДНК независимо от ее нуклеотидного состава. Нуклеосома состоит примерно нз 146 нуклеотидных пар, уложен- ных двумя витками вокруг гистонового октамера, представляюще- го собой комплекс нз восьми нуклсосомных гистонов. Для большинства нуклеосом, по-видимому, не характерно фикси- рованное положение в ДНК, однако известны поразительные примеры точно определенного расположения нуклеосом.
Сайты, сверхчувствительные к нуклеазе, локализованы в линкер- ной ДНК между нуклеосомами. Причиной локальной декондеисации хроматина вокруг активных генов может быть разрушение белками-регуляторами взаимодей- ствия между молекулами гистона Н1. Обычно на электронных фотомикрографиях расплавленного (спре- дированного) хроматина «буснны» нуклеосом в транскрибируе- мых и нетранскрибируемых областях ДНК выглядят по-раз- ному. Н. О. П. Тетка)ауиаела — это ресничная инфузория, в клетке которой прнсут 9-3 «апепьацц« рация а)Р- п,ты Зл и з 94. Рестрикпионнтпй анализ мной мини-хромосомы из ' у«ива (залачв 9-3). Числа полос указывают размеры хромосомы и фрагментов .и.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
