Н.А. Юрина, А.И. Радостина - Гистология (1112199), страница 52
Текст из файла (страница 52)
После 10 мин пребывания в хлороформе для лучшего уплотнения кусочка внутри самого материала целлоидин над кусочком срезают, обнажая материал. Залитые блоки переносят в 70'/о спирт, режут н окрашивают обычным способом. При срочной заливке в целлоидин материал получается менее плотный, чем при обычной заливке, поэтому обычно не удается получить срезы тоньше 15 мкм. Гистологическое исследование соскобов слизистой оболочки матки. Соскобы слизистой оболочки матки представляют собой массу, состоящую из различных по величине обрывков ткани, пропитанных кровью. Материал фиксируют 10% раствором формалина или 96% спиртом и заливают в парафин или целлоидин (целлоидин предпочтительнее).
При небольшом объеме материала его обрабатывают целиком. Если масса материала большая, его разбирают, подбирая различные по характеру кусочки. Кусочков нужно стараться взять больше с тем, чтобы поверхность готового блока составляла 1,5 — 2 смз. Благодаря своей рыхлости материал хорошо поддается ускоренным методам заливки. Принимая во внимание неоднородность материала, срезы необходимо делать с разной глубины блоков. Мазки костного мозга, пунктатов других органов кроветворения, экссудатов исследуются с помощью методов, описанных в главе 6. ЦИТО- И ГИСТОХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ Цито- и гнстохимические методы предназначены для выявления химического состава клеток н тканей.
При биохимическом исследовании компоненты клетки отделяются друг от друга путем разрушения клеток н дифференциального центрифугнрования, и затем производится их биохимический анализ. Суть гистохнмнческого исследования заключается в том, что распределение отдельных химических компонентов клеток и тканей изучается с помощью реакций„проводимых непосредственно на гистологических срезах.
При этом известен точный химический механизм этих реакций. Для проверки специфичности реакции часто применяют ферментатив- 225 ный контроль. Например, ШИК-реакция окрашивает не только гликоген, но и другие углеводные соединения. Если на одном срезе провести ШИК-реакцию, а соседний срез предварительно обработать амнлазой (фермент, разрушающий гликоген), а потом осуществить ШИК-реакцию, то отсутствие окраски на втором срезе подтвердит специфичность реакции, т.
е. наличие гликогена. Гистохимическое выявление ферментов основано на обнаружении результатов ферментативной активности. Вследствие ферментативной активности нз субстрата в определенных условиях может возникать окрашенный продукт илн такой продукт, который может быть превращен в цветной и таким образом обнаружен на срезе. Методика проведения некоторых гнстохимическнх реакций приведена в соответствующих главах. Например, реакции на гликоген„ нукленновые кислоты и активность некоторых ферментов описаны в главе 3, реакция на активность ацетилхолинэстеразы — в главе 11 ит. д. РАСТВОРЬЬ ОСМОТИЧЕСКОЕ ДАВЛЕНИЕ.
БУФЕРНЫЕ СМЕСИ Раствором называется однородная смесь, состоящая из распюрителя, растворенного вещества и продуктов их взаимодействия. Концентрацией раствора называется количество растворенного вещества, содержащееся в определенном количестве растворителя. Чаще всего концентрацию выражают в весовых процентах. Например, чтобы приготовить 10% раствор какого-то вещества, нужно взять 10 г этого вещества и 90 г воды.
Масса 1 мл чистой воды равна 1 г, поэтому 90 г и 90 мл воды — это практически одно и то же. Мол я рный раствор — это раствор, содержащий 1 моль распюренного вещества в 1 л распюра. М о л ь — количество граммов растворенного вещества, численно равное его молекулярной массе. Например, молекулярная масса ХаОН равна 40 (Ха— 23, Π— 16, Н вЂ” 1). Следовательно, 1 моль ХаОН равен 40 г. Нормальный раствор — это раствор, в 1 л которого содержится 1 г растворенного вещества.
Грамм-эквивалентом вещества называется количество граммов вещества, эквивалентное в химических реакциях одному грамм-иону водорода. М о л я р н о с т ь вещества в растворе (молярная концентрация) равна числу граммов вещества в растворе, деленному на его молекулярную массу. Общая молярность раствора равна сумме молярных концентраций растворенных веществ. Если два раствора разной молярности разделены полупроницаемой мембраной (проницаемой для воды, но не для растворенных в ней веществ), то вода будет проходить через мембрану в более концентрированный раствор, пока молярность не уравняется.
Это явление называется о с м о с о м. Если молярностн двух растворов, разделенных полупроницаемой мембраной, равны, вода не переходит из одного раствора в другой. Такие растворы 22В Т а б л н д а 1. Притотоалеиие иориалвиввк раеваороа сериоа, хлориетоаодородиой и ав«твой кислот пво Р. Лолли, 3969) Концснврацна Ъ,н,.„,„д,д,) рдддвщр„, ' 1г'.в в7~0) " Серная кислота 95 35,51 96 35,93 97 36,31 98 36,68 99 37,03 100 37,34 1,8337 1,8355 1,8364 1„8361 1,8342 1,8305 28,2 27,86 27,6 27,3 27,1 26,8 называют изоосмотическими.
В биологии все значительно сложнее, так как клеточная мембрана не является в полном смысле слова полулроницаемой. Она активно регулирует поступление веществ в клетку и их выхождение из нее. Поэтому употребляемые биологами термины «изотонический», сгипертонический» и «гипотонический» являются скорее эмпирическими, основанными на действии этих растворов на клетки и ткани. Изото ни ческий раствор — это такой распюр, в котором клетки сохраняют свой объем. Гипертонический раствор — это раствор, в котором происходит сморщивание клеток за счет выхождения из них воды.
В г и п о т о н и ч е с к о м растворе происходит набухание клеток. Например, если эритроциты крови поместить в воду или в раствор очень низкой молярной концентрации, вода путем осмоса будет проникать в клетку, клетка набухает, ее оболочка может лопнуть. Изотоническим для большинства клеток млекопитающих является 0,1б М распюр хлорида натрия (0,9%).
Применяются и другие изотонические растворы. Для сохранения структуры клеток, особенно в электронной микроскопии, при фиксации материала очень важно следить за тем, чтобы используемые растворы были изотоническими. В ряде гистологических и гистохимических методов необходимыми компонентами являются нормальные растворы кислот. При приготовлении таких растворов учитывают плотность кислоты, которая зависит от концентрации.
Для получения 1 н. раствора объем кислоты, содержащий 1 г-экв, доводят в мерной колбе до 1 л, добавляя дистиллированную воду. Необходимый объем можно определить по табл. 1 — б. Буферные растворы используют для поддержания определенной концентрации водородных ионов (рН). Например, для окрашивания гликозаминогликанов соединительной ткани требуется кислая среда (низкие значения рН), при фиксации материала для электронной микроскопии — близкие к нейтральному (рН 7,3— 7,4), для выявления активности ферментов — те значения рН, при которых данные ферменты активны.
Ниже приводятся таблицы для приготовления некоторых буферных смесей (табл. 1 — 6). Продолиенне табл. 1 Конце атумом т (моска/масса) нормальность Объем, содермащий 1 г-екв (мл) Хлористоводородная кислота 36 11,64 37 12,01 38 12,38 39 12,75 40 13,14 1,1789 1,1837 1,1885 1,1932 1,1980 86,0 83,3 78,4 76,2 Азотная кислота 68 15,16 69 15,43 70 15,70 71 15,96 72 16,25 1,4048 1,4091 1,4134 1,4176 1,4218 66,0 62,7 61,6 П р я м е ч а н н е. Для нрвготоелеяня 1 н, распюра объем, указанный в 4.й колонке, доводят в мерной колбе объемом 1 л до метка, добаюню днсгнллнроюнную вощс Длн гнстологнчесюй нрактякн такая точносп счкюется достаточной.
Т а б л и ц а 2. Првпиовлевве моларимх ргитворов (во Р. Лалла, 1969) 24,0 1,0643 26,0 1,0619 27,0 96 28,0 1,0570 29,0 1,0549 1,0524 1,0498 30,0 54,8 35,28 62,59 62,27 61,95 61,64 61,33 61,03 60,73 60,16 59,90 59,63 59,37 59,11 58,85 58,59 58,32 58,08 57,85 57,63 57,41 57,19 0,9101 0,909 0,908 0,9070 0,906 0,905 0,9040 0,903 0,9Ы 0,9010 0,900 0,899 0,8980 0,897 0,896 0,895 0,8940 0,893 0,89Л) 78,0 77,0 76,0 75,1 74,2 73,3 гс,5 71,6 70,8 70,0 69,3 68,5 67,8 67,0 66,3 65,6 63,7 Т а б л и ц а 3. Првготовлевие О,М М какодилатвого буфера (РН 5,0 — 7,4) [во Г.
Гайеру, 3974) 0,01 М какодилат натрия 21,4 г/л На(СН«) .А«О ЗН,О 100 мл 0,1 н. НС( — Х' мл Дистиллированная вода до 200 мл РН 0,1а. НОО ма РН 03 н. НО, мл РН 03н. НО, мл 5,0 5,2 5,4 93,5 90,1 85,2 78,4 69,6 6,0 6,4 6,6 59,1 47,7 36,5 26,6 6,8 7,0 7,2 7,4 18,6 12,6 8,3 5,4 ' Х вЂ” число милле«игра« 0,1 н. Раег«ара НО, «старое нужно деба«ать дл«получен««у«еэеннаге значенгм РН. Т а б л и ц а 4. Праготовлевие 0,1 М фосфатвого буфера (РН 5»7-4)»0) [ио Г. Гайеру, 3974) 0,2 М распюр Р/аН,РО» (27,58 г/л) 0,2 М распюр Р/а,ЯРО, (28,38 г/л) 0,2М 0,2М Н 02М 0,2М НаН»РО», мч Не»НРО», мл Н«Н«РО», мл Пе»НРО», м« Т а б л и ц а 5.
Приготовление 0,2 М ацетат-уксусвоквглего буфера (рН 3,6 — 5,6) [ае Г. Гейеру,[974[ 0,2 М распюр ацетата натрия (16,4 г/л ацетата натрия) 0,2 М уксуснан кислота (12 мл/л уксусной кислотм, ллстность 1,060 — 1,0613) 5„7 5,8 5,9 6,0 6,1 6,2 6,3 6,4 6,5 6,6 6,7 6,8 93,5 92,0 90,0 87,7 85,0 81,5 77,5 73,5 68,5 62,5 51„0 6,5 8,0 10,0 12,3 15,0 18,5 22,5 26,5 31,5 37,1 43,5 49,0 6,9 7,0 7,1 7,2 7,3 7,4 7,5 7,6 8,0 45,0 39,0 33,0 28,0 19,0 16,0 13,0 10,5 8,5 7,0 5,3 55,0 61,0 67,0 72,0 77,0 81,0 84,0 87,0 90,5 91,5 93,0 94,7 Т а б л и ц а 6. Присетевлеиие рассаереи ивовых фесеатее (ие Р.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
