Н.А. Юрина, А.И. Радостина - Гистология (1112199), страница 51
Текст из файла (страница 51)
Для срезов, окрашенных кармином, используют раствор пикриновой кислоты, полученный путем разведения водой насыщенного раствора пикриновой кислоты в отношении 1:3 (при комнатной температуре в 100 мл воды растворяется примерно 1,2 г пикриновой кислоты, следовательно, для получения насыщенного раствора следует взять чуть больше этого количества пикриновой кислоты). Время окрашивания 2 — 5 мин. Цитоплазма клеток и эритроциты красятся в желтый цвет. Методика окрашивания срезов гематоксил ил-э о з и н о м.
Эта методика наиболее часто применяется и поэтому должна быть описана более детально. Этим методом можно окрашивать целлоидиновые срезы, депарафинированные, парафиновые или замороженные срезы. Замороженные срезы перед окрашиваннем следует обезжирить, поместив их на 20 — 30 мин или на ночь в 96'/о спирт. Далее срезы переносят в дистиллированную воду. Целлоидиновые срезы переносят из одного бюкса в другой с помощью препаровальной иглы с загнутым концом. Депарафинированные и замороженные срезы можно окрашивать на предметном стекле, наливая или сливая соответствующие растворы. Растворы красителей при этом можно сливать обратно для повторного использования.
Порядок окрашивания срезов гематоксилин-эозином следующий: 1) срезы переносят в дистиллированную воду; 2) окрашивают гематоксилином Эрлиха 2 — 5 мин; 3) промывают в дистиллированной воде; 4) затем промывают в водопроводной воде 3 — 5 мин; 5) осуществляют контроль под микроскопом; б) дифференцируют 1~/о раствором хлористоводородной кислоты в 70' спирте 1 — 2 с; 7) быстро переносят срезы в водопроводную воду на 30 мин при частой смене; в водопроводной воде вишневая окраска ядер сменяется синей; 8) осуществляют контроль под микроскопом; если хроматин и ядрышко видны недостаточно четко, то дифференцировку следует повторить (срезы можно смотреть под большим увеличением, накрыв их покровным стеклом); 9) промывают в дистиллированной воде; 10) 1'/о водный раствор эозина 0,5 — 1 мин„11) промывают в дистиллированной воде 1и дифференцируют, так как вода смывает эозин); время промывки контролируют по цвету среза; 12) проводят обезвоживание, осветляют в ксилоле, заключают в бальзам.
В спиртах эозин также отмывается, так что проводить срезы по спиртам следует быстро. Время окрашивания в гематоксилине нужно установить на первых 2 — 3 срезах и затем все срезы данного блока окрашивать одинаково. Дифференцировку в растворе хлористоводородной кислоты в спирте можно не проводить, но в этом случае структуры ядра будут менее четкими и в цитоплазме может быть синеватый фон.
Методика окрашивания азур-2-эозином. Эта методика также вполне пригодна для обзорных целей. Прогрессивный метод окрашивання азур-2-эозином довольно ненадежен, но регрессивный дает стабильные результаты. Основными растворами являются 0,1 / водный раствор азура и 0,1 / водный раствор эозина. Для приготовления рабочего раствора на 100 мл дистиллированной воды добавляют 100 капель основного раствора азура и 100 — 120 капель раствора эозина. Срезы помещают в раствор красителя на 12 — 24 ч. Затем срезы днфференцируют. Методы дифференцировки могут быть разными в зависимости от того, насколько интенсивно окрасились срезы.
Дифференцировку можно проводить в подкисленной дистиллированной воде, затем промывать в чистой 2Е> дистиллированной воде, обезвоживать в спиртах, просветлять в ксилоле и заключать в бальзам. При этом следует учесть, что в спиртах дифференцировка продолжается.
Можно дифференцировать срезы прямо в 9б% спирте. Ход дифференцировки контролируют под микроскопом. Окрасив несколько срезов, можно контролировать на глаз по цвету среза, время от времени выборочно проверяя качество окраски под микроскопом. В качестве обзорной окраски можно рекомендовать также железный гематоксилин-пикрофуксин по Ван-Гизону. Методика окрашивания железным гематоксилин-пикрофуксином по Ван-Гизону. Срезокрашивают железным гематоксилином Вейгерта в течение 2 — 5 мин. Вместо гематоксилина Вейгерта можно использовать гематоксилин Эрлиха.
Дифференцировки не требуется, так как срезы дифференцируются в пикрофуксине. Для приготовления раствора пикрофуксина к 100 мл насыщенного водного раствора пикриновой кислоты добавляют 10 мл 1% водного раствора кислого фуксина. Раствор пикрофуксина хранится длительное время. После окрашивания железным гематоксилином срезы ополаскцвают в дистиллированной воде и переносят в пикрофуксин на 3 — 5!мин. Затем промывают дистиллированной водой, обезвоживают в спиртах, начиная с 96%, проводят через ксилол и заключают в бальзам. В воде смывают фуксин. Если пропустить промывку в воде — обсушить срез фильтровальной бумагой, что иногда делают, мышечная ткань может быть окрашена в розовый цвет, а не в желтый, как полагается.
Если промывать в воде слишком долго, фуксин смывается полностью. Пикриновая кислота смывается в спирте, поэтому обезвоживать нужно быстро. В результате окрашивания ядра клеток должны быть темно-коричневыми (или темно-фиолетовыми при окрашивании гематоксилином Эрлиха), коллагеновые волокна — красными, мышечная ткань, цитоплазма различных клеток и эритроциты— желтыми. Приготовление тотальных препаратов В некоторых случаях объект исследуют целиком без приготовления срезов и, следовательно, без предварительного уплотнения. Обычно такими объектами являются тонкие структуры — серозные, мозговые, зародышевые оболочки, тонкостенные сосуды и т.
д. Препараты объектов, исследуемых целиком, называются тотальными. При изготовлении тотальных препаратов сальника, брыжейки, мозговых оболочек из них вырезают кусочки и опускают в фиксатор. При изучении зародышевых оболочек можно ввести фиксатор шприцем в амнион. Если орган может при фиксации изменить свою форму и деформировать покрывающую его оболочку (например, серозную оболочку передней брюшной стенки), его прикалывают стеклянными иглами оболочкой вверх к пластинке пробки и опускают в фиксатор объектом вниз. При исследовании сосуда фик- ааз сирующую жидкость вводят на некоторое время в его просвет, затем сосуд разрезают вдоль, материал накалывают на пробку эндотелием вверх и фиксируют описанным выше способом.
Окрашивание н заключение тотальных препаратов производятся так же, как ненаклеенных целлоидиновых и замороженных срезов. ОБРАБОТКАБИОПСИЙНОГО МАТЕРИАЛА Биопсия — это взятие материала от живого организма с целью морфологического исследования. С помощью биопсий уточняется диагноз, а также оцениваются степень поражения органа патологическим процессом, стадия процесса.
Материал при этом может быть получен во время хирургического вмешательства, путем приготовления соскобов с поверхности слизистой оболочки исследуемого органа, с помощью пункций — взятия материала с помощью специальных игл (пункция грудины для взятия костного мозга, пункции лимфатических узлов, печени, почек), использованием для взятия кусочка слизистой оболочки полых органов приборов, предназначенных для осмотра внутренней поверхности этих органов (гастроскопа, бронхоскопа, ректоскопа и др.).
Порядок регистрации поступившего в патологоанатомическую лабораторию материала, его маркировки, описания и хранения определяется правилами, установленными Министерством здравоохранения РФ. Биопсийный материал обрабатывают в течение 3 — 4 дней. Однако во время операции по поводу опухоли неизвестной природы нередко бывает необходимо проведение срочной (экстренной) биопсии, когда на основании данных морфологического исследования хирург решает вопрос о необходимом объеме операции: удалить ли только опухоль или значительную часть окружающей здоровой ткани, а может быть и весь пораженный орган с региональными лимфатическими узлами. В этом случае за 15 мин материал должен быть зафиксирован, нарезан„покрашен и заключен. Врач описывает материал макроскопнчески, вырезает из него, если он достаточно велик, наиболее характерный кусочек (или кусочки) и поручает лаборанту его дальнейшую обработку. Кусочек кладут в пробирку и заливают небольшим количеством 10'/~ формалина (кислого нли нейтрального).
Пробирку 2 — 3 раза нагревают до появления пара и пузырьков (не доводя до кипения), промывают в течение 2 мин в проточной воде и режут на замораживающем микротоме. Замороженные срезы переносят на несколько секунд в 96% спирт, затем в дистиллированную воду, окрашивают гематоксилин-эозином, обезвоживают и заключают в бальзам. Если ответ может быть дан в течение суток, фиксацию можно проводить формалином в термостате при 56 — 60' С в течение 2 ч, промывку осуществляют в проточной воде в течение 30 мнн и дальнейшую обработку проводят, как описано выше. Вместо уплотнения с помощью замораживания можно использовать быструю заливку в парафин.
Приэтомкусочки 224 толщиной не более 2 мм фиксируют в безводном ацетоне (2 порции) в течение 2 — 3 ч„переносят на 20 — 30 мин в хлороформ, на 20 — 30 мин в хлороформ-парафин прн 37' С, затем в парафин 1 н парафин 11 по 30 мин — 1 ч в каждом н осуществляют заливку. Весь процесс занимает 5 — 6 ч. Ускоренная заливка в целл о и дни более продолжительна, чем парафиновая. Кусочек материала толщиной не более 2 мм фиксируют в жидкости Карнуа в течение 2 — 4 ч (или в двух порциях 96'/о спирта по 3 — 4 ч), обезвоживают в абсолютном спирте 3— 4 ч, переносят в густой (10'/о) целлоидин на 12 — 18 ч (на ночь), затем кусочки вынимают нз целлоидина, переносят на деревянные кубики (с избытком целлоидина и даже немного наливая его сверху на кусочки) „оставляют подсыхать на воздухе 20 — 60 мнн н погружают в хлороформ на 30 — 60 мин.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
