К. Хаусман - Протозоология (1107653), страница 21
Текст из файла (страница 21)
4. Смыть дистиллированной водой и высушить препарат при комнатной температуре. 5. Экспонировать препарат в течение 30-60 с на расстоянии 5 см от лампы накаливания (40 Вт). 6. Налить на препарат на 20 с «восстанавливающую смесь» (проявитель). Эта смесь состоит из следующих компонентов: а) Мелкозернистый проявитель А: 10 г борной кислоты, 10 г буры, 5 г гидрохинона, 100 г сульфита натрия, 2,5 г метола Ая(а. Вещества растворить в указанном порядке в 1 л теплой (40'С) водопроводной воды. б) Мелкозернистый проявитель Б: любой продажный высококонцентрированпый проявитель (например, «Родинал»).
в) !О/-ный ЙаОН. Непосредственно перед употреблением эти три компонента смешиваются в соотношении: 20 ми раствора (а), 0,5 — ! мл раствора (б) и 0,5 — ! мл раствора (в). 7. Восстанавливаюгцую смесь быстро и энергично смыть водопроволной (не дистиллированной!) водой и немедленно налить па препарат 96;~-ного спирта. В течение 5 мни спирт сменить дважды. Я. Слить спирт и высушить препарат на воздухе. 9. Заключить в «эукитт» (бальзам).
Импрегнапия пиридинированным карбонатом серебра (по Фернандесу-Галиано и Вильберту) Этот способ требует меньше всего времени и весьма прост. Его недостаток состоит в том, что организмы нужно обязательно фиксировать формалином; между тем некоторые протнсты формалином не фиксируются. дру~ой недостач.ок метода — плохая пригодность для изготов- 142 Протозоология пения постоянных препаратов, так как клетки в холе необходимого для этого обезвоживания очень часто сморщиваются.
Ход работы (этапы 1 — 4 выполняются в центрифужной пробирке илн «солонке»): 1. ! мл культуры простейших смешать с 1-2 каплями 35",~,-ного формалина н фиксировать 2 — 5 мин. 2. Затем добавить цо очереди, хорошо перемешивая после каждого добавления, 4 капли пиридина, 2 капли !ОУ;-ного раствора пептона (пептон, полученный ферментативным перевариванием казеина), 2 мл дистиллированной воды, 5 капель аммиачного карбоната серебра. Последний готовится следуюгцим образом: 50 мл бидистиллирован- ной воды подщелочить 2,5 мл рве~вора аммиака, растворить в ней 1 г карбоната серебра н долить бидистнллированной водой до 100 мл.
3. Пробы 2 — 3 мин нагревать на водяной бане прн 60'С 4. Когда раствор приобретет цвет коньяка, добавить 1 мл 55;-ного тиосульфата натрия. 5. Изучать временный «мокрый» препарат илн б. Обезволить в восходящем рацу спиртов (не всегда удачно!) и заключить в «эукитт» (бальзам). Импрегнация протеинатом серебра (по Тюффро и Вильберту) Этот метод дает очень тонкие цитологическне картины, но требует много времени и не всегда легко удается. Ход работы (этапы 1 — 7 проводятся в «солонках»); 1. Фиксировать объекты в течение !О мин в растворе Буэна-Аллена: 2,4 мл ледяной уксусной кислоты, 11,9 мл формалина, 35,7 мл насыщенного раствора пикриновой кислоты, 0,72 г кристаллического хромового ангидрида, 0,5 г мочевнны. 2. Промыть в дистиллированной воде.
3. Отбелить объекты, налив в «солонку» 1%-ный раствор гипохлорита натрия. 4. Лромъ~ть в дистиллированной воде. 5. Импрегнировать в О,6 †",,-ном растворе протаргола (12 ч при комнатной температуре или 30 †45 м в термостате при 40 — 50'С). б. Проявить ссребрение, налив в «солонку» раствор гидрохинона: 1 г гидрохинона, 5 г сульфита натрия, до 100 мл дистиллированной воды. Спецнальнак часть 143 7. Промыть дистиллированной водой.
8 Перенести объекты на предметное стекло н заключить в слой бедна с глицерином (1 часть яичного белка, ! часть глицерина). 9, Стекло высушить на воздухе (или нагреванием до 40 С) и на 2 мин опустить в 80;„'-ный спирт. 10. Промыть в водопроводной воде (2 мин), !1, тонировать в 5%-ном растворе хлорного золота (золото (111)-хлористоводородной кислоты), куда обмакнуть на короткое время. 12, Промыть в водопроводной воде (2 мин). 13, Фиксировать в 5%-ном растворе тиосульфата натрия (30 — 120 с).
14, Промыть в дважды сменяемой водопроводной воде (5 мин). !5. Обезводить в восходящем ряду спиртов. !6. Заключить в езукиттв (бальзам). Выявление органических внутренних скелетов Аксоподии Асг(порода (с. 77) укреплены пучками микротрубочек, т.е. органическими скелетными злементами. Скелетная природа микротрубочек, доказываемая перечисленными ниже опытами, основана на правильной упаковке этих органелл, которая може~ быть выявлена под поляризационным микроскопом благодаря двойному лучепреломлению аксоподий (рис.
115). Обработки, леполимеризующие микротрубочки Культуры Асз)лорйгуз (рис. 115), содержавзпиеся при комнатной температуре, переносят в холодильник (4'С). Через 30 — 60 мин все аксоподии втягиваются. После возврашения в комнатную температуру аксоподни снова вырастают за 30 — 60 мин в обычном числе и обычной формы. Сходный результат дает добавление к среде нескольких процентов колхнцина на 30 мин, После отмывки колхицина аксоподии снова вырастают. Объяснение: холодовый шок вызывае~ деполимеризацию микротрубочек и, как н колхицнн, препятствует их сборке. Аксоподиальные микротрубочки постоянно обновляются. Обработки, стабилизирующие микротрубочки К культуре Асз(аорйгуз добавляют препарат таксол в концентрации 0,5 — 1,5%.
Через несколько часов отмечается отчетливое увеличение числа и длины аксоподнй (рис. 115). Однако некоторые аксоподии представляются теперь не прямыми и жесткими, а сравнительно гибкими. 144 Протозоология Объяснение: таксол смешает нормальное равновесие между полимеризацией и деполимеризацией мнкротрубочек в сторону полимеризации. Кроме того, нарушается правильное связывание микротрубочек друг с другом, что приводит к гибкости аксоподий.
Строительство домиков у жгутиконосцев и инфузорий Детальных указаний по проведению опытов здесь дать нельзя. С некоторым терпением и при удаче можно найти соответствующие организмы в природе. Как правило, строительство домика занимает несколько часов. Некоторые важныс этапы образования домиков можно проследить на примере широко распространенной хрнзомонады Ргпидг»оп (рнс. ! 20), а также на морской инфузории-гетеротрихе Еи~оН(си)1па (рис. 118). Инцистирование и эксцистирование Целый ряд одноклеточных может инцистироваться и эксцистироваться в условиях эксперимента. Многообразие организмов, которые наблюдаются, если медленно высушенную почву снова залить в чашке Гретри водой, может быть очень впечатляющим. Очередность появления различных протистов с момента добавления воды может быть легко прослежена и запротоколирована. Инцистирование можно индуцнровать у некоторых организмов путем постепенного (продолжающегося несколько дней) высушнвання культур.
Для этого особенно пригодны почвенные амебы (с. 68) н почвенныс инфузории (с. 114). Рис. 120. Обрававапие домика у Глпадсуап. Привесе дяится 2"3 ч (по Херту). Спепяальяая часть 1чй Г3рикрепительныв устройства Наряду с одноклеточными, которые живут в домиках, заякоренных на субстрате, многие другие протисты тоже способны более или менее длительно прикрепляться к нему У свободноживущих форм известны различные способы прикрепления; посредством выделения слизистого материала !агап(ос), внутри- и внеклеточными стебельками (СагсЬеа(ипь Рог(1се))а), пальцевидными охватывающими выростамн тела (рис. 12!) н присоскообразными структурами (Тг1сйос)1па). Организмы, живущие внутри других животных, например Р)р!ошопас))с)в, имеют специальные присоски (см. рис.
39) или особым образом структурированные области тела, например эпнмериты грегарин 1см. рис. 72). Стебельки Стебельки формируются определенными стадиями жизненного цикла соответствующих одноклеточных (например, бродяжками). Впрочем, известны также виды, которые мокнут образовывать стебельки почти в любой момент своего существования. Способ образования стебельков у разных форм весьма различен. Так, некоторые хризомонады, например РогеиоосЬготояаа сначала выпускают цитоплазматичсский хвостовой отросток, вокруг которого выделяются нити хитина. Эти нити образуют полый стебелек, расширяющийся на верхнем конце наполобие рюмки.
Здесь обитает лишенная особых прикрепительных устройств клетка жгутиконосца, которая в конце концов снова округляется. Будучи потревожена„эта, казалось бы, сидячая форма может быстро оставлять свой стебелек и переходить к свободному плаванию. У этого жгутиконосца можно особенно легко прослеживать и хорошо документировать ход образования стебелька (рис. 122). Рис. 121. Ип4узории Ернсу11в 1юо)71 (Рее1сс)сида) и Ксатормуа сЬапот' (оиссос1а) прикрепляются к перитрихе Ар!азота атоеЬа, охватывая ее тело (по Матпюсу). ~о-азз $46 Протозоолопе мнм 2$' 10 0 30 60 90 мнн 120 Рнг.
)22. Ооразананнг анно ъна и нгнннно Роюънзсlнгоеозна а тели: а н1Э- юноеззэ препарат Ре нонна«, Ст-~оагоомн, Е неена Ри но Шненсду, Гз-фон|о Г. Редерера. Штингарог Ь Своболноплавазонв1е бродяжки сгьзячиз солнечннков отряда г)езшог)зогасЫа во время формирования стебелька выпусказот псевдоподию коп1рая предсгавляег собой.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
