Синтез и исследование новых амфифильных соединений на основе производных 3, 7-диазабициклононана (1105713), страница 15
Текст из файла (страница 15)
Окончательное разделение проводили на колонке,заполненной силикагелем в C6H14 (h=28 см, Ø=1 см). Элюировали гексаном, далеесмесями C6H14:C6H6 (100:1, 50:1, 30:1, 10:1, 1:1). После упаривания растворителя ввакууме из фракций C6H14:C6H6 (1:1), получили 0.14 г соединения 22 в виде белыхкристаллов (выход 1.2%). т.пл. 45-47˚С.1Н-ЯМР спектр (CDCl3): 0.89 (т., 6Н, J=9 Гц, -CH2-CH3), 1.27 (н.м., 52Н, -СН2-), 1.47 (н.м., 4Н, >N-CH2-CH2-), 2.49 (т., 4Н, J=7 Гц, >N-CH2-), 2.69 (c., 2H, >CCH2-C<), 2.86, 2.94 (д., 8Н, Jгем=11 Гц, >СННax , >CНHeq).13С-ЯМР спектр (CDCl3): 14.16, 22.69, 22.64, 27.18, 29.37, 29.70, 31.93, 35.01,56.25, 58.99, 84.75.ИК-спектр: 1560, 1470 (NO2-, вал.).
Найдено (%): C 70.47, H 11.60, N 8.23.C39H76N4O4. Вычислено (%): C 70.43, H 11.54, N 8.42.1044.5.Формированиемодифицированныхлипосомиизучениеихпроницаемости при различных рН*Размерлипосом(гидродинамическийдиаметр),электрофоретическуюподвижность частиц определяли на приборе Zeta Potential Analyzer (BrookhavenInstruments Corporation). Определение электропроводности образцов проводили спомощью прибора CDM 83 Conductivity Meter (Radiometer). рН растворов былизмерен с использованием прибора рНM 83 pH meter (Radiometer).Приготовление липосомМалые моноламеллярные липосомы со встроенными амфифильнымипроизводными 3,7-диазабицикло[3.3.1]нонана 6-9, 11, 13-17, 20-23 получалиметодом озвучивания [129].Дляэтогонеобходимыеколичествахлороформенныхрастворовфосфатидилхолина и амфифильные производные 3,7-диазабицикло[3.3.1]нонанасмешивали, затем удаляли органический растворитель на вакуумном роторномиспарителе при 50°С в течение 20 минут при скорости вращения 90 об/мин.Образовавшуюсятонкуюпленкулипидовдиспергировалив1млсоответствующего буфера, используя скоростную мешалку Vortex-Genie.
Такимобразом, получали суспензию мультиламеллярных липосом. После этого напрепарат воздействовали ультразвуком частоты 22 кГц в течение 600 с (2300с) внепрерывномрежимеприпостоянномохлажденииводой.Использовалиультразвуковой диспергатор фирмы ―Cole-Parmer Instrument‖(США).
Полученныелипосомы отделяли от титановой пыли** на центрифуге в течение 5 минут прискорости 12 тыс. об/мин. Мольная доля встроенного соединения составляла 0,25.Суммарная концентрация амфифильных соединений (липиды + встроенноесоединение) равнялась 10 мг/мл. Размер везикул измеряли методом квазиупругогосветорассеяния. В случае получения липосом, модифицированных 3,7-диацил-1,5диметил-3,7-диазабицикло[3.3.1]нонан-9-онами 6-9, стадии диспергирования иозвучивания проводили при Т 60-70ºС._________________________________________*эксперименты были проведены на кафедре высокомолекулярных соединений**образуется при озвучивании титановым щупом105Измерение гидродинамического диаметра и электрофоретической подвижностичастицЛипосомы получали по методике, описанной выше. Липиды диспергировалив 1 мл 10-2 М гидрокарбонатного буфера с рН 10.
Аликвоты готовых липосомдобавляли к соответствующим 10-2 М буферным растворам с рН 10, 9, 8, 7, 5.Измерение гидродинамического диаметра частицпроизводилиметодомквазиупругогов полученных системахсветорассеяния,электрофоретическуюподвижность частиц определяли методом электрофоретического рассеяния света.Гидродинамический диаметр (размер) липосом оценивали с помощьюприбора Brookhaven 90 Plus (Brookhaven Instruments Company, США) прификсированном угле (90). Электрофоретическая подвижность липосом и ихкомплексов с полиэлектролитами была измерена с использованием лазерногомикроэлектрофореза на приборе Brookhaven 90 Plus (Brookhaven InstrumentsCompany,США)втермостатируемойячейкепостандартнойметодике,предложенной производителем.ФлуориметрияИзмерение интенсивности флуоресценции растворов липосом проводили наспектрофлуориметре F-4000 (Hitachi, Япония).
Использовали кюветы шириной 1см. Измерения проводились в термостатируемой ячейке.СпектроскопияАналитическое определение концентраций липосом в растворе проводилиметодомспектроскопиинаспектрофотометреUV-Mini(Shimadzu)похарактеристическим полосам поглощения. Для этого измеряли оптическуюплотность растворов липосом с раствором CuSO4 различной концентрации придлине волны =740 нм в кюветах с толщиной поглощающего слоя 1,0 см.Дифференциальная сканирующая калориметрияФазовые переходы в липосомах исследовали методом дифференциальнойсканирующей калориметрии (ДСК) с использованием ДАСМ–4 (Биоприбор, РАН).Скорость нагрева во всех экспериментах составляла 1 °С/мин, каждый образецснимался последовательно 2-3 раза.106КондуктометрияИзмерение электропроводности растворов проводили на кондуктометреCDM 83 Radiometer (Дания).
Для измерений использовали полиэтиленовуюкювету, объем пробы составлял 1.2 мл [131].Измерение проницаемости липосом в зависимости от рН средыМодифицированные липосомы получали по методике, описанной выше. Настадии диспергирования во внутренний объем включали 1М раствор NaCl в 10-4Мбуфере с рН 10. Для удаления избыточного NaCl полученные липосомыдиализовали в 10-4М гидрокарбонатном буфере с рН 10 в течение 2.5 часов дополучения постоянного значения электропроводности буфера, близкому кэлектропроводности чистого буфера.Затем к аликвотам модифицированных липосом (200 мкл) добавляли по 1 мл10-3 М буферов с рН 10, 9, 8, 7, 5 и измеряли электропроводность для каждойполученной системы в течение первых 10 минут каждую минуту, затем черезполчаса, 45 минут, час, 24 часа.Для определения максимального содержания NaCl во внутреннем объемелипосомихразрушалидетергентомTRITONX-100иизмерялиэлектропроводность полученного образца.Титрование модифицированных липосом поли-(4-стиролсульфонатом) натрияМодифицированные липосомы получали по методике, описанной выше.Липиды диспергировали в 1мл 10-2М боратного буфера с рН 10.Рабочий раствор 4.8×10-3 М поли-(4-стиролсульфоната) натрия (ПСС натрия)готовили растворением необходимого количества полимера в дистиллированнойводе.а) Титрование липосом, модифицированных 3,7-дидодецил-1,5-динитро-3,7диазабицикло[3.3.1]нонаномАликвоту липосом (0.2 мл) разбавляли 1.5 мл 10-2М буфера с рН 5.
Кполученной системе прибавляли раствор 4.8×10-3М ПСС натрия с шагом 10 мкл.Точку эквивалентности определяли методом электрофоретического рассеяниясвета. Концентрацию положительно заряженных атомов азота рассчитывали поколичеству пошедшего на титрование рабочего раствора.107б) Титрование липосом, модифицированных 3,7-дигексадецил-1,5-динитро3,7-диазабицикло[3.3.1]нонаномАликвоту липосом (0.125 мл) разбавляли 1.6 мл 10-2М буфера с рН 5.К полученной системе прибавляли раствор 4.8×10-3М ПСС натрия с шагом10 мкл.
Точку эквивалентности определяли методом электрофоретическогорассеяниясвета.Концентрациюположительнозаряженныхатомоврассчитывали по количеству пошедшего на титрование рабочего раствора.азота1085. ВЫВОДЫ1. Разработаны методы синтеза 3,7-диалкил- и 3,7-диацил-1,5-диметил-3,7диазабицикло[3.3.1]нонан-9-онов с длинными алкильными заместителями приатомах азота.2. Впервые получены 3,7-дидодецил-, 3,7-дитридецил- и 3,7-дигексадецил-1,5динитро-3,7-диазабицикло[3.3.1]нонаны с длинными алкильными заместителями при атомах азота.3. Показано, что производные 1,5-диметил-3,7-диазабицикло[3.3.1]нонана слипофильными заместителями при атомах азота способны встраиваться влипидный бислой без нарушения целостности липосом.4.
Впервые обнаружено, что 3,7-диалкил-1,5-диметил-3,7-диазабицикло[3.3.1]нонан-9-онывприсутствиикатионовмеди(II)способныповышатьпроницаемость липидного бислоя и индуцировать высвобождение вещества,инкапсулированного во внутренний объем липосом.5. Показано повышение проницаемости липосом, модифицированных 3,7диалкил-1,5-динитро-3,7-диазабицикло[3.3.1]нонанамии3,7-диалкил-1,5-диметил-3,7-диазабицикло[3.3.1]нонан-9-онами при изменении рН среды.6. Обнаружено, что для создания стимул-чувствительных липосом (реагирующихна изменение pH и концентрации ионов меди (II)) наиболее приемлемымиявляются производные 3,7-диазабицикло[3.3.1]нонана с углеводороднымирадикалами при атомах азота, содержащими 11-13 атомов углерода.1096.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ1. Mazurov A.A., Kombo D.C., Akireddy S., Murthy S., Hauser T.A., Jordan K.G.,Gatto G.J., Yohannes D. Novel nicotinic acetylcholine receptor agonists containingcarbonyl moiety as a hydrogen bond acceptor. // Bioorg. Med. Chem. Lett. 2013. v.23. pp. 3927-3934.2. Бачурин С.О., Григорьев В.В., Зефиров Н.С., Лавров М.И., Лаптева В.Л.,Палюлин В.А. N,N‘-замещенные 3,7-диазабицикло[3.3.1]нонаны, обладающиефармакологической активностью, фармацевтические композиции на их основеи способ их применения.
// RU2333211.3. Haridas V., Rajgokul K.S., Sadanandan S., Agrawai T., Sharvani V. et al. BispidineAmino Acid Conjugates Act as a Novel Scaffold for the Design of Antivirals ThatBlock Japanese Encephalitis Virus Replication. // PLOS Neglected Tropicaldiseases. 2013. v. 7. n. 1.
pp. 1-11.4. Moriuchi T., Hirao T. Highly ordered structures of peptides by using molecularscaffolds. // Chemical Society Reviews. 2004. v. 33. pp. 294–301.5. Busche C., Comba P., Mayboroda A., Wadepohl H. Novel RuII complexes withbispidine-based bridging ligands: luminescence sensing and photocatalyticproperties. // Eur. J. Inorg.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
