Диссертация (1091824), страница 15
Текст из файла (страница 15)
Первоначально былиисследованы в режиме сканирования метанольные растворы концентрацией1мкг/мл стандартных образцов амфетамина, метамфетамина, МДА, МДМА,МДЕА и РСР и определены их времена удерживания и молекулярные ионы.Далее для каждого аналита измерены спектры дочерних ионов при разныхэнергиях столкновения в диапазоне от 5 до 40 эВ с шагом 5 эВ и выбранытри дочерних иона с наилучшими соотношениями сигнал/шум насоответствующих им ионных хроматограммах.
Затем определены энергиисоударения, при которых эти дочерние ионы имели наибольшуюинтенсивность. Определенные таким образом условия сканирования ивремена выхода всех аналитов представлены в таблице 4.5.1.Таблица 4.5.1 Условия сканирования и времена выхода целевых аналитовИсследуемоевеществоRT, Мол.
Молекулярный Дочерниемин массаионионы,m/zАмфетамин6,58135,2136,2 [M-H]+Метамфетамин6,91149,2150,2[M-H]+91119,2991,2865,35119,2391,1565,38Энергиясоударениядля данногоиона,В101530152040МДА6,90179,2180,3 [M+H]+МДМА7,13193,2194,3 [M-H]+МДЕА7,52207,3208,4 [M-H]+РСР9,45243,4244,3 [M-H]+163,56135,53105,3979,52163,20133,22105,2577,23163,50135,22133,30159,2186,1291,09152020301020303052020151535Таким образом, разработана методика подтверждающего анализастимуляторов (амфетамина, метамфетамина, МДА, МДМА, МДЕА) игаллюциногенов (РСР) в волосах методом ВЭЖХ-МС/МС. Время, требуемоена анализ одной пробы волос по данной методики, значительно меньше, чемпри использовании ГХ-МС и составляет 4 часа.4.6 Валидация методики подтверждающего анализа стимуляторов(амфетамина, метамфетамина, МДА, МДМА, МДЕА) и галлюциногенов(РСР) в волосах методом ВЭЖХ-МС/МСВалидацию методики проводили в три этапа, аналогичные описанным впункте 4.4.В качестве целевых аналитов были использованы представителистимуляторов – амфетамин и МДМА.4.6.1 Определение предела детектирования и предела количественнойоценкиГотовился пакет проб, отобранных из 5 заранее отмытых отпосторонних внешних загрязнителей образцов волос людей, неупотреблявших анализируемые вещества (в дальнейшем — "бланковыхпроб").
Каждую из бланковых проб делили на 3 части (соответствующие 3содержаниям анализируемых веществ) массой по 100 мг каждая. Путемдобавления к ним стандартных растворов аналитов в разных количествахготовили контрольные пробы волос с различными содержаниями целевыханалитов, указанными в таблице 4.6.1.1.92Таблица 4.6.1.1 Наличие сигналов амфетамина и МДМА в контрольныхпробахСодержаниеНаименование вещества ввеществаволосах(пг/мг)5Амфетамин10155МДМА1015(++++++Выявленный сигналобнаружено, - не обнаружено)++++++++++++++++++++Как видно из таблицы 4.6.1.1 при содержании анализируемых веществ5 пг/мг не наблюдалось пиков амфетамина в 3 образцах из 5 и МДМА – в 2образцах из 5.
Во всех пробах с содержанием амфетамина и МДМА 10 пг/мги 15 пг/мг присутствовали пики анализируемых веществ с соотношениемсигнал/шум не менее 3. Таким образом, пределы детектирования поамфетамину и МДМА составили 10 пг/мг. Согласно руководству поисследованию волос [54, 67], предел обнаружения амфетамина и МДМА вволосах должен быть не менее 0,1 нг/мг. Достигнутый предел обнаруженияразработанной методики превосходит требуемый в 10 раз.Методику можно считать прошедшей проверку на чувствительностьобнаружения вещества, поскольку предел детектирования не превысил10 пг/мг.Предел количественной оценки рассчитывали путем умножениявеличины предела детектирования на 10, что составляет 100 пг/мг дляамфетамина и МДМА.4.6.2 Определение линейного участка калибровочной кривойГотовился набор проб, состоящий из 6 бланковых образцов волосодного человека, не употреблявшего анализируемых веществ, в которыебыли внесены целевые вещества в различном количестве.
Итоговоесодержание анализируемых веществ в волосах представлено в таблице4.6.2.1. Приготовленные пробы исследовались по валидируемой методикетри раза.После трехкратного проведения анализа каждой пробы вычислялисреднюю площадь пика целевого аналита, соответствующую данному93уровню их содержания в волосах и строили зависимости этих площадей отисходного содержания анализируемого вещества в волосах, т.е.калибровочную кривую (см. рис.
4.6.2.1).Таблица 4.6.2.1 Содержание аналитов в волосах для построениякалибровочных графиковСодержание№ пробыаналитов в волосах,пг/мг110,0220,03100,04500,051000,0Рисунок 4.6.2.1 Калибровочные зависимости содержания амфетамина иМДМА в волосахДля каждой зависимости определен линейный участок и проведеналиния тренда. Для всех анализируемых веществ выводили уравнениеполученной прямой и рассчитывали коэффициенты корреляции.В результате анализа калибровоных зависимостей содержанияанализируемого вещества в волосах установили, что калибровочная криваялинейна во всем диапазоне исследуемых содержаний веществ в волосах икоэффициенты корреляции для всех исследуемых соединений составили0,99.944.6.3 Определение расширенной повторяемости с учетомпробоподготовкиГотовился набор из 3х бланковых проб волос разных людей, в которыевносили целевые аналиты в таких количествах, чтобы их содержание вволосах составляло 100 пг/мг.Проводили пробоподготовку и 5-кратный анализ данного набора изтрех проб по разработанной методике.В таблице 4.6.3.1 представлены рассчитанные для всех целевыханалитов значения Сm, Sc и.
Как видно из табл. 4.6.3.1 для обоиханализируемых веществ значения расширенной повторяемости непревышают 8%.Таблица 4.6.3.1 Данные по расширенной повторяемости методикиНазваниеСодержание,Сm, ед.Sc , ед.,%веществапг/мгАмфетамин100533944285245.34МДМА10044482833171627.13По результатам проведенной процедуры валидации методикиподтверждающего анализа стимуляторов (амфетамина, метамфетамина,МДА, МДМА, МДЕА) и галлюциногенов (РСР) в волосах методом ВЭЖХМС/МС можно сделать следующие выводы:предел детектирования методики для всех классов веществсоставляет 10 пг/мг, что в 10 раз превышает рекомендованный;предел количественного определения методики – 100 пг/мг;рабочий диапазон методики 10 – 1000 пг/мг;значения расширенной повторяемости не превышают 10%;разработанная методика удовлетворяет требованиям ГОСТР 8.563-2009.Данная методика также успешно применяется в экспертной практикеИнститута криминалистики Центра специальной техники ФСБ России.Общее время, которое требуется на анализ одной пробы волос по даннойметодике, не превышает 4х часов.4.7.
Анализ внешней поверхности волос на ТГК, каннабинол иканнабидиол методом ВЭЖХ-МС/МСОсновными компонентами марихуаны, гашиша и гашишного маслаявляются тетрагидроканнабинол (ТГК), каннабинол (КНБ) и каннабидиол95(КНД). В случае употребления данных наркотических средств или принахождении в задымленной помещении после их курения на внешнейповерхности волос могут детектироваться все три соединения. Ввидувысокой липофильности данных веществ лучший способ смыва их с внешнейповерхности волос – выдержка в течение 30 минут в растворе метанола илиацетонитрила в ультразвуке [122, 123]. Инструментальный анализ целевыханалитов можно проводить как методом ГХ-МС, ГХ-МС/МС, так и ВЭЖХМС/МС. В случае применения ГХ-МС требуется проведение дополнительнойстадии пробоподготовки – дериватизации с целью получения более летучихтриметилсилильных производных данных соединений.
Данный способявляется достаточно дорогостоящим, продолжительным по времени иприводит к потере аналитов. Использование метода ВЭЖХ-МС/МС нетолько исключает стадию дериватизации из пробоподготовки, сокращаетвремя анализа, но и позволяет достичь более низких пределовдетектирования. В связи с вышесказанным в качестве инструментальногометода анализа был выбран наиболее чувствительный и селективный методВЭЖХ-МС/МС.Исследования проводили на оборудовании, состоящем извысокоэффективного жидкостного хроматографа серии 1200 фирмы ―AgilentTechnologies‖ (США) и трехквадрупольного масс-селективного детектораTSQ Quantum фирмы ―Thermo Scientific‖ (США).
Разделение компонентовпроводили на хроматографической колонке Zorbax Eclipse Plus C18 (RRHD)размерами 2.1 мм х 150 мм с диаметром частиц сорбента 1.8 мкм вградиентном режиме. В качестве элюентов использовали 0,1% раствормуравьиной кислоты в метаноле (элюент А) и 0,1% раствор муравьинойкислоты в деионизированной воде (элюент Б). Скорость потока элюента –300 мл/мин. Условия работы хроматографа представлены в таблице 4.7.1.Таблица 4.7.1.
Условия хроматографированияВремя, минСодержание элюента Б, %0,0703,01006,01006,17010,070Определение условий детектирования ТГК, КНБ и КНД проводили спомощью метанольного раствора гашиша. Сканирование вели в режимемониторинга единичных реакций (SRM) в положительной ионизации (см.табл. 4.7.2).96Таблица 4.7.2. Параметры детектирования аналитовИсследуемое веществоТГККНБКНДЭнергиясоударения, ВДочерниеионы, m/zСоотношенияинтенсивностей, %315,2 [M+H]30252012319323536100254,85311,2 [M+H]+303030251952052082232314241005,05+3025201231932353010024RT,Мин4,37«Прекурсорион»+315,2 [M+H]С помощью модельных образцов волос, полученных путем добавленияк «чистым» волосам стандартного раствора гашиша, проведено сравнениеэффективности использования для проведения внешнего смыва метанола,ацетонитрила и смеси гексан:этилацетат в соотношении 5:1.
Оценкуэффективности проводили путем сравнения степеней извлечения целевогоаналита (ТГК), рассчитанных по формуле:SOSN100 %(4.7.1)где SO – площадь пика анализируемого вещества, добавленного к волосам,измеренная после проведения пробоподготовки; SN – площадь пика анализируемоговещества в том же количестве, в котором его добавляли к волосам.В результате проведенных исследований, эффективности смыва свнешней поверхности волос метанолом (αм=61,7%) и ацетонитрилом (αа=54,3%)оказались близки, что подтверждает пригодность любого из данныхрастворителей для анализа внешней поверхности волос. Степень извлеченияТГК в случае применения смеси гексан:этилацетат (5:1) оказалась самой низкойи составила 17,6%.Следующим необходимым этапом пробоподготовки волос кдальнейшему анализу их внутренней области является отмывка от внешних (вт.ч.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
