Диссертация (1091621)
Текст из файла
Федеральное государственное бюджетное образовательноеучреждение высшего образования«Тульский государственный университет»На правах рукописиЛЫОНГ ТХИ МОГЛИКОЛИПИДНЫЕ БИОСУРФАКТАНТЫ, ПРОДУЦИРУЕМЫЕНЕФТЕОКИСЛЯЮЩИМИ БАКТЕРИЯМИ РОДА RHODOCOCCUSПРИ ПОНИЖЕННОЙ ТЕМПЕРАТУРЕ03.01.06 - Биотехнология (в том числе бионанотехнология)ДИССЕРТАЦИЯна соискание ученой степени кандидата химических наукНаучный руководитель: Доктор химических наук,доцент Понаморѐва О.Н.Тула – 2018ОглавлениеВВЕДЕНИЕ ................................................................................................................................... 4ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР ........................................................................................................
91.1 Поверхностно-активные вещества, продуцируемые микроорганизмами ..................... 91.2. Трегалолипидные биосурфактанты бактерий-нефтедеструкторов рода Rhodococcus............................................................................................................................................. 131.2.1 Структурное разнообразие трегалолипидов, продуцируемых родококками .......... 131.2.2 Физиологическая роль и биологическая активность трегалолипидов ..................... 161.2.3 Характеристика трегалолипидов как сурфактантов .................................................. 241.2.4 Влияние субстратов на способность родококков продуцировать биосурфактанты.............................................................................................................................................
271.2.5 Адаптация бактерий рода Rhodococcus к пониженным температурам и продукциябиосурфактантов в этих условиях .................................................................................... 301.2.6 Биодеградация углеводродов нефти родококками при пониженых температурах 331.2.7 Применение трегалолипидных биосурфактантов, в том числе в биоремедиациизагрязненных территорий .................................................................................................
331.3 Методы изучения биосурфактантов ............................................................................... 371.3.1 Скрининговые методы определения поверхностной и эмульгирующей активности............................................................................................................................................. 381.3.2 Выделение, характеристика и очистка трегалолипидных биосурфактантов .......... 471.3.3 Определение структуры трегалолипидов.................................................................... 49Заключение..............................................................................................................................
522. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ............................................................ 542.1. Объекты исследования и условия культивирования ................................................... 542.2 Рост микроорганизмов и продуцирование биосурфактантов ......................................
552.3 Гидрофобность клеточной поверхности микроорганизмов ......................................... 562.4 Трансмиссивная электронная микроскопия .................................................................. 572.5 Содержание общих липидов клеток бактерий............................................................... 572.6. Клеточносвязанный гексадекан .....................................................................................
582.7 Выделение внеклеточных биосурфактантов ................................................................. 582.8 Тонкослойная хроматография гликолипидов ................................................................ 582.9 Определение жирнокислотного состава липидов и биосурфактанта .......................... 592.10 Разделение трегалолипидов методом колоночной хроматографии .......................... 592.11 Определение структуры биосурфактантов методом масс-спектрометрии ............... 6022.12 Физико-химические свойства трегалолипидов ........................................................... 613.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЯ ............................................................................. 653.1 Рост бактерий R. erythropolis X5 и R. erythropolis S67 и их способностьпродуцировать биосурфактанты в зависимости от источника углерода ..................... 673.2. Влияние температуры на способность родококков продуцировать биосурфактанты.............................................................................................................................................
683.3 Адгезивная активность бактерий R.erythropolis X5 и R.erythropolis S67 .................... 743.4 Общее содержание и жирнокислотный состав липидов бактерий и внеклеточныхлипидов ...............................................................................................................................
773.4.1 Выделение и характеристика суммарных липидов бактерий ................................... 773.4.2 Содержание связанного гексадекана в биомассе бактерий и жирнокислотныйсостав клеточных липидов ................................................................................................ 813.4.3 Жирнокислотный состав внеклеточных липидов ......................................................
853.5. Морфология и ультраструктурная организация клеток R. erythropolis X5 иR. erythropolis S67 при росте на гексадекане .................................................................. 883.5.1. Морфология R. erythropolis X5 и R. erythropolis S67 при росте на гексадекане .... 883.5.2. Ультраструктурная организация клеток R. erythropolis X5 и R. erythropolis S67при росте на гексадекане................................................................................................... 893.6 Выделение и характеристика гликолипидных биосурфактантов ................................ 933.6.1 Обнаружение гликолипидов в культуральной среде бактерий ................................
933.6.2. Выделение и очистка гликолипидных биосурфактантов ......................................... 943.5.2 Определение структуры трегалолипидов.................................................................... 973.7. Характеристика сукцинилтрегалолипидов как сурфактантов .................................. 1043.7.1 Критическая концентрация мицеллообразования .................................................... 1043.7.2 Солюбилизация н-гексадекана под действием сукцинилтрегалолипидов ............
1083.8 Биодеградация гексадекана бактериями R. erythropolis X5 и R. erythropolis S67 приучастии биосурфактантов ............................................................................................... 109ВЫВОДЫ .................................................................................................................................. 114СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ ..................................................................................................... 1163ВВЕДЕНИЕЗагрязнение окружающей среды углеводородами нефти являетсяглобальнойпроблемойвсовременноммире.Способностьмикроорганизмов к потреблению и утилизации углеводородов нефтихорошоизвестнаипозволяетиспользоватьихвтехнологияхбиоремедиации.
Представители рода Rhodococcus являются эффективнымидеструкторами углеводородов нефти различных групп, они легкоадаптируются к экстремальным условиям окружающей среды и частовходят в состав биопрепаратов для очистки от нефтяных загрязнений. Вусловиях холодного климата, где в последние годы интенсивно ведетсянефтедобыча, восстановление загрязненных территорий природнымимикроорганизмамипроисходиткрайнемедленно.Принизкихтемпературах многие углеводороды нефти переходят в твердое агрегатноесостояние, что значительно влияет на их биодоступность и степеньбиодеградациимикроорганизмами.Известно,чтобактерииродаRhodococcus продуцируют гликолипидные биосурфактанты (биоПАВ),повышающие биодоступность гидрофобных субстратов [1, 2].
Характеристики
Тип файла PDF
PDF-формат наиболее широко используется для просмотра любого типа файлов на любом устройстве. В него можно сохранить документ, таблицы, презентацию, текст, чертежи, вычисления, графики и всё остальное, что можно показать на экране любого устройства. Именно его лучше всего использовать для печати.
Например, если Вам нужно распечатать чертёж из автокада, Вы сохраните чертёж на флешку, но будет ли автокад в пункте печати? А если будет, то нужная версия с нужными библиотеками? Именно для этого и нужен формат PDF - в нём точно будет показано верно вне зависимости от того, в какой программе создали PDF-файл и есть ли нужная программа для его просмотра.