Главная » Просмотр файлов » Диссертация

Диссертация (1091621), страница 8

Файл №1091621 Диссертация (Гликолипидные биосурфактанты, продуцируемые нефтеокисляющими бактериями рода RHODOCOCCUS при пониженной температуре структура, свойства, роль в процессе биодеградации гидрофобных субстрато) 8 страницаДиссертация (1091621) страница 82018-01-18СтудИзба
Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла (страница 8)

Гидрофобные клетки связываются с капелькамиуглеводорода и поднимаются вместе с ним. Аккуратно выносят воднуюфазу и измеряют оптическую плотность при длине волны 600нм.Снижение мутности водной фазы коррелирует с гидрофобностью клеток.Процент клеток, связанных с гидрофобной фазой (H), рассчитывается поформуле:46где А0 - оптическая плотность суспензии до добавления субстрата; А оптическая плотность водной фазы после добавления субстрата.Количественное определение реплик. Метод разработан Розенберг[149] для идентификации и выделения гидрофобных микроорганизмов.Принцип метода заключается в присоединении бактериальных штаммов кгидрофобномуполистиролу,чтокоррелируетсгидрофобностьюклеточной поверхности.

На плоский стерильный диск из полистиролавносят агар, содержащий колонии для исследования. Колонии, которыепоявились на поверхности полистирола, промывают проточной водой дляудаления всех клеток, не связанных к гидрофобной поверхности. Длявизуализации прилипших колоний они фиксируются и окрашиваются. Длявыделения гидрофобных штаммов реплика может быть перенесена нановую стерильную чашку с агаром. В работе [150] продемонстрировано,что гидрофобность клеточной поверхности сильно коррелирует сосродством к полистиролу. Этот метод является недорогим способомидентификациимассивамикробныхштаммовдляпродукциибиосурфактантов.

Более того, идентификация и выделение потенциальныхштаммов могут быть объединены в один этап исследования.1.3.2 Выделение, характеристика и очистка трегалолипидныхбиосурфактантовДля выделения биосурфактантов из водных сред используют методэкстракции полярными органическими растворителями. Наиболее частоиспользуют системы хлороформ – метанол (2:1; 3:1) [56].

В работе [104]показано, что метил-трет-бутиловый эфир (МТБЭ), менее токсичен посравнению с хлороформом и метанолом, может использовать длявыделения гликолипидных биосурфактантов. Маркуез с соавт. [25]47проводили экстракцию трегалолипидов из бесклеточной среды смесьюэтилацетата – метанола (8: 1).Еще одним подходом для выделения биосурфактантов являетсякислотное осаждение. В работе [61] продемонстрировано, что аналогичноосаждению рамнолипидов и сурфактина можно выделить моно- идисукцинилтрегалолипиды путем изменения рН среды.Для выделения гликолипидов из Rhodococcus sp. H13A использовалиосаждение изопропанолом и фильтрования с использованием мембранныхфильтров [151].

Эта методика предполагает одновременное осаждениебелков,споследующейэкстракциейгликолипидовизосадкаорганическими растворителями.Содержание гликолипидов в культуральной среде или супернатантеможно определить косвенно через содержание сахаров с использованиемантронногореагента[152].Принципколориметрическогоанализазаключается во взаимодействии антронного или настольного реагента состатками сахаров с образованием цветного комплекса, содержаниекоторогоможетбытьопределеноспектрофотометрически.Дляколичественного определения также используют фенольный реагент [153].Однако, этот метод не является специфичным, так как с этими реагентамивзаимодействую любые сахара, находящиеся в культуральной среде,поэтому для специфического определения трегалолипидов следуетприменять методы высокой эффективной жидкостной хроматографии(ВЭЖХ).

Разделение трегалолипидов обычно проводят с использованиемлиботонкослойнойхроматографии(ТСХ),либопрепаративнойколоночной хроматографии.ТСХ - один из наиболее используемых методов для качественнойхарактеристикибиосурфактантов.Вкачествестационарнойфазыиспользуют пластины с силикагелем. Для разделения компонентов в смесигликолипидных биосурфактантов используют системы: хлороформ –48метанол – вода (65:15:2) [54], хлороформ – метанол – уксусная кислота –вода [27] и другие полярные системы, в состав которых входит хлороформкак основной компонент, в котором хорошо растворимы гликолипиды.ТСХширокоиспользуетсядляобнаружениягликолипидовлипидном экстракте, а также для получения информации о типебиосурфактантов (гликолипиды, липопептиды, фосфолипиды и т.д.).

Прииспользовании п-анисового альдегида трегалолипиды будут проявлятьзеленого цвета [54]. Наиболее часто гликолипиды обнаруживают сиспользованием нафтольного регента в виде сине-фиолетовых полос.Крупномасштабнуюиспользованиемочисткуколоночнойгликолипидовхроматографии.Однакопроводятэтосявляетсятрудоемкой задачей, так как трегалолипиды, обычно, являются минорнымкомпонентом в липидном экстракте. Присутствие в смеси различныхструктурныхтиповтрегалолипидов,другихсоединенийлипиднойприроды и избытка н-алкана, используемого в качестве субстрата, ещеусложняет процесс очистки. Для оптимизации метода очистки целевыхтрегалолипидовколоночнойхроматографиейбылапредложенапредварительная стадия флэш-хроматографии для удаления избыткауглеводородов гексаном перед колоночной хроматографией [16].1.3.3 Определение структуры трегалолипидовИдентификация структуры трегалолипидов может быть проведена сиспользованием комплекса методов, некоторые из которых основаны наизучении структуры самой молекулы, а в других необходимо разрушитьмолекулу на составные компоненты (углеводную часть, жирные кислоты ит.д.) (табл.

5).Масс-спектрометрия и С13-ЯМР является наилучшими методами дляструктурной характеристики интактных молекул. Анализ полного массспектра трегалолипидов позволяет определить молекулярную массу49присутствующих гликолипидных биосурфактантов [27]. Для определенияструктуры используют метод тандемной масс-спектрометрии.изучениягликолипидовпредложеноиспользоватьметодыДлямасс-спектрометрии с бомбардировкой ускоренными атомами (FAB/MS) [55], сионизацией электрораспылением (ESI-MS) [63, 23, 56, 26] и матричноактивированнойлазернойдесорбцией/ионизацией(MALDI)[154].Наиболее используемый метода – масс-спектрометрия с ионизациейэлектрораспылением. Однако в этом методе при изучении гликолипидовприменяют режим положительной ионизации, который может осложнитьинтерпретацию результатов из-за наличия как протонированных ионов, таки натриевых или калиевых аддуктов.

Поэтому ESI-MS в режимеотрицательных ионов может быть лучшей альтернативой, что былопродемонстрировано в недавнем исследовании с использованием ВЭЖХМС [25].ЯМР можно также использовать для характеристики интактныхтрегалолипидов, либо после их гидролиза. ЯМР-анализ полной молекулыотносительно трудно интерпретировать, поэтому анализ трегалозной частиявляется более предпочтительным, предоставляя информацию, котораяпомогает охарактеризовать положение, в котором жирные кислотыприсоединяются к углеводной структуре [61, 62, 63, 56] .Газовая хроматография с масс-спектрометрическим детектором(ГХ/МС) широко используется для характеристики остатков жирныхкислот, входящих в состав трегалолипидов.

После преэтерификации сметанолом липидная часть трегалолипидов превращается в метиловыеэфиры жирных кислот, что обеспечивает возможности их идентификацииметодом ГХ или ГХ/МС. Жирнокислотный состав трегалолипидов важендля подтверждения структуры трегалолипидов [65].50Таблица 5. Методы, используемые в определении структуры трегалолипидовМикроорганизмыпродуцентыRhodococcussp.H13-ARhodococcussp.H13-AR.wratislavientis BN38R.opacus 1CPБиосурфактантыТСХВЭЖХгликолипиды++гликолипиды+тетраэфирытрегалозыдимиколаттрегалозысукцинилтрегалолипидытрегалолипидыRhodococcussp. SD-74Rhodococcussp.

PML026R. erythropolis тетраэфиры51T7трегалозыTsukamurella трегалолипидыЯМРГХ/МСЖХ/МСMALDITOF/MSИКФурьеВЭЖХМСИсточник[60]+[151]++[63][56]++[26]++[27]+++МС/МС++[25][155]ТСХ – тонкослойная хроматография; ВЭЖХ – высокоэффективная жидкостная хроматография; ЯМР – ядерномагнитный резонанс; ГХ/МС- газовая хроматография с масс спектрометрическим детектором; ЖХ/МС – жидкостнаяхроматография с масс спектрометрическим детектором; MALDI-TOF/MS (Matrix Assisted Laser Desorption Ionization Time of Flight Mass-Spectrometry) –матрично-активированная лазерная десорбция/ионизация – времяпролетный массанализатор; ИК Фурье – инфракрасная спектроскопия с преобразованием Фурье; ВЭЖХ/МС – высокоэффективнаяжидкостная хроматография/ масс-спектрометрия; МС/МС – Тандемная масс-спектрометрия.ЗаключениеБиосурфактантыэмульгирующейобладаютактивностью,мицеллообразования,высокойнизкойнизкойповерхностнойкритическойтоксичностью.иконцентрациейОниявляютсябиоразлагаемыми и биосовместимыми, поэтому в последние годы находятширокоеприменениевразныхобластяхдеятельностичеловека.Микроорганизмы продуцируют целый ряд различных по природе иструктуреповерхностно-активныхвеществ(биосурфактантовибиоэмульгаторов).

Характеристики

Список файлов диссертации

Гликолипидные биосурфактанты, продуцируемые нефтеокисляющими бактериями рода RHODOCOCCUS при пониженной температуре структура, свойства, роль в процессе биодеградации гидрофобных субстрато
Документы
Свежие статьи
Популярно сейчас
Почему делать на заказ в разы дороже, чем купить готовую учебную работу на СтудИзбе? Наши учебные работы продаются каждый год, тогда как большинство заказов выполняются с нуля. Найдите подходящий учебный материал на СтудИзбе!
Ответы на популярные вопросы
Да! Наши авторы собирают и выкладывают те работы, которые сдаются в Вашем учебном заведении ежегодно и уже проверены преподавателями.
Да! У нас любой человек может выложить любую учебную работу и зарабатывать на её продажах! Но каждый учебный материал публикуется только после тщательной проверки администрацией.
Вернём деньги! А если быть более точными, то автору даётся немного времени на исправление, а если не исправит или выйдет время, то вернём деньги в полном объёме!
Да! На равне с готовыми студенческими работами у нас продаются услуги. Цены на услуги видны сразу, то есть Вам нужно только указать параметры и сразу можно оплачивать.
Отзывы студентов
Ставлю 10/10
Все нравится, очень удобный сайт, помогает в учебе. Кроме этого, можно заработать самому, выставляя готовые учебные материалы на продажу здесь. Рейтинги и отзывы на преподавателей очень помогают сориентироваться в начале нового семестра. Спасибо за такую функцию. Ставлю максимальную оценку.
Лучшая платформа для успешной сдачи сессии
Познакомился со СтудИзбой благодаря своему другу, очень нравится интерфейс, количество доступных файлов, цена, в общем, все прекрасно. Даже сам продаю какие-то свои работы.
Студизба ван лав ❤
Очень офигенный сайт для студентов. Много полезных учебных материалов. Пользуюсь студизбой с октября 2021 года. Серьёзных нареканий нет. Хотелось бы, что бы ввели подписочную модель и сделали материалы дешевле 300 рублей в рамках подписки бесплатными.
Отличный сайт
Лично меня всё устраивает - и покупка, и продажа; и цены, и возможность предпросмотра куска файла, и обилие бесплатных файлов (в подборках по авторам, читай, ВУЗам и факультетам). Есть определённые баги, но всё решаемо, да и администраторы реагируют в течение суток.
Маленький отзыв о большом помощнике!
Студизба спасает в те моменты, когда сроки горят, а работ накопилось достаточно. Довольно удобный сайт с простой навигацией и огромным количеством материалов.
Студ. Изба как крупнейший сборник работ для студентов
Тут дофига бывает всего полезного. Печально, что бывают предметы по которым даже одного бесплатного решения нет, но это скорее вопрос к студентам. В остальном всё здорово.
Спасательный островок
Если уже не успеваешь разобраться или застрял на каком-то задание поможет тебе быстро и недорого решить твою проблему.
Всё и так отлично
Всё очень удобно. Особенно круто, что есть система бонусов и можно выводить остатки денег. Очень много качественных бесплатных файлов.
Отзыв о системе "Студизба"
Отличная платформа для распространения работ, востребованных студентами. Хорошо налаженная и качественная работа сайта, огромная база заданий и аудитория.
Отличный помощник
Отличный сайт с кучей полезных файлов, позволяющий найти много методичек / учебников / отзывов о вузах и преподователях.
Отлично помогает студентам в любой момент для решения трудных и незамедлительных задач
Хотелось бы больше конкретной информации о преподавателях. А так в принципе хороший сайт, всегда им пользуюсь и ни разу не было желания прекратить. Хороший сайт для помощи студентам, удобный и приятный интерфейс. Из недостатков можно выделить только отсутствия небольшого количества файлов.
Спасибо за шикарный сайт
Великолепный сайт на котором студент за не большие деньги может найти помощь с дз, проектами курсовыми, лабораторными, а также узнать отзывы на преподавателей и бесплатно скачать пособия.
Популярные преподаватели
Добавляйте материалы
и зарабатывайте!
Продажи идут автоматически
6376
Авторов
на СтудИзбе
309
Средний доход
с одного платного файла
Обучение Подробнее