Главная » Просмотр файлов » Диссертация

Диссертация (1091621), страница 7

Файл №1091621 Диссертация (Гликолипидные биосурфактанты, продуцируемые нефтеокисляющими бактериями рода RHODOCOCCUS при пониженной температуре структура, свойства, роль в процессе биодеградации гидрофобных субстрато) 7 страницаДиссертация (1091621) страница 72018-01-18СтудИзба
Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла (страница 7)

Уильямсен и Карлсон [134] аналогичный подход дляобнаружениябиосурфактантовиихпродуцентов:эффективнымипродуцентами биосурфактантов являются бактериями, которые способныснижать поверхностное натяжение среды больше чем на 20 мН/м, посравнению с дистиллированной водой.Асимметрический анализ формы капли (Axisymmetric drop shape analysisby profile -ADSA). Анализ формы капель является одним оптическимметодомопределенияповерхностного39натяжения.Дляскринингабиосурфактантов он впервые был применен [135]. Основной принципзаключается в том, что форма капель жидкости сильно зависит отповерхностного натяжения жидкости.

Капельки жидкостей с низкимповерхностным натяжением более склонны отклоняться от идеальносферической формы, чем капельки жидкостей с высоким поверхностнымнатяжением (рис.9).Рисунок 9. Форма сидячей капли с главными радиусами кривизны r1 и r2.Для анализа формы капель 100 мкл бактериальной суспензиипомещаютнаповерхностьтефлона.Профилькаплиопределяютконтурным монитором как функция времени (в течение 2 часов). Послеэтого поверхностное натяжение суспензии можно рассчитать по профилямкапель с помощью схемы решения, разработанной Ротенбергом ссоавторами [136].где ∆ρ – разность давлений на границе раздела, r1, r2 - главные радиусыкапли (рис.

8),σ – поверхностное натяжение, мН/мПоказано, что анализ формы капли может быть использован длямониторингабактерий-продуцентовбиосурфактантов[135].Преимущество метода - небольшое количество образца; Недостатки требуется специальная камера и программное обеспечение; расчетповерхностного натяжения довольно сложен. Кроме того, различныеобразцы не могут быть измерены параллельно.40Метод формы подвесной капли (The pedant drop shape technique)представляет собой оптический метод измерения межфазного натяжения.Капля жидкости может свисать с конца капилляра (рис. 10). Онапринимает равновесный профиль, который является уникальной функциейрадиуса трубки, межфазного натяжения, плотности и гравитационногополя.Рисунок 10.

Форма подвесной капли с экваториальным диаметром de инаименьшим диаметром dsПо Тадросу [137], межфазное натяжение рассчитывается последующему уравнению:∆2== () ()где Δρ - разность плотностей между двумя фазами, ds - экваториальныйдиаметр капли, de - наименьший диаметр висячей капли (рис. 10). Hявляется функцией ds и de.Модификацией этого метода является измерение в обратном режиме[138]. Небольшой объем воздуха вдували в жидкость и измеряли формувоздушного пузырька в жидкости. Недостатком метода подвесной формы41капли является то, что не могут выполняться измерения большогоколичества образцов одновременно.Косвенное измерение поверхностной/межфазной активности.Метод падения капели (Drop Collapse Assay).

Заин с соавт. В работе[139] авторы разработали метод коллапса капель. Этот метод основан надестабилизации жидкой капели биосурфактантами. Капели жидкости(культуральнаясреда,биосурфактантов)бесклеточныйнаносятнасупернатант,твердуюсуспензияповерхность,покрытуюгидрофобным субстратом. В случае отсутствия биосурфактантов полярныемолекулы воды отталкиваются от гидрофобной поверхности, и каплиостаются стабильными. Наоборот, в присутствии биосурфактантов каплирасширяются или даже разрушаются из-за уменьшения силы илимежфазногонатяженияповерхностью.биосурфактантовмеждуСтабильностьикаплейкапеликоррелируетсжидкостизависитигидрофобнойотповерхностнымконцентрацииимежфазнымнатяжением.ПодобныйанализбылописанПерссониМолин[140]сиспользованием поверхности стекла вместо поверхности, покрытойгидрофобным субстратом.

В работе [141] показано, что этот метод можетбыть использован как количественный для очищенных биосурфактантовпутем измерения размера капель с помощью микрометра. На этой основескрининг может выполниться автоматически в микропланшетах, при этомбесклеточный супернатант окрашивали для улучшения визуальногоэффекта, как описано в работе [142]. Метод падения капели выполняетсябыстро и легко на небольшом объеме образца, не требует специальногооборудования [143].

Кроме того, его можно проводить в микропланшетах[144]. Недостаток метода заключается в том, что в образце должноприсутствовать больше количество биосурфактантов, чтобы вызвалосьпадение капель жидкости на гидрофобных поверхностях.42Метод анализа с помощью микропланшетов. Поверхностнаяактивность биосурфактантов, продуцируемых разными бактериями, можетоцененакачественноспомощьюмикроплашетногоанализа,разработанного и запатентованного Во и Коттингем [145]. Метод основаннаизмененииоптическогоискажения,котороевызываетсябиосурфактантами в водной смеси.

Чистая вода в гидрофобной лункеимеетровнуюповерхность.Наличиебиосурфактантоввызываетсмачивание на краю лунок, и поверхность жидкости становится вогнутой ипринимает форму рассеивающейся линзы. При выполнении анализананосят 100мкл образца из каждого штамма (среда, супернатанта) в 96луночный планшет, который помещают на листе бумаги с сеткой. Наличиебиосурфактантов в образце отражается вогнутой поверхностью (рис. 11).Оптическое искажение сетки обеспечивает качественный анализ приналичии биосурфактантов.

Преимущества метода включаются в простомбыстром выполнении; высокая чувствительность позволяет выполнятьанализ большого количества образцов одновременно, требуется небольшойобъем образца (100мкл). Кроме того, этот метод подходит дляавтоматизированного скрининга с высокой производительностью [138].Рисунок 11.

Микропланшеты (слева – наличие рамнолипида в смеси;справа – чистая вода) [132]43Анализ проницаемости. Метод разработан Maczek и коллеги [142] иподходит к скринингу биосурфактантов в среде. Метод основан навзаимодействии двух нерастворимых фаз, которое приводят к изменениюокраски. Для этого лунку микропланшета заполняют 150мкл гидрофобнойпасты, состоящей из смеси силикагеля с гидрофобным субстратом(углеводород, нефть, масло). Пасту покрывают 10мкл гидрофобногосубстрата. Затем образцы окрашивают добавлением 10мкл окраски к 90мклобразца.Приналичиибиосурфактантовгидрофильнаяжидкостьпрорывается через барьер гидрофобной пленки в пасту.

Силикагель входитв гидрофильную фазу, а верхняя фаза будет меняться от красного добелого в течение 15 минут (рис. 12).Рисунок 12. Вид сверху на 96-луночный планшет: от 1 до 5 – образцы, вкоторых присутствуют биосурфактанты: 2 - низкая концентрация; 1,3,4 средняя концентрация; 5 - высокая концентрация; 6- отрицательныйконтроль [142].Описываемый эффект основан на том, что силикагель поступает вгидрофильную фазу из гидрофобной пасты гораздо быстрее, еслиприсутствуют биосурфактанты. Образцы, в которых нет биосурфактантов,становится мутным, но остается красным. Это простой метод длякачественного скрининга большого количества образцов. Он можетприменяться в качестве метода скрининга с высокой производительностьюАнализразбрасываниянефти(Oilspreadingassay).Анализразбрасывания нефти был разработан [146].

В чашку Петри помещают 40млдистиллированнойгидрофобнымслоемводы,наповерхности(10млсырой44нефти).которойДляпокрываетобнаружениябиосурфактантов, аккуратно наносят 10мкл образца в центр гидрофобногослоя. В наличии биосурфактантов, нефть вытесняется и образуетсяочищающая зона (рис. 13), диаметр которой на поверхности нефтикоррелируетсактивностьюбиосурфактантов,такженазываемойактивностью вытеснения нефти. Для чистого биосурфактанта приведеналинейная корреляция между количеством биосурфактанта и диаметромзоны вытеснения.Рисунок 13.

Тест по вытеснению нефти на присутствие биосурфактантов(справа) [147]Метод вытеснения нефти выполняется быстро и легко, не требуетспециального оборудования и небольшого объема образца [143]. Он можетприменяться как при низкой активности биосурфактантов, так и принизкой их концентрации. Плаза и др. [143] и Юсеф с соавторами [148]продемонстрировали, что метод вытеснения нефти является надежным дляобнаружения биосурфактантов, продуцируемых разнымиштаммамибактерий.Определение эмульгирующей активности.Индексэмульгирования.Метод,основаннаспособностьбиосурфактантов эмульгировать двух нерастворимых жидкостей, былразработан Купером и Голденбергом [133].

Для определения индексаэмульгирования к воде добавляют гидрофобный субстрат (керосин,гексадекан или др.). Смесь интенсивно встряхивают в течение 2 минут.Через 24 часа измеряют высоту стабильного слоя эмульсии. Индекс45эмульгирования через 24 часа (E24) рассчитывается как отношение высотыслоя эмульсии и общей высоты жидкости.ИндексэмульгированияE24коррелируетсконцентрациейбиосурфактантов, но не коррелирует с их поверхностной активностью.Такой метод простой, можно применять для скрининга биосурфактантов,продуцируемых в среде бактериями.Гидрофобность клеточной поверхности.Взависимостиотмеханизмапоглощенияуглеводородовмикроорганизмы могут обладать высокой и/или низкой поверхностнойгидрофобностью.Какправило,какиемикроорганизмыпоглощать углеводороды путем прямоговысокуюгидрофобностьклеточнойспособныконтакта, демонстрируютповерхность.Гидрофобностьклеточной поверхности определяют по адгезии микроорганизмов куглеводородам или гидрофобной поверхности полистирола.Бактериальная адгезия к углеводородам (BATH).

Метод разработанРозенберг и др. [149]. Это простой фотометрический метод дляопределения гидрофобности клеточных поверхности. Метод основан настепени сцепления клеток с капельками жидких углеводородов. Промытыеклетки ресуспендируют в физраствор или воду, затем смешивают сопределенным объемом жидкого углеводорода (гексадекана, октана).Интенсивно встряхивают, суспензию оставляют в течение 10 минут прикомнатной температуре.

Характеристики

Список файлов диссертации

Гликолипидные биосурфактанты, продуцируемые нефтеокисляющими бактериями рода RHODOCOCCUS при пониженной температуре структура, свойства, роль в процессе биодеградации гидрофобных субстрато
Документы
Свежие статьи
Популярно сейчас
Как Вы думаете, сколько людей до Вас делали точно такое же задание? 99% студентов выполняют точно такие же задания, как и их предшественники год назад. Найдите нужный учебный материал на СтудИзбе!
Ответы на популярные вопросы
Да! Наши авторы собирают и выкладывают те работы, которые сдаются в Вашем учебном заведении ежегодно и уже проверены преподавателями.
Да! У нас любой человек может выложить любую учебную работу и зарабатывать на её продажах! Но каждый учебный материал публикуется только после тщательной проверки администрацией.
Вернём деньги! А если быть более точными, то автору даётся немного времени на исправление, а если не исправит или выйдет время, то вернём деньги в полном объёме!
Да! На равне с готовыми студенческими работами у нас продаются услуги. Цены на услуги видны сразу, то есть Вам нужно только указать параметры и сразу можно оплачивать.
Отзывы студентов
Ставлю 10/10
Все нравится, очень удобный сайт, помогает в учебе. Кроме этого, можно заработать самому, выставляя готовые учебные материалы на продажу здесь. Рейтинги и отзывы на преподавателей очень помогают сориентироваться в начале нового семестра. Спасибо за такую функцию. Ставлю максимальную оценку.
Лучшая платформа для успешной сдачи сессии
Познакомился со СтудИзбой благодаря своему другу, очень нравится интерфейс, количество доступных файлов, цена, в общем, все прекрасно. Даже сам продаю какие-то свои работы.
Студизба ван лав ❤
Очень офигенный сайт для студентов. Много полезных учебных материалов. Пользуюсь студизбой с октября 2021 года. Серьёзных нареканий нет. Хотелось бы, что бы ввели подписочную модель и сделали материалы дешевле 300 рублей в рамках подписки бесплатными.
Отличный сайт
Лично меня всё устраивает - и покупка, и продажа; и цены, и возможность предпросмотра куска файла, и обилие бесплатных файлов (в подборках по авторам, читай, ВУЗам и факультетам). Есть определённые баги, но всё решаемо, да и администраторы реагируют в течение суток.
Маленький отзыв о большом помощнике!
Студизба спасает в те моменты, когда сроки горят, а работ накопилось достаточно. Довольно удобный сайт с простой навигацией и огромным количеством материалов.
Студ. Изба как крупнейший сборник работ для студентов
Тут дофига бывает всего полезного. Печально, что бывают предметы по которым даже одного бесплатного решения нет, но это скорее вопрос к студентам. В остальном всё здорово.
Спасательный островок
Если уже не успеваешь разобраться или застрял на каком-то задание поможет тебе быстро и недорого решить твою проблему.
Всё и так отлично
Всё очень удобно. Особенно круто, что есть система бонусов и можно выводить остатки денег. Очень много качественных бесплатных файлов.
Отзыв о системе "Студизба"
Отличная платформа для распространения работ, востребованных студентами. Хорошо налаженная и качественная работа сайта, огромная база заданий и аудитория.
Отличный помощник
Отличный сайт с кучей полезных файлов, позволяющий найти много методичек / учебников / отзывов о вузах и преподователях.
Отлично помогает студентам в любой момент для решения трудных и незамедлительных задач
Хотелось бы больше конкретной информации о преподавателях. А так в принципе хороший сайт, всегда им пользуюсь и ни разу не было желания прекратить. Хороший сайт для помощи студентам, удобный и приятный интерфейс. Из недостатков можно выделить только отсутствия небольшого количества файлов.
Спасибо за шикарный сайт
Великолепный сайт на котором студент за не большие деньги может найти помощь с дз, проектами курсовыми, лабораторными, а также узнать отзывы на преподавателей и бесплатно скачать пособия.
Популярные преподаватели
Добавляйте материалы
и зарабатывайте!
Продажи идут автоматически
6489
Авторов
на СтудИзбе
303
Средний доход
с одного платного файла
Обучение Подробнее