Диссертация (Особенности иммунитета у недоношенных новорожденных детей с респираторными нарушениями инфекционного и неинфекционного генеза), страница 13

В табл. 5 представлено содержаниеВ-клеток данных субпопуляций в исследуемых группах.Таблица 5.Содержание субпопуляций В-лимфоцитов, Ме (25-й – 75-й процентили)Подгруппа 1а,Группа 2,n=10n=12%15,2 (10,68-17,35)15,4 (11,10-18,78)0,60х109/л5,2 (4,09-5,59)4,5 (3,90-5,12)0,1740,4 (29,7-45,1)56,0 (45,3-64,9)0,0005B159,6 (54,8-70,3)44,0 (35,1-54,8)0,0005транзиторные0,98 (0,97-0,99)0,97 (0,94-0,98)0,09незрелые2,6 (1,91-3,36)1,8 (1,36-1,97)0,039наивные94,2 (92,2-96,0)94,0 (92,7-95,9)0,80В-клетки памяти2,6 (1,70-3,94)4,2 (2,76-5,11)0,06«переключенные»0,42 (0,28-0,93)1,5 (0,75-3,61)0,03«непереключенные»2,0 (1,36-2,80)1,8 (1,51-2,61)0,92Субопуляции В-клетокСреди CD19+ лимфоцитов, %общеесодержаниеCD19+ клетокВ2PПримечание: подгруппа 1а – недоношенные дети без признаков инфекции,группа 2 – здоровые доношенные новорожденныеПолученные данные свидетельствуют о значимо болеевысокомсодержании В1 клеток и незрелых В-лимфоцитов в пуповинной кровинедоношенных детей (подгруппа 1а) по сравнению с доношенными (группа 2).73Содержание В-клеток памяти, напротив, было ниже в крови новорожденных из1а подгруппы.

Следует отметить, что среди В-клеток памяти у детей изподгруппы 1а преобладали лимфоциты, в которых не произошло переключенияклассов иммуноглобулинов («непереключенные»).Факторами роста, пролиферации и дифференцировки для В-лимфоцитовявляются цитокины, относящиеся к семейству TNF: BAFF и APRIL. Данныефакторы связываются с рецепторами на поверхности клеток: BAFF-R (CD268)для BAFF и TACI (CD267) для BAFF и APRIL. Нами было оцененоотносительноеиабсолютноесодержаниеCD19+лимфоцитов,экспрессирующих CD268 и CD267 (рис. 11).CD19+CD267+CD19+CD268+Содержание клеток, х109/лБСодержание клеток, %АCD19+CD267+CD19+CD268+Рисунок 11. Относительное (А) и абсолютное (Б) содержание В-лимфоцитов,экспрессирующих TACI (CD267) и BAFF-R (CD268), в пуповинной кровиноворожденныхВ пуповинной крови недоношенных новорожденных из подгруппы 1аотмечено более низкое относительное и абсолютное содержание CD267+ Вклеток по сравнению с детьми из группы 2.

В то же время, содержание Влимфоцитов, экспрессирующих BAFF-R (CD268), статистически значимо неразличалось (Р>0,05).74Интенсивность экспрессии CD267 и CD268 была значимо выше на Влимфоцитах пуповинной крови недоношенных детей по сравнению сдоношенными (рис.12).БИнтенсивностьфлуоресценции, MFIИнтенсивностьфлуоресценции, MFIАРисунок 12. Интенсивность экспрессии TACI (А) и BAFF-R (Б) на В-клетках впуповинной крови новорожденных детейГуморальнаязащитановорожденныхобусловленаколичествомиспецифичностью материнских IgG, активно проникающих через плаценту в 3триместре беременности, поскольку синтез собственных иммуноглобулиновнеонатальными клетками начинается лишь на 33-34 неделе гестации.В пуповинной крови недоношенных новорожденных было отмеченоболее низкое содержание IgG по сравнению с детьми, родившимися в срок:7,0±2,05 г/л против 9,4±2,48 г/л (Р=0,007).

Содержание IgM в пуповинной кровиноворожденных различного гестационного возраста значимо не различалось:0,09±0,04 г/л и 0,09±0,05 г/л (Р=0,99).Таким образом, нами получены данные о более интенсивной экспрессиирецепторов к ростовым факторам на В-лимфоцитах у недоношенныхноворожденных по сравнению с детьми, родившимися в срок, низкомсодержании в их крови В-лимфоцитов памяти с преобладанием популяцииклеток, в которых не произошло переключения классов иммуноглобулинов, чтосвидетельствует о незрелости В-клеточного звена их иммунной системы. В то75же время, содержание субпопуляций Т-лимфоцитов в пуповинной кровиноворожденных существенно не зависит от гестационного возраста.3.2.4. Цитокиновый статус новорожденных детейМетодоммультиплексногоанализабылооцененосодержаниепровоспалительных (IL-1b, IL-2, IL-6, IL-9, IL-12, IL-15, IFNγ, TNFα),противовоспалительных (IL-4, IL-5, IL-10, IL-13, IL-1Ra) цитокинов, хемокинов(IL-8, Eotaxin, IP-10, MCP-1, MIP-1a, MIP-1b) и ростовых факторов (IL-7, VEGF,PDGF-bb, G-CSF, GM-CSF, FGF-basic) в плазме пуповинной крови.Отношениесодержанияцитокиноввплазмепуповиннойкровинедоношенных новорожденных к аналогичным показателям в крови здоровыхдетей, родившихся в срок, представлено на рис.

13.АБВРисунок 13. Сравнение содержания хемокинов (А), провоспалительных (Б) ипротивовоспалительных (В) цитокинов в плазме пуповинной кровиноворожденных детейКрасным цветом показано отношение уровня цитокинов в плазмепуповинной крови недоношенных новорожденных к уровню цитокинов впуповинной крови доношенных детей,синим – равенство значенийПрисравненииуровняхемокинов,провоспалительныхипротивовоспалительных цитокинов в группах новорожденных детей не быловыявлено значимых различий (Р>0,05). Однако, следует отметить, чтоотношение содержания TNFα к IL-4 было значимо выше в группе здоровых76доношенных детей, чем у недоношенных новорожденных: 59,6 (45,65-97,65)против 28,9 (15,53-43,92), Р=0,015.

По имеющимся в литературе данным,многиепровоспалительныецитокиныучаствуютвзапускепроцессасамопроизвольных родов [30]. TNFα – ключевой провоспалительный цитокин,активирующий естественные киллерные клетки, стимулирующий продукциюIL-1, IL-6, индуцирующий экспрессию молекул адгезии на эндотелиальныхклетках сосудов. Можно предположить, что установленное более выраженноепреобладание TNFα над противовоспалительным IL-4 во второй группеноворожденных во многом обусловлено доношенным сроком беременности кмоменту родоразрешения [150].Таким образом, нами показано, что, несмотря на повышение секреторнойактивности продуцирующих цитокины клеток иммунной системы плода,вызванной его адаптацией к процессу родов, у новорожденных детей безпризнаков инфекционно-воспалительных заболеваний содержание цитокинов впуповинной крови не зависит от гестационного возраста.3.3.

Иммунологические особенности недоношенных детей с врожденнойпневмониейНезрелостьдыхательнойсистемынедоношенныхноворожденныхзачастую является причиной наличия у них респираторных нарушений. В то жевремя, течение инфекционно-воспалительного процесса также может являтьсяпричиной дыхательных расстройств у детей, родившихся раньше срока.Врожденная пневмония – частое осложнение раннего неонатального периода унедоношенных новорожденных, являющееся одной из основных причинмладенческой смертности. Заражение ребенка может происходить каквнутриутробно, так и интранатально.

Нами было проведено сравнениефенотипаиммунныхклеток,функциональнойактивностифагоцитов,содержания цитокинов и иммуноглобулинов в крови недоношенных детей сдыхательныминарушенияминеинфекционногогенезаврожденной пневмонией при рождении и на 3 сутки жизни.(ТТН,РДС)и773.3.1. Фенотипические и функциональные особенности фагоцитовпуповинной и периферической крови недоношенных новорожденныхПо результатам общего анализа крови, не было выявлено значимыхмежгрупповых различий в содержании лейкоцитов различных популяций впуповинной и периферической крови (Р>0,05) недоношенных новорожденных.Однако, при сравнении количества лейкоцитарных клеток при рождении и на 3сутки жизни, в 1б подгруппе детей с врожденной пневмонией было обнаруженозначимо более низкое число лимфоцитов в периферической крови посравнению с пуповинной.При анализе экспрессии рецепторов к опсонинам на нейтрофильныхгранулоцитах и моноцитах пуповинной крови было отмечено, что в 1бподгруппе недоношенных детей интенсивность экспрессии (MFI) CD64 нанейтрофилах значимо выше, чем в 1а подгруппе: 52,9 (48,78-73,11) против 44,1(39,09-52,23) (Р=0,008).

Относительное содержание (%) CD16+ моноцитов впуповинной крови также выше в подгруппе новорожденных с пневмонией: 18,6(11,71-27,09) против 11,4 (7,67-18,31) (Р=0,016).По сравнению с пуповинной кровью, в периферической кровинедоношенных детей обеих подгрупп отмечена более высокая интенсивностьэкспрессии апоптотической молекулы CD95 (Р=0,007 в 1а и Р<0,00001 в 1бподгруппе) и высокоаффинного FcγRI (CD64) на нейтрофильных гранулоцитах(Р=0,047 в 1а и Р=0,011 в 1б подгруппе). Более интенсивная экспрессиярецепторов к ростовым факторам на фагоцитах, активационной молекулы CD38и патоген-распознающих рецепторов CD64 и TLR4 на моноцитах былавыявлена только в 1а подгруппе новорожденных без признаков инфекции(Р<0,05 во всех случаях).

Напротив, у детей из 1б подгруппы на 3 сутки жизниотмечалось существенно более низкое по сравнению с пуповинной кровьюсодержание нейтрофилов, экспрессирующих TLR2 и TLR4 (Р<0,05), а такжеHLA-DR+ моноцитов и экспрессии на них данной молекулы (Р<0,01).78В периферической крови детей с врожденной пневмонией (подгруппа 1б)выявлена более низкая интенсивность экспрессии CD16 на фагоцитах (Р<0,05),CD38 (Р=0,0007) и CD64 (Р=0,03) на моноцитах, чем у новорожденных безпризнаков инфекции (подгруппа 1а).

Содержание HLA-DR+ моноцитов иэкспрессия на них данной антиген-презентирующей молекулы также былизначимо ниже в 1б подгруппе недоношенных детей (Р<0,01).На рис. 14 показаны результаты оценки поглотительной активностифагоцитов крови недоношенных новорожденных.Интенсивностьфлуоресценции, MFIСодержание клеток, %Нейтрофильные гранулоцитыП/гр 1аП/гр 1бП/гр 1аП/гр 1бП/гр 1аП/гр 1бИнтенсивностьфлуоресценции, MFIСодержание клеток, %МоноцитыП/гр 1аП/гр 1бРисунок 14.Содержание нейтрофильных гранулоцитов и моноцитов,вступивших в реакцию фагоцитоза,и интенсивность флуоресценции поглощенных ими бактерий впуповинной и периферической крови недоношенных детей79Содержание нейтрофильных гранулоцитов и моноцитов, вступивших вреакцию фагоцитоза, а также интенсивность флуоресценции поглощенных имибактерий не различались в 1а и 1б подгруппах недоношенных детей приисследовании как пуповинной, так и периферической крови (Р>0,05). Однакоотмечено, что у одних и тех же детей как в 1а, так и в 1б подгруппе на 3 суткижизнисодержаниефагоцитирующихмоноцитовиинтенсивностьфлуоресценции поглощенных ими бактерий были выше, чем при рождении.