Диссертация (Особенности иммунитета у недоношенных новорожденных детей с респираторными нарушениями инфекционного и неинфекционного генеза), страница 10

После инкубации и трехкратнойотмывки вносили идентифицирующий комплекс стрептавидина с фикоэритрином,играющим роль люминесцентного индикатора. Пробы анализировали на прибореBio-Plex 200 (Bio-Rad, США). Во время измерения каждая микросфераподвергается облучению лазерами с разной длиной волны: красный лазеросвещает флуоресцентные красители в каждой микросфере, зеленый лазервозбуждает молекулы фикоэритрина для генерации сигнала репортера. Такимобразом, сигнал, испускаемыйфлуорофорами, позволяет характеризоватьодновременно тип микросферы и наличие искомого аналита на соответствующемтипе частиц.

Концентрация аналита, связавшегося с каждой микросферой,пропорциональна средней интенсивности флуоресценции (MFI), определяемойсигналом репортера. Количественный анализ содержания цитокинов определялипокалибровочнойкривой,выполненнойвтомжеэксперименте,сиспользованием входивших в набор стандартов.Статистическая обработка данныхФормирование базы данных по результатам проведенных исследованийосуществлялиспомощьюпрограммыMicrosoftOfficeExcel2010.Статистическую обработку полученных данных проводили с применением пакета50прикладных программ MedCalc (Бельгия). Полученные количественные данныебыли обработаны методом вариационной статистики.Проверканормальностираспределенияданныхосуществляласьсприменением критерия Шапиро-Уилка.Для оценки различий применяли критерий Стьюдента для данных снормальным распределением (t-тест), для оценки различий в выборках, гдераспределениеданныхотличалосьнепараметрические критерии:отU-критерийнормального,применялиМанна-Уитни длянесвязанныхвыборок и критерий Вилкоксона – для связанных.

Результаты представлены каксреднее значение ± стандартное отклонение (M ± SD) в случае нормальногораспределения данных и как медиана (25-й – 75-й процентили), еслираспределениеданныхотличалосьотнормального.Различиясчиталидостоверными при уровне значимости Р˂0,05.Корреляционные связи оценивали, исходя из показателей коэффициентакорреляцииПирсонадлязначений,которыеподчиняютсянормальномураспределению и коэффициента корреляции Спирмена – для показателей, неподчиняющихся нормальному распределению. При значении коэффициентакорреляции менее 0,3 связь считали не значимой, если коэффициент был равен 0,3– 0,49, корреляционная связь считалась умеренной, от 0,5 до 0,79 – средней, выше0,8 – сильной.Длясравнениячастотвстречаемостикачественныхпризнаковванализируемых группах использовали критерий 2.ОценкамаркеровклиническойосуществляласьзначимостиспомощьюиспользованияROC-анализаиммунологических(ReceiverOperatingCharacteristics): вычисление площади под кривой, оценка чувствительности испецифичности иммунологических показателей при диагностике врожденнойпневмонии, оценка позитивной и негативной прогностической значимостииммунологических маркеров для прогноза реализации врожденной пневмонии унедоношенных новорожденных.51Глава III.

Результаты собственных исследований3.1. Общая характеристика новорожденных детейВ соответствии с целью работы было выполнено проспективное когортноеисследование (март 2013 – июнь 2016 г.). Для решения поставленных задачпроведено иммунологическое обследование 113 новорожденных детей. Согласногестационному возрасту, новорожденные были разделены на следующие группы:первую, куда вошли недоношенные дети, и вторую, включавшую здоровыхдоношенных новорожденных. Исходя из клинического диагноза, недоношенныедети были разделены на подгруппу детей, не имеющих признаков инфекционновоспалительных заболеваний (подгруппа 1a), и детей с врожденной пневмонией(подгруппа 1б).Исследуемые группы новорожденных не различались по гендерномупризнаку: соотношение мальчиков и девочек в 1a и 1б подгруппах было 19:14 и28:15 соответственно, во 2 группе – 18:19.

Рождение детей с врожденнойпневмонией (подгруппа 1б) чаще происходило путем операции кесарева сечения,чемв1aподгруппенедоношенныхноворожденных:97,7%и81,8%соответственно (P=0,038). Путем операции кесарева сечения были рождены 70,3%здоровых доношенных новорожденных.

Среди показаний к оперативномуродоразрешению матерей новорожденных из группы 2 были рубец на матке послепредыдущей операции кесарева сечения, тазовое предлежание, поперечноеположение плода, миопия, многоплодная беременность. В группе 1 показаниями кдосрочному оперативному родоразрешению являлись истмико-цервикальнаянедостаточность,хроническаяартериальнаягипертензия,преэклампсия,преждевременное излитие околоплодных вод, отслойка плаценты, разрывплодных оболочек, плацентарная недостаточность, задержка развития плода,резкоеухудшениепредставлена в табл. 1.состоянияплода.Характеристикановорожденных52Таблица 1.Характеристика обследованных новорожденныхMe (25-й – 75-й процентили)Группа 1ПоказательГестационныйвозраст, недМасса прирождении, гДлина тела прирождении, смОценка пошкале Апгарна 1-й минутеОценка пошкале Апгарна 5-й минутеПродолжительностьпребывания встационаре,дниПодгруппа 1a, Подгруппа 1б,Группа 2,n=37Рп/гр.1а –п/гр.1а –п/гр.1бгр.20,0008<0,00010,009<0,00010,003<0,0001n=33n=4334,0 (33,5035,00)2244,0(1940,002457,75)45,0 (42,7547,00)32,0 (30,0034,00)1715,0(1369,502341,75)42,0 (38,2545,00)39,0 (39,040,0)3360,0(3171,253569,75)51,0 (51,0052,00)8,0 (7,008,00)7,0 (6,007,00)8,0 (8,008,00)<0,00010,00068,0 (8,009,00)8,0 (7,008,00)9,0 (9,009,00)<0,05<0,000114,0 (8,7518,25)35,0 (19,0041,50)5,0 (4,005,00)<0,0001 <0,0001Примечание: п/гр.1а – недоношенные новорожденные без признаков инфекции,п/гр.1б – недоношенные дети с врожденной пневмонией, гр.2 – здоровыедоношенные детиНедоношенные новорожденные из 1а и 1б подгрупп имели более низкиепоказатели массы и длины тела при рождении, чем здоровые доношенные дети.Средняя оценка по шкале Апгар, отражающая состояние новорожденного ребенкаи его потребность в реанимационных мероприятиях, также была ниже вподгруппах недоношенных детей.Дети с врожденной пневмонией (подгруппа 1б) имели более низкие массоростовые показатели, более выраженную степень асфиксии на первой минуте и53наблюдались в условиях стационара существенно дольше, чем недоношенныедети без признаков инфекции (подгруппа 1а).

20 детей из данной подгруппыимели экстремально низкую (менее 1000 г) и очень низкую (1000 – 1499 г) массутела. Состояние новорожденных оценивалось как тяжелое и крайне тяжелое засчетреспираторныхнарушенийи теченияинфекционно-воспалительногопроцесса.Выявлена прямая корреляционная зависимость между гестационнымвозрастом недоношенных детей и их массо-ростовыми показателями. Обратнаякорреляционная зависимость существовала между гестационным возрастомнедоношенных детей и продолжительностью их пребывания в стационаре: r= –0,518 (Р=0,003) в 1а подгруппе и r= – 0,722 (P<0,0001) – в 1б подгруппе.Тяжесть клинического состояния новорожденных детей из 1 группы вомногом определялась наличием и степенью выраженности дыхательныхнарушений,возникновениекоторыхможетбытьобусловленокакморфофункциональной незрелостью дыхательной системы, так и течениеминфекционного процесса. В зависимости от наличия, степени выраженности идинамики дыхательных нарушений, недоношенным новорожденным проводилисьразличные типы респираторной терапии (табл.

2). Для детей гестационноговозраста 35 недель и старше в качестве стартового вида респираторнойподдержки использовалось дыхание через высокопоточные канюли (ВПК), приотсутствии эффективности новорожденные переводились на респираторнуюподдержку методом СРАР (дыхание с постоянным положительным давлением вконце выдоха). При дальнейшем усугублении дыхательных нарушений ивозрастанииналаживаласьпотребностиинвазивнаявдополнительнойискусственнаяподачевентиляциякислородалегких(ИВЛ)детямиливысокочастотная осцилляторная вентиляция легких (ВЧОВЛ).Для детей меньшего гестационного возраста в качестве стартовых режимовреспираторной поддержки использовались СРАР или неинвазивная искусственнаявентиляция легких методом Biphasic. При усугублении дыхательных нарушений54новорожденным проводились инвазивная ИВЛ или ВЧОВЛ, с заместительнойцелью вводились препараты сурфактанта (куросурф).Таблица 2.Динамика респираторной поддержки у недоношенных новорожденныхПодгруппа 1а, n=33ТипПодгруппа 1б, n=43респираторной1 сутки3 сутки1 сутки3 суткитерапиижизнижизнижизнижизни15 (45,4%)31 (93,9%)2 (4,65%)7 (16,3%)ВПК3 (9,1%)01 (2,3%)2 (4,65%)СРАР10 (30,3%)2 (6,1%)9 (20,9%)16 (37,2%)Biphasic5 (15,2%)026 (60,5%)8 (18,6%)ИВЛ003 (7,0%)4 (9,3%)ВЧОВЛ002 (4,65%)6 (13,95%)СамостоятельноедыханиеПримечание: п/гр.1а – недоношенные новорожденные без признаков инфекции,п/гр.1б – недоношенные новорожденные с врожденной пневмониейДети с врожденной пневмонией (подгруппа 1б) чаще нуждались вдыхательной поддержке по сравнению с недоношенными новорожденными безпризнаков инфекции (95,3% против 54,5%, Р<0,0001).