Диссертация (Эффективность направленной контактной диатермии в восстановлении анатомо-функциональной полноценности тазового дна женщин репродуктивного возраста), страница 4

Синтез комплементарной ДНК (кДНК) с матрицы полученной РНК осуществляли с помощью набораSuperScript™ VILO™ Master Mix (Invitrogen, США). Выделенные кДНК подверглись ПЦР-РВ с использованием готовой смеси реагентов ABsolute Blue QPCR Mix(Thermo Scientific, США) с интеркалирующим флуоресцентным красителем SYBRGreen I. ПЦР-РВ проводили с помощью StepOne System (Applied Biosystems,CША) и штатного программного обеспечения.Экспрессию генов анализировали с применением метода определения порогового цикла (Ct) и вычисления относительной экспрессии генов согласно протоколу.

Нормирование и внутренний контроль выполнены относительно референсного гена «домашнего хозяйства» GAPDH, уровень экспрессии которого по умолчанию считается постоянным. Статистический контроль проводили относительнонормативных значений. Подбор праймеров был осуществлен на основании общедоступных материалов о последовательностях ДНК и матричной РНК (мРНК) генов в базе данных National Center for Biotechnology Information с использованиемпрограммы Primer-BLAST. Молекулярно-биологическое исследование было выполнено на базе лабораторного отделения федерального государственного бюджетного учреждения «Девятый лечебно-диагностический центр Министерстваобороны Российской Федерации», (зав.

лабораторией — Стамм М.В., к.м.н., доцент Демяшкин Г.А).18В процессе исследования проведена сравнительная оценка эффективноститерапии у пациенток изучаемой когорты, которым было назначено на основанииметода слепой выборки лечение в режиме монотерапии (изолированная ТМТД пометодике изолированной тренировки мышц тазового дна в модификацииЕ.С.Силантьевой (Приложение 5)) и комбинированной терапии (ТМТД по вышеуказанной методике в сочетании с направленной контактной диатермией аппаратом BTL-6000) [17, 46, 114].Аппарат BTL-6000 TR-Therapy ELITE имеет применяемые поочередно резистивный электрод диаметром 30 мм, емкостные электроды диаметром 20 и 30мм, а также нейтральный электрод размером 160 × 240 мм.

При проведении процедуры оптимальное положение пациентки — лежа на спине на гинекологическом кресле (литотомическая позиция): ноги согнуты в коленных и тазобедренных суставах и разведены. Согласно инструкции, нейтральный электрод смазывали специальным токопроводящим кремом и располагали в пояснично-крестцовойобласти. Локализация воздействия — зона промежности (включая область проекции musculus levator ani с обеих сторон), область преддверия влагалища и слизистая влагалища.

Глубина воздействия физического фактора — 2,0–3,5 см. Важно,что применяемая методика лабильна, т. е. подразумевала плавные непрерывныемаятникообразные перемещения электродов в зонах воздействия. Последовательность воздействия: резистивный электрод — 3 мин; емкостный электрод диаметром 30 мм — 12 мин; емкостный электрод диаметром 20 мм — 3 мин; резистивный электрод — 5 мин. Мощность определяли во время процедуры — до ощущения, умеренного тепла под активным электродом.

Общая продолжительностьпроцедуры — 23 мин. Курс состоял из 10 процедур, проводимых через два дня натретий. За все время проведения физиотерапевтического лечения побочных эффектов отмечено не было.По завершении курса лечения, всей когорте с НМТД предлагалось полноеконтрольное анкетирование и обследование, включающее в себя гинекологический осмотр, а также перинеологическое, сонографическое, ЭМГ-исследование.19Положения, выносимые на защиту:1. В основе патогенеза недостаточности мышц тазового дна у рожавших женщинлежит коллагеновая дисфункция и нарушение архитектоники тканей на фонеухудшения функции мышечно-фасциальных структур тазового дна.2.

Применение направленной контактной диатермии у женщин репродуктивноговозраста с недостаточностью мышц тазового дна способствует улучшению структурно-функциональных характеристик стенки влагалища. Об этом свидетельствует снижение экспрессии PDGF-β в 1,8 раза, TNXB – в 1,5 раза, металлопротеиназ– в 1,5 раза, и увеличение активности гена-кодировщика их ингибитора TIMP-1 –в 1,8 раза, а также увеличение количества коллагеновых волокон I типа в 2,0 раза(p<0,05), снижение количества коллагена III типа в 1,9 раза (p<0,05).3. Комплексная терапия недостаточности мышц тазового дна в составе тренингамышц тазового дна и направленной контактной диатермии в сравнении с монотренингом тазового дна (p<0,05) снижает частоту симптомов в 5,9 раза (чувствотяжести в области промежности13,4% против 79,4% пациенток), улучшаетфункционально-анатомические параметры состояния промежности в 4,7 раза(сомкнутость половой щели у 16,9 % против 81,0 % женщин), увеличивает сонографическую площадь сечения m.bulbocavernosus в 1,2 раза (1,81±0,04 см2 против1,69±0,04 см2), повышает силу сокращения мышц промежности в 1,2 раза(10,61±0,6 мВ против 8,92±0,5 мВ) и качество сексуальной жизни – в 1,6 раза(средний балл по FSFI 36,1 против 22,5).Степень достоверности и апробация результатовАвтор непосредственно участвовала в выборе направления исследования,разработке цели и задач; лично осуществляла сбор анамнеза, обследование пациенток, проводила забор биологических материалов для исследования; лично осуществляла процедуры направленной контактной диатермии, электромиографии;20самостоятельно выполняла анализ информации, статистические расчеты полученных результатов.

Автор принимала непосредственное участие в физиотерапевтическом лечении пациенток, в разработке тактики лечения для разных групп пациенток. Совместно с сотрудниками отделения патоморфологии проводила анализгистологических препаратов.Научные положения диссертации соответствуют формуле специальности14.01.01 — «акушерство и гинекология».Статистическая обработка производилась с помощью программного пакетаSPSS 7.5 for Windows (IBM Analytics, США) и Microsoft Excel v.

11.8 (MicrosoftCorporation). Рассчитывали средние арифметические (М) и среднеквадратическиеотклонения (σ). За критическое значение уровня значимости принимали p < 0,05.Для непараметрических характеристик использовались показатели частоты признака (%). Для проверки статистических различий долей (%) выраженности анализируемого признака в сравниваемых группах применялся многофункциональный критерий углового преобразования Фишера (φ*) или критерий согласия Пирсона χ2 (Хи-квадрат). Проведён дисперсионный анализ ANOVA количественныхданных, полученных в результате ПЦР-РВ, с оценкой достоверности их различийс помощью апостериорного теста по Дункану. При анализе межгрупповых различий в случае двух групп применяли критерий Стьюдента (в случае нормальногораспределения количественных характеристик), критерий Манна-Уитни (в случаененормального распределения количественных характеристик).

Для изучения связи между признаками использовался коэффициент ранговой корреляции Спирмена.В таблицах приведены следующие сокращения: М — среднее значение, σ —среднеквадратичное отклонение, n — объем анализируемой группы, p — вычисленный уровень статистической значимости. За критическое значение уровня значимости принимали p < 0,05.Оценку факторов риска определяли методом вычисления «Отношение шансов» позволяющий сравнить группы исследуемых по частоте их выявления. Важ21но, что результатом применения отношения шансов является не только определение статистической значимости связи между фактором и исходом, но и ее количественная оценка. Для оценки значимости отношения шансов рассчитывали границы 95% доверительного интервала (использовали аббревиатуру 95% ДИ или 95%CI от англ. "confidence interval").

Для нахождения значения верхней границы 95%CI использовали формулу:Для определения значения нижней границы 95% ДИ использовали следующуюформулу:При анализе отношении шансов если показатель превышал- 1, то это свидетельствовало о том, что шансы обнаружить фактор риска больше в группе с наличием исхода, так как фактор имел прямую связь с вероятностью наступления исхода. При отношении шансов, имеющих значение меньше 1, следовал вывод, чтошансы обнаружить фактор риска больше во второй группе, поскольку факторимел обратную связь с вероятностью наступления исхода.При отношении шансов, равном единице, шансы обнаружить фактор рискав сравниваемых группах был одинаков, соответственно, фактор не оказывал никакого воздействия на вероятность исхода.Работа была выполнена в рамках основной научно — исследовательскойдеятельности кафедры акушерства и гинекологии с курсом перинатологии Медицинского института ФГАОУ ВО РУДН — «Репродуктивное здоровье населенияМосковского мегаполиса и пути его улучшения в современных экологических исоциально-экономических условиях» (номер государственной регистрации 01.9.70007346, шифр темы 317712).Апробация диссертации проведена на кафедре акушерства и гинекологии скурсом перинатологии Медицинского института РУДН (Протокол № 19 от 26 июня 2019 года).Основные положения работы доложены и обсуждены на:22X Общероссийском семинаре «Репродуктивный потенциал России: версии и контраверсии» (Сочи, 2017); II Национальном конгрессе «Онкология репродуктивныхорганов: от профилактики и раннего выявления к эффективному лечению» (Москва, 2017); XII Международном конгрессе по репродуктивной медицине (Москва,2018).Результаты, полученные в ходе диссертационного исследования, внедрены впрактическую работу гинекологического отделения государственного бюджетногоучреждения здравоохранения города Москвы «Городская клиническая больницаимени Н.Э.