Диссертация (Получение и стандартизация эритроцитарных носителей, инкапсулированных терпено-индольными алкалоидными противоопухолевыми препаратами)

МИНОБРНАУКИ РОССИИФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕУЧРЕЖДЕНИЕВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ«ВОРОНЕЖСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ»(ФГБОУ ВО ВГУ)На правах рукописиХАЛАХАКУН МУДИЯНСЕЛАГЕ АМИЛА ДЖИВАНТА ХАЛАХАКУНПОЛУЧЕНИЕ И СТАНДАРТИЗАЦИЯ ЭРИТРОЦИТАРНЫХНОСИТЕЛЕЙ, ИНКАПСУЛИРОВАННЫХ ТЕРПЕНО-ИНДОЛЬНЫМИАЛКАЛОИДНЫМИ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫМИ ПРЕПАРАТАМИ14.04.02.

- Фармацевтическая химия, фармакогнозияДИССЕРТАЦИЯна соискание ученой степени кандидата фармацевтических наукНаучный руководитель-доктор фармацевтических наукТринеева Ольга ВалерьевнаВОРОНЕЖ 2018ОГЛАВЛЕНИЕСПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАШЕНИЙ………………….……..7ВВЕДЕНИЕ……………………………………………………………... ……9ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ…………………………………... ……161.1.Классификация противоопухолевыхпрепаратов растительного происхождения……………….............................1.2.16Алкалоиды Катарантуса розового(Catharanthus roseus (L.) G. Don) …………………………………………….171.2.1. Фитохимический состав C.

roseus…………………………................171.2.2. Бисиндольные алкалоиды VCR и VLB……………….……………...191.2.2.1. Химические и физико-химические свойства…………………….…191.2.3.Методы качественного и количественного определенияТИА препаратов C. roseus…………………………………………………….211.2.3.1. Методы выделения и идентификации ТИА………………………...211.2.3.2.Методы анализа ТИА (VCR и VLB) ………...................................221.2.3.2.1. Методы установление подлинности VCR …………………..……231.2.3.2.2. Методы количественного определения VCR …………………….241.2.4.

Методы анализа C. roseus алкалоидов VCR и VLB in vivoи in vitro………………………………………………………………………….. 251.2.4.1. Физико-химические методы определения ТИА………………….… 251.2.4.1.1. Метод тонкослойная хроматография (ТСХ)………………...……..251.2.4.1.2. Газо-жидкостная хроматография…………………………………… 271.2.4.1.3. Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии(ВЭЖХ)…………………………………………………………………………271.2.4.1.4.

Анализ C. roseus алкалоидов методом ВЭЖХ сэлектрохимическим детектированием………………………………………..311.2.4.2. Методы радиоиммунологического анализаалкалоидов C. roseus…………………………………………………………321.2.4.2.1. Методы обнаружения ТИА в живых клетках……………………3221.3.Фармакологические свойства VCR и VLB……………………….…341.3.1. Современное положение VCR и VLB в химиотерапии………….…361.3.2. Фармакокинетика VCR и VLB …………………………………..……371.3.3.

Механизм действия VCR и VLB …………………………………….… 381.3.4. Токсические действия и лекарственные взаимодействияТИА (VCR, VLB и др.) ……………………………………………………….… 421.3.5.Новые подходы для улучшения качества ТИА препаратовVCR и VLB………………………………………………….................................. 451.4.Системы доставки лекарственных веществ…………………………... 461.4.1Липосомальные носители для доставкипротивоопухолевых препаратов (ТИА)………………………………………... 491.4.2.

Наноносители для доставки противоопухолевыхпрепаратов…………………………………………………….............................. 511.5.Клеточные носители для доставки лекарственных средств………..… 541.5.1. Аутологичные клетки крови, как носители лекарственныхпрепаратов……………………………………………………………………..… 551.5.1.1. Физиология и морфология эритроцитов…...…………………………. 561.5.2. Эритроциты как система доставки ЛС………………………………..591.5.3. Основные методы инкапсулирования лекарственныхвеществ в эритроцитах…………………………………………………………. 631.5.3.1.

Метод гипотонического лизиса…………………………………..…… 641.5.4. Действие инкапсулированных эритроцитов на опухоли…………..… 711.5.5. Возможности применения клеточных носителейдля доставки ТИА…………………………………………………………..…… 72ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ 1……………………………………................................ 73ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ……………………………………742.1.Объекты исследования………………………………………………… 742.2.Материалы и реактивы……………………………...………………752.3.Оборудование…………………………………………………………7832.4.Методы исследования………………………………………................... 792.4.1. Методы выделение плазмы из крови…………………………………792.4.2. Выделение аллогенных эритроцитов…………………………………..

802.4.3. Метод изучения взаимодействия ТИА препаратов VCR и VLB с компонентами плазмы и форменными элементами крови…………………............... 822.4.4. Включение ТИА в клеточные носители…………………...................... 832.4.5. Определение эффективности включения ТИА(VCR, VLB) в эритроциты …………………………………………………….842.4.6. Определение размера и физико-химических свойствэритроцитов……………………………………………………………………… 852.4.7. Методика определение осмотической резистентностиТИА загруженных эритроцитов………………………………………………872.4.8. Определение степени гемолиза ТИА инкапсулированныхэритроцитов…………………………………………………………………….2.5.88Статистическая обработка результатов ……………………………… 88ГЛАВА 3.

РАЗРАБОТКА МЕТОДИК СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКОГООПРЕДЕЛЕНИЯ ТЕРПЕНО-ИНДОЛЬНЫХ АЛКАЛОИДОВ В СУБСТАНЦИЯХ И ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЕ……………………………………913.1. Изучение спектральных характеристик VCR и VLB………………….913.2. УФ-спектральные характеристики VCR и VLB в разных растворителях………………………………………………………………………………943.3. Разработка методики количественного определения ТИАпрепаратов VCR и VLB………………………………………………………..… 963.3.1. Определение аналитических пределов обнаружения……………….… 983.3.2. Разработка методики количественного определения………………….1043.3.3.

Определение прецизионности аналитической методики……………… 1083.3.4. Определение робастности аналитической методики……………….… 1113.4. Методики количественного определения VCR и VLB в ГЛФ…………114ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ 3………………………………………………………1174ГЛАВА 4. РАЗРАБОТКА МЕТОДИК КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТЕРПЕНО-ИНДОЛЬНЫХ АЛКАЛОИДОВВ БИОЛОГИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛЕ……………………………………… 1184.1. Разработка методики количественного определенияТИА в биожидкостях…………………………………………………………… 1184.1.1. Определение оптимальных условий удаления белка……………….... 1184.1.2. Выбор оптимальных условий гель-хроматографического выделенияТИА……………………………………………………………………………1204.1.3.

Распределение ТИА при гель-хроматографии………………………… 122ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ 4……………………………………………………….…. 125ГЛАВА 5. ПОЛУЧЕНИЕ КЛЕТОЧНЫХ НОСИТЕЛЕЙ ДЛЯ НАПРАВЛЕННОГО ТРАНСПОРТА В ОРГАНИЗМЕ ТИА ПРЕПАРАТОВВИНКРИСТИНА И ВИНБЛАСТИНА …........................................................ 1265.1.Изучение взаимодействия ТИА VCR и VLB с компонентами плазмы иформенными элементами крови………………………………………………… 1265.1.1. Изучение взаимодействия ТИА VCR и VLB с компонентами плазмы крови………………………………………………………………………………1305.1.2. Изучение взаимодействия ТИА VCR и VLB с форменными элементамикрови……………………………………………………………………………… 1325.2.Метод получения эритроцитарных клеточных форм ТИА препаратовVCR и VLB ……………………………………………………………...……… 1355.2.1. Включение ТИА препаратов в клеточные носители…………………… 1355.3.Определения эффективности инкапсулирования ТИА препаратов VCR иVLB в эритроцитах……………………………………………………………… 1375.3.1.

Методика количественного определения клеточных форм ТИА препаратов………………………………………………………………………………… 1375.3.2. Изучения возможности увеличения эффективности «загрузки»эритроцитов ТИА препаратами………………………………………………14155.3.2.1.Изучение эффективности загрузки ТИА препаратов в клеточные носи-тели в среде, модифицированной ПЭГ………………………………………1415.3.2.2. Изучение эффективности загрузки ТИА препаратов в клеточные носители в среде, модифицированной ДМСО…..…………………………………1445.3.2.3.

Изучение эффективности загрузки ТИА препаратов в клеточные носители в среде, модифицированной АТФ………………………………………145ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ 5………………………………………………………149ГЛАВА 6. ИЗУЧЕНИЕ СВОЙСТВ ТИА ИНКАПСУЛИРОВАННЫХ ЭРИТРОЦИТАРНЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ IN VITRO………………… 1516.1. Изучение свойств ТИА инкапсулированных эритроцитарных носителей invitro………………………………………………………………………………1516.1.1. Изучение морфологии инкапсулированных ЭН……...……………… 1516.1.2. Определения размера и физико-химических свойств эритроцитов...1556.1.3. Изучение устойчивости клеточных носителей к десорбции и высвобождению ТИА препаратов……………………..………………………………….1586.2. Определение стабильности клеточных носителей и клеточных форм ТИАпрепаратов………………………………………………………………….…1656.2.1.

Определения осмотической резистентности ТИА загруженных эритроцитов……………………………………………………………………………1666.2.2. Определение турбулентной хрупкости ТИА загруженных эритроцитов……………………………………………………………………………….1686.3. Изучение условий высвобождения гемоглобина из ТИА загруженных эритроцитов………………………………………………………………………….1716.4. Определение стабильности клеточных носителей и клеточных форм VCR иVLB при хранении………...……………………………………………………174ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ 6………………………………………………......………….178ОБЩИЕ ВЫВОДЫ……………………………………………………...………….182СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ………………………………………………...………185ПРИЛОЖЕНИЯ……………………………………………………………………..2196СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ:АТФ - aденозинтрифосфатВЭЖХ - высокоэффективный жидкостный хроматографияГЛФ – готовая лекарственная формаГФ / ГХ- гель фильтрация / гель хроматографияДМСО- диметилсульфооксид (dimethylsulfoxide; DMSO)ДМФА - диметилформамид (dimethylformamide)ЖХ/МС-ВР - жидкостная хроматография–масс-спектрометрияс высоким раз-решениемКН– клеточные носителиЛС- лекарственные средстваМКА - моноклональные антителаМСД - масс-спектральный детекторНД– нормативная документацияОРЭ- осмотической резистентности эритроцитовППМЭ - показатель проницаемости мембран эритроцитовПЭГ- полиэтилингликоль (polyethylene glycol; PEG)РЭС- ретикулоэндотелиальная системаСДЛС - системы доставки лекарственных средствТИА - терпено индольные алкалоидыТСХ- тонкослойная хроматографияУЭЖХ - ультрапроизводительная жидкостная хроматографияФРСЭ - фактор роста сосудистого эндотелияХТС- химиотерапевтические средстваЦД- целенаправленное действиеЭН- эритроцитарные носителиЭМВ - электромагнитные волныЯМР - ядерного магнитного резонансB.Ph.