Диссертация (Клинико-фармакологические аспекты оптимизации антимикробной терапии острых кишечных инфекций с синдромом колита у детей), страница 10

Оценка клиническойэффективности препарата по динамике клинических синдромов ОКИ проводиласьна 3 сутки терапии и на 5 сутки АБТ. Оценка микробиологической эффективностиисследуемого препарата проводилась через 3 суток после отмены препарата.53Лабораторные методы исследованияВсем пациентам, включенным в исследование проводились базовыелабораторныеобследованиябиохимическиеобщийисследованиякрови,анализкрови,общийкопроцитограмма.анализБолеемочи,пристальноевнимание уделялось показателям копроцитограммы и бактериологическомуисследованию кала. Материалом для проводимых исследований служилииспражнения больных ОКИ с инвазивным типом диареи, забор материалапроводился в 1-й день госпитализации до назначения этиотропной терапии иконтрольный анализ через 3 суток после завершения курса этиотропной терапии.Бактериологическое исследование проводилось на базе бактериологическойлаборатории научно-исследовательского института антимикробной химиотерапии(НИИ АХ) ФГБОУ ВО «Смоленский государственный медицинский университет»Минздрава РФ (зав.

лабораторией Кречикова О.И.).Для решения поставленных задач проводили посев нативного материала –фекалий на среды: селективный агар на шигеллы и сальмонеллы Hektoen entericagar (HEC) и агар МакКонки (BioRAD, Франция), а также на среду обогащения длясальмонелл – Магниевую среду. Посевы помещались в термостат, где онинаходилисьвтечение18-20часовпритемпературе350С.Колонии,подозрительные на принадлежность к патогенным энтеробактериям исследовалисьна принадлежность к роду Shigella, Salmonella, Campylobacter, патогенных E.Coli иУПФ. Одновременно со среды накопления, при отсутствии подозрительныхколоний на патогенные энтеробактерии, с чашек прямого посева делали высев населективную среду Hektoen enteric agar.Родовая и видовая идентификация микроорганизмов проводилась методомвремя пролѐтной масс-спектрометрии на масс-спектрометре Microflex Maldi54Biotiper 2.0 (Bruker Daltonics, Германия).

Серовары шигелл и сальмонеллопределяли в реакции агглютинации со специфическими шигеллѐзными исальмонеллѐзнымисыворотками(производстваСанкт-ПетербургскогоНИИвакцин и сывороток).Для оценки чувствительности выделенных штаммов Salmonella spp. к АМПопределялись МПК АМП, входящих в современные рекомендации (азитромицин,цефиксим, цефотаксим, цефтриаксон, налидиксовая кислота, ципрофлоксацин, котриморксазол) в соответствии с отечественными клиническими рекомендациями«Определение чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам»,2016 г., разработанных на основе зарубежных рекомендаций по определениючувствительности к АМП, 2015 г.

(EUCAST – Европейского комитета поопределению чувствительности микроорганизмов к АМП).Референтный метод последовательных микроразведений в повседневнойпрактике микробиологических лабораторий не применяется из-за значительнойтрудоемкости. Однако именно относительно этого метода «калибруются» какнаиболее распространенный в рутинной практике диско-диффузионный метод, таки различные коммерческие методы.Результаты оценки антибиотикочувствительности бактерий, полученные спомощью референтного метода, используют для обоснования микробиологическихи клинических критериев чувствительности.Параллельносбактериологическимиметодамипоидентификациивозбудителей, все образцы фекалий проходили и вирусологическое исследованиепо определению антигена ротавируса методом ИФА.

При обнаружении антигенаротавируса данные пациенты исключались из исследования.Копрологическое исследование кала включало оценку морфологических,химических и микроскопических характеристик кала. Фекалии от пациентовсобирались в чистую, сухую посуду. На первом этапе производилась визуальнаямакроскопическая оценка образца:55-консистенция(оформлен,неоформлен),цвет,запах,наличиепатологических примесей:- слизь – (для выявления слизи образец фекалий размешивали с водой ирассматривали в темном и светлом фоне),- кровь – (чаще определялась неизмененная кровь). При подозрении наскрытую кровь проводилась реакция с бензидином по Грегерсену (образец фекалийна чистом предметном стекле обрабатывали 2-4 каплями реактива, при наличиискрытой крови происходит сине-зеленое окрашивание).Микроскопическое исследование кала проводилось из полученной эмульсиикаловых масс, на предметном стекле.

При чрезвычайно жидких испражненияхпрепарат готовился путем центрифугирования и микроскопирования осадка.Для обработки микроскопических препаратов применялись следующиереактивы: раствор Люголя, раствор Судана – 3, ледяная уксусная кислота длядифференцировки клеточных элементов, физиологический раствор, красительРомановского – Гимза или азурэозин.

Микроскопия проводилась с использованиеммикроскопа (Микромед – 5 ломо), на увеличении 40х (стандартном дляисследования нативных препаратов).Микроскопическаяоценкавключалаизучениеклеточногосоставапатологических примесей фекалий:- лейкоциты - (преимущественно полинуклеарные нейтрофилы), чтоуказывало на воспалительные процессы в толстом кишечнике от катаральныхдо язвенно-некротических;- эритроциты – (определялись свежие, неизмененные или выщелоченные ввиде теней) присутствие эритроцитов в кале указывало на воспалительныеизменения в кишечнике язвенного характера.56Статистические методы исследованияСтатистическаяобработкаданныхвыполняласьвсистемеSAS(программный пакет SAS института, США, версия 8,2). Описанная статистикабыла выполнена для всех анализируемых показателей, в зависимости от типапеременной: при анализе качественных показателей определялась доля (в %), прианализе количественных переменных – среднее арифметическое, минимальное имаксимальноезначение,медиана.Сравнительныйанализкачественныхпеременных проводился с помощью критерия χ2, критерий Фридмана (ранговыйдисперсионный анализ).

Апостериорные сравнения - критерий Ньюмена-Кейлса.Различия считались достоверными при значении p <0,05.Этическое обоснованиеПри выполнении диссертационной работы использовались основные методыдиагностики и лечения, применяемые в лечебно-профилактических учреждениях.При проведении клинико-микробиологического исследования по изучениюэффективности и безопасности азитромицина и цефиксима в терапии ОКИ всоответствии с правилами GCP у родителей больных детей брали письменноеинформированное согласие на участие ребенка в клиническом исследовании,оформленные в соответствии с этическими требованиями.

Одобрение ЛЭКвыписка из протокола №9 от 11.05.2011 г.57ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ3.1. Эпидемиологическая ситуация по изучению распространенности ОКИ ссиндромом колита у детей в Смоленской области и г. СмоленскеИзучениераспространенностиОКИудетейссиндромомколитаосуществлялось путем анализа статистических данных Федеральной службы понадзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека поСмоленской области.

Проанализированы данные по заболеваемости ОКИ за периодс 2009 по 2016 гг. по Смоленску и Смоленской области и заболеваемость поинфекционному отделению №5 ОГБУЗ КБ №1 г. Смоленска за период 20072012гг.используя медицинские карты стационарных больных (297) и ежегодныепоказатели работы инфекционного отделения.Исходя из полученной информации по заболеваемости ОКИ среди населенияСмоленской области (рисунок 1), наиболее высокий подъѐм заболеваемостиотмечался в 2013 г.

– 174,6/100 тыс. наиболее низкий в 2012 г. до 110,5/100 тыс.населения. Для сравнения заболеваемость ОКИ составила в 2009 г.  119,6/100 тыс.населения, в 2010 г.  135,7/100 тыс. населения, в 2011 г. – 143,53/100 тыс. в 2014 г.– 129,6/100 тыс., в 2015 г. – 137,7/100 тыс. и 11 месяцев 2016 г. составила129,35/100 тыс. населения.Заболеваемость ОКИ у детей в возрасте до 14 лет в этот же период временизначительно превышала показатели заболеваемости взрослого населения (рисунок2). Наибольший подъем заболеваемости ОКИ у детей до 14 лет, так же как иобщей, по Смоленской области отмечался в 2013 г.

– 921,2/100 тыс. детскогонаселения. Заболеваемость детского населения до 14 лет в 2009 г. составила589,8/100 тыс. детского населения, в 2010 г. – 678,5/100 тыс. детского населения, в582011 г. – 543,5/100 тыс. детского населения, в 2012 – 531,5/100 тыс., 2014 –685,3/100 тыс., 2015 – 730,1/100 тыс. и за 11 месяцев 2016 года достигла 734,12 /100тыс. детского населения.700608,72600543,6565,6525,2551,9544,3549,9500ОКИ Смоленская обл400ОКИ РФ300174,6200119,6135,7143,53129,6110,5137,7129,35100020092010201120122013201420152016Рисунок 1. Заболеваемость острыми кишечными инфекциями (на 100 тыс.населения) с 2009 по 2016 гг. по данным статистики Федеральной службы понадзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека поСмоленской области и в России.Заболеваемость сальмонеллезами (рисунок 3), по Смоленской области,составила в 2009 г.

 36,2/100 тыс. населения, 2010 г. – 57,28/100 тыс. населения,2011 г.  29,30/100 тыс. населения, 2012 г.  33,27/100 тыс. населения, 2013 г. –35,3/100 тыс., 2014 г. – 23,9/100 тыс., 2015 г. – 24/100 тыс. и за 11 месяцев 2016года 22,08/100 тыс. населения. Среди детского населения (до 14 лет)заболеваемость сальмонеллезами составила: в 2009 г.

 89,74/100 тыс. детскогонаселения, 2010 г.  126/100 тыс. детского населения, 2011 г.  76,39/100 тыс.детского населения, в 2012 г.  100,27/100 тыс., в 2013 г. – 113,8/100 тыс., 2014 г. –66,9/100 тыс., 2015 г. – 64,6/100 тыс. и 11 месяцев 2016 года – 61,7/100 тыс.детского населения.59921,2759,2685,3678,5730,1734,12589,5543,520092010201120122013201420152016Рисунок 2. Заболеваемость острыми кишечными инфекциями у детей до 14 лет (на100 тыс.