Диссертация (Фенотипическое проявление повреждений генетического материала, учитываемых в альфа-тесте у дрожжей Saccharomyces cerevisiae), страница 2

PDF-файл Диссертация (Фенотипическое проявление повреждений генетического материала, учитываемых в альфа-тесте у дрожжей Saccharomyces cerevisiae), страница 2 Биология (46433): Диссертация - Аспирантура и докторантураДиссертация (Фенотипическое проявление повреждений генетического материала, учитываемых в альфа-тесте у дрожжей Saccharomyces cerevisiae) - PDF, стран2019-06-29СтудИзба

Описание файла

Файл "Диссертация" внутри архива находится в папке "Фенотипическое проявление повреждений генетического материала, учитываемых в альфа-тесте у дрожжей Saccharomyces cerevisiae". PDF-файл из архива "Фенотипическое проявление повреждений генетического материала, учитываемых в альфа-тесте у дрожжей Saccharomyces cerevisiae", который расположен в категории "". Всё это находится в предмете "биология" из Аспирантура и докторантура, которые можно найти в файловом архиве СПбГУ. Не смотря на прямую связь этого архива с СПбГУ, его также можно найти и в других разделах. , а ещё этот архив представляет собой кандидатскую диссертацию, поэтому ещё представлен в разделе всех диссертаций на соискание учёной степени кандидата биологических наук.

Просмотр PDF-файла онлайн

Текст 2 страницы из PDF

Живые организмы постоянно испытывают разнообразныевоздействия генетически активных факторов, которые нарушают стабильность генома [1].Изменение темпов мутирования под действием экзогенных и эндогенных факторов можетсущественно отразиться на численности и генетической структуре популяции, а такжездоровье человека и приспособленности растений и животных к условиям обитания.Дестабилизация генетического материала является причиной возникновения многихнаследственных и онкологических заболеваний человека, а также приводит к снижениюжизнеспособности организмов и ускоряет процесс старения клеток [2-5]. Современныепредставления о причинах возникновения и механизмах становления наследуемыхизмененийгенетическогоматериалаформировалисьнапротяжениинесколькихдесятилетий XX века. Их во многом предвосхитили идеи, высказанные в теорииконвариантнойредупликацииН.В.Тимофеева-Ресовского,описывающейсамовоспроизведение генетического материала на основе матричного синтеза свозможностью передачи последующим поколениям отклонений от исходного состояния(наследуемых изменений), а также в физиологической теории мутационного процессаМ.Е.Лобашёва, в которой впервые было сделано предположение о существованиипредмутационных повреждений генетического материала.

Эти две теории во многомпредопределили направление развития дальнейших исследований. Многие теоретическиеположения, высказанные Н. В. Тимофеевым-Ресовским и М. Е. Лобашевым, позжеполучили экспериментальное подтверждение в работах, посвященных изучениюмолекулярных механизмов репликации, репарации и рекомбинации генетическогоматериала. В настоящее время общепринятым является представление о том, что мутациивозникают в ходе многоступенчатого процесса, который занимает длительное время, а воснове мутагенеза лежит неоднозначность матричных процессов.Согласно современным представлениям в основе абсолютного большинстванаследуемых изменений генетического материала лежат первичные повреждения ДНК,такие как одно- и двунитевые разрывы ДНК, модификации оснований, пиримидиновыедимеры, 6-4 фотопродукты, аддукты, разрывы сахаро-фосфатного остова молекулы ДНК[4, 6]. Процесс устранения первичных повреждений ДНК включает несколько этапов иможет занимать длительное время.

В результате репарации поврежденной ДНКпервичные повреждения либо бесследно устраняются, либо превращаются в генныемутации и хромосомные перестройки, или индуцируют реципрокную рекомбинацию, чтоприводит к изменению фенотипических признаков организма [4]. Влияние наследуемых7изменений генетического материала на фенотип организмов изучено достаточно хорошо,но данные о характере и механизмах фенотипического проявления первичныхповреждений ДНК ещё до момента их превращения в мутации или устранения системамирепарации практически отсутствуют. Для решения этой актуальной задачи мы предлагаемиспользовать подход, разработанный на кафедре генетики и биотехнологии СанктПетербургского государственного университета, который получил название альфа-тест.Альфа-тест позволяет выявлять широкий спектр изменений генетического материала:первичные повреждения ДНК, генные мутации, рекомбинационные события и потерихромосом.Использованиеэтогометодапозволитвыявитьприродупервичныхповреждений, способных проявляться фенотипически, а также проследить их судьбупосле репарации.Степень разработанности темы.

Изучение генетических событий, лежащих воснове развития наследственных и онкологических заболеваний, является актуальнойпроблемой. Хорошо изучены последствия накопления генных и геномных мутаций вканцерогенезе, выявлены мутантные аллели некоторых генов, которые тесно связаны сриском развития наследственных и онкологических заболеваний [4, 7-11]. Тем не менее,первые этапы становления генных и геномных мутаций, а именно: механизмывозникновения и взаимопревращения первичных повреждений ДНК, а также временныепараметры и эффективность их устранения системами репарации – требуют дальнейшегоболее глубокого изучения.

В настоящее время разработано много методов длярегистрации генных и геномных мутаций различных типов [12], но из-за вр менногохарактера первичных повреждений эти методы не позволяют прослеживать весь процесспревращения первичных повреждений ДНК в наследуемые изменения генетическогоматериала, а также сопоставлять фенотипическое проявление первичных повреждений инаследуемых изменений генетического материала. Так, например, метод ДНК-комет,являющийся одним из наиболее широко применяемых методов для исследованияповреждений ДНК, позволяет судить только о количестве разрывов ДНК и некоторыхдругих повреждений в клетке [13], но не позволяет сделать какие-либо выводы о влиянииразрывов ДНК в определенных генах на экспрессию этого гена или о судьбе первичныхповреждений после репарации ДНК с этими повреждениями.

Альфа-тест – единственнаяизизвестныхсистем,позволяющаярегистрироватьфенотипическоепроявлениепервичных повреждений ДНК и отличать его от проявления наследуемых измененийгенетическогоматериала.Кнастоящемувремениполученоэкспериментальноеподтверждение принципиальной возможности создания альфа-теста, а также разработаны8методики для изучения эффективности данной тест-системы [14-16]. Продемонстрированаэффективность альфа-теста для выявления генетически активных факторов окружающейсреды. В альфа-тесте был протестирован целый ряд физических и химических мутагенов:ультрафиолетовое излучение, этилметансульфонат, аналоги оснований (6-гидроксиламинопурин, 8-оксигуанин), 2-аминофлуорен, β-пропиолактон и ICR-170, акрилонитрил,диэтилгексилфтолатидиэтилстильбестрол[16,17].Альфа-тестпоказалсвоюэффективность для изучения результата инактивации ряда генов системы синтеза ДНК вобход повреждений и репарации ДНК с двунитевыми разрывами [17].

При определениигенетической активности 10 известных канцерогенов, мутагенный эффект которых не былпоказан, альфа-тест оказался наиболее чувствительным по сравнению с классическимитестами на конверсию, митотическую рекомбинацию и обратные мутации [18]. Данные,полученные нами ранее, подтверждают, что альфа-тест является адекватным подходомдля регистрации фенотипического проявления первичных повреждений ДНК инаследуемых изменений генетического материала, возникающих как спонтанно, так и привоздействии различными мутагенами.Цель и задачи исследований. Цель диссертационной работы: изучить характерфенотипического проявления первичных повреждений генетического материала и ихвклада в наследственную и модификационную изменчивость у дрожжей Saccharomycescerevisiae с использованием альфа-теста.Для достижения поставленной цели сформулированы следующие задачи:1.

Оценить способность первичных повреждений различных типов: модификацийоснований, двунитевых разрывов, пиримидиновых димеров, индуцированных эталоннымимутагенами, а также модификаций и неспаренностей оснований, возникших на фонедефектов систем репарации, проявляться фенотипически.2. Определить временные параметры процесса устранения и фенотипическогопроявления первичных повреждений относительно стадий клеточного цикла.Научная новизна.

В представленной работе впервые установлена молекулярнаяприрода первичных повреждений ДНК, способных проявляться фенотипически в альфатесте, а также исследована возможность их фенотипического проявления на разныхстадиях клеточного цикла. Впервые с использованием изогенных штаммов дрожжей былопроведено комплексное исследование эталонных мутагенов и дефектов систем репарациив альфа-тесте, состоящем из двух взаимодополняющих систем: тестов на "незаконную"гибридизацию и "незаконную" цитодукцию. Дополнительно в ходе исследования было9установлено, что дрожжевые клетки, потерявшие хромосому III, способны вступать вгибридизацию.Теоретическая и практическая значимость работы. Изучение процессапреобразования первичного повреждения в наследуемое изменение генетическогоматериала представляет особый интерес, как с теоретической, так и с практической точекзрения.

Исследования в этой области важны для понимания механизмов становлениямутаций, реципрокной и других типов рекомбинации и иных нарушений генетическогоматериала, а также для дальнейшего развития генетической токсикологии и исследованиямеханизмов, блокирующих мутагенез. Полученные результаты вносят вклад в развитиетеории мутационного процесса, а также будут полезны для дальнейшего изучениявзаимодействия систем репликации и репарации генетического материала, и исследованияточностирепарации, ипонимания фундаментальных механизмовизменчивости.Результаты работы могут быть использованы в дальнейших исследованиях в областиобщей биологии и генетики, мониторинга состояния окружающей среды, а также дляразработки и совершенствования систем тестирования генетической активности факторов,обладающих потенциальной мутагенной и канцерогенной активностью, что необходимодля защиты генома человека и животных от эндогенных и экзогенных мутагенныхфакторов.

Полученные нами результаты могут быть использованы в лекциях по курсам"Репликация, репарация и мутагенез", "Молекулярная генетика", "Частная генетикадрожжей", "Механизмы модификаций. К общей теории изменчивости", читаемых накафедре генетики и биотехнологии Санкт-Петербургский государственного университета,а также в образовательном процессе в биологических и медицинских высших учебныхзаведениях России, таких как Санкт-Петербургский государственный университет,Северо-Западный государственный медицинский университет им. И.И. Мечникова,Московский государственный университет, Новосибирский государственный университети др.Методология и методы исследования. В представленной работе использованинтегральный подход, сочетающий методы классической и молекулярной генетики,современныемолекулярно-генетическиеицитологическиеподходы.Вработеиспользован широкий спектр молекулярно-генетических методов (клонирование генов,трансформация клеток дрожжей и бактерий, полимеразная цепная реакция, методы подизайнупраймеровиплазмид,методиндукциипотерихромосом),методыфлуоресцентной микроскопии, проточная цитометрия, компьютерный анализ данных истатистические методы для оценки достоверности результатов.

Исследование проводили с10использованием в качестве модельного объекта эукариотических микроорганизмов грибовSaccharomyces cerevisiae.Положения, выносимые на защиту:Модификации оснований и двунитевые разрывы ДНК могут проявлятьсяфенотипически в альфа-тесте до их устранения системами репарации или превращения внаследуемые изменения генетического материала. Неспаренности оснований не имеютсамостоятельного фенотипического проявления в альфа-тесте и могут быть учтены толькопосле их превращения в наследуемые изменения генетического материала. В зависимостиот молекулярной природы первичного повреждения и связанной с этим его способностьюнарушатьматричныепроцессы,большинствопервичныхповреждениймогутфенотипически проявляться в альфа-тесте в пределах одного клеточного цикла.

Свежие статьи
Популярно сейчас
Почему делать на заказ в разы дороже, чем купить готовую учебную работу на СтудИзбе? Наши учебные работы продаются каждый год, тогда как большинство заказов выполняются с нуля. Найдите подходящий учебный материал на СтудИзбе!
Ответы на популярные вопросы
Да! Наши авторы собирают и выкладывают те работы, которые сдаются в Вашем учебном заведении ежегодно и уже проверены преподавателями.
Да! У нас любой человек может выложить любую учебную работу и зарабатывать на её продажах! Но каждый учебный материал публикуется только после тщательной проверки администрацией.
Вернём деньги! А если быть более точными, то автору даётся немного времени на исправление, а если не исправит или выйдет время, то вернём деньги в полном объёме!
Да! На равне с готовыми студенческими работами у нас продаются услуги. Цены на услуги видны сразу, то есть Вам нужно только указать параметры и сразу можно оплачивать.
Отзывы студентов
Ставлю 10/10
Все нравится, очень удобный сайт, помогает в учебе. Кроме этого, можно заработать самому, выставляя готовые учебные материалы на продажу здесь. Рейтинги и отзывы на преподавателей очень помогают сориентироваться в начале нового семестра. Спасибо за такую функцию. Ставлю максимальную оценку.
Лучшая платформа для успешной сдачи сессии
Познакомился со СтудИзбой благодаря своему другу, очень нравится интерфейс, количество доступных файлов, цена, в общем, все прекрасно. Даже сам продаю какие-то свои работы.
Студизба ван лав ❤
Очень офигенный сайт для студентов. Много полезных учебных материалов. Пользуюсь студизбой с октября 2021 года. Серьёзных нареканий нет. Хотелось бы, что бы ввели подписочную модель и сделали материалы дешевле 300 рублей в рамках подписки бесплатными.
Отличный сайт
Лично меня всё устраивает - и покупка, и продажа; и цены, и возможность предпросмотра куска файла, и обилие бесплатных файлов (в подборках по авторам, читай, ВУЗам и факультетам). Есть определённые баги, но всё решаемо, да и администраторы реагируют в течение суток.
Маленький отзыв о большом помощнике!
Студизба спасает в те моменты, когда сроки горят, а работ накопилось достаточно. Довольно удобный сайт с простой навигацией и огромным количеством материалов.
Студ. Изба как крупнейший сборник работ для студентов
Тут дофига бывает всего полезного. Печально, что бывают предметы по которым даже одного бесплатного решения нет, но это скорее вопрос к студентам. В остальном всё здорово.
Спасательный островок
Если уже не успеваешь разобраться или застрял на каком-то задание поможет тебе быстро и недорого решить твою проблему.
Всё и так отлично
Всё очень удобно. Особенно круто, что есть система бонусов и можно выводить остатки денег. Очень много качественных бесплатных файлов.
Отзыв о системе "Студизба"
Отличная платформа для распространения работ, востребованных студентами. Хорошо налаженная и качественная работа сайта, огромная база заданий и аудитория.
Отличный помощник
Отличный сайт с кучей полезных файлов, позволяющий найти много методичек / учебников / отзывов о вузах и преподователях.
Отлично помогает студентам в любой момент для решения трудных и незамедлительных задач
Хотелось бы больше конкретной информации о преподавателях. А так в принципе хороший сайт, всегда им пользуюсь и ни разу не было желания прекратить. Хороший сайт для помощи студентам, удобный и приятный интерфейс. Из недостатков можно выделить только отсутствия небольшого количества файлов.
Спасибо за шикарный сайт
Великолепный сайт на котором студент за не большие деньги может найти помощь с дз, проектами курсовыми, лабораторными, а также узнать отзывы на преподавателей и бесплатно скачать пособия.
Популярные преподаватели
Добавляйте материалы
и зарабатывайте!
Продажи идут автоматически
5288
Авторов
на СтудИзбе
417
Средний доход
с одного платного файла
Обучение Подробнее