Диссертация (Фенотипическое проявление повреждений генетического материала, учитываемых в альфа-тесте у дрожжей Saccharomyces cerevisiae)
Описание файла
Файл "Диссертация" внутри архива находится в папке "Фенотипическое проявление повреждений генетического материала, учитываемых в альфа-тесте у дрожжей Saccharomyces cerevisiae". PDF-файл из архива "Фенотипическое проявление повреждений генетического материала, учитываемых в альфа-тесте у дрожжей Saccharomyces cerevisiae", который расположен в категории "". Всё это находится в предмете "биология" из Аспирантура и докторантура, которые можно найти в файловом архиве СПбГУ. Не смотря на прямую связь этого архива с СПбГУ, его также можно найти и в других разделах. , а ещё этот архив представляет собой кандидатскую диссертацию, поэтому ещё представлен в разделе всех диссертаций на соискание учёной степени кандидата биологических наук.
Просмотр PDF-файла онлайн
Текст из PDF
САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТНа правах рукописиЖук Анна СергеевнаФЕНОТИПИЧЕСКОЕ ПРОЯВЛЕНИЕ ПОВРЕЖДЕНИЙ ГЕНЕТИЧЕСКОГОМАТЕРИАЛА, УЧИТЫВАЕМЫХ В АЛЬФА-ТЕСТЕ У ДРОЖЖЕЙ SACCHAROMYCESCEREVISIAEспециальность: 03.02.07 - генетикаДиссертацияна соискание ученой степеникандидата биологических наукНаучный руководитель:доктор биологических наук, профессор, академик РАН,Инге-Вечтомов Сергей ГеориевичСанкт-Петербург20162ОглавлениеСписок сокращений ...................................................................................................................5Введение .....................................................................................................................................6Глава 1. Обзор литературы.
....................................................................................................11Формирование представлений о мутационном процессе ....................................................111.1. Первые гипотезы о причинах мутационных изменений ...............................................111.2. Вклад физиологической теории мутационного процесса М. Е. Лобашева вформирование современных представлений о мутационных изменениях генетическогоматериала ..................................................................................................................................131.3. Современные представления о мутационном процессе................................................151.4.
Методы выявления первичных повреждений ДНК .......................................................211.5. Методы генетической токсикологии для выявления мутаций и хромосомныхаберраций ..................................................................................................................................231.6. Альфа-тест как метод для выявления фенотипического проявления первичныхповреждений и наследуемых изменений генетического материала ...................................261.6.1.
Генетические механизмы, лежащие в основе альфа-теста ........................................271.6.1.1. Жизненный и клеточный циклы гетероталличных дрожжей Saccharomycescerevisiae ...................................................................................................................................271.6.1.2. Генетический контроль типов спаривания у дрожжей Saccharomyces cerevisiae 301.6.1.3.
Переключение типов спаривания у дрожжей Saccharomyces cerevisiae ...............311.6.2. Генетические события, учитываемые в альфа-тесте ..................................................341.6. Постановка задачи ............................................................................................................41Глава 2. Материалы и методы ................................................................................................432.1. Штаммы дрожжей Saccharomyces cerevisiae, использованные в работе.....................432.2.
Плазмиды ...........................................................................................................................442.3. Среды и условия культивирования .................................................................................452.4. Реактивы ............................................................................................................................462.5. Стандартные методы генетики дрожжей .......................................................................462.6. Молекулярно-генетические методы ...............................................................................4632.7. Обработка клеток эталонными мутагенами ...................................................................472.8.
Фотореактивация ..............................................................................................................472.9. Тесты на "незаконную" гибридизацию и цитодукцию .................................................482.10. Определение общей частоты "незаконной" гибридизации и цитодукции. ...............482.11. Определение типа спаривания "незаконных" гибридов и цитодуктантов ................492.12. Количественный тест на индукцию прямых мутаций устойчивости к канаванину 502.13. Процедура синхронизации дрожжевых клеток перед проведением проточнойцитометрии ...............................................................................................................................502.14.
Подготовка образцов для проточной цитометрии .......................................................512.15. Микроскопия с флуоресцентной окраской DAPI (4',6-диамидино-2-фенилиндол) .512.16. Статистические методы..................................................................................................52Глава 3. Результаты .................................................................................................................543.1. Исследование фенотипического проявления модификаций оснований ДНК,индуцированных аналогами оснований, в системах "незаконной" гибридизации и"незаконной" цитодукции .......................................................................................................543.1.1.
Влияние 6-N-гидроксиламинопурина на частоту наследуемых и ненаследуемыхповреждений ДНК ...................................................................................................................543.1.2. Влияние накопления эндогенного 8-окcогуанина на частоту наследуемых иненаследуемых изменений генетического материала ..........................................................603.2. Влияние инактивации репарации ДНК с неспаренными основаниями на частотунаследуемых и ненаследуемых изменений генетического материала, выявляемых всистемах "незаконной" гибридизации и "незаконной" цитодукции ...................................633.3. Изучение способности пиримидиновых димеров проявляться фенотипически вальфа-тесте ...............................................................................................................................673.4.
Исследование фенотипического проявления двунитевых разрывов ДНК в системах"незаконной" гибридизации и "незаконной" цитодукции ...................................................713.5. Изучение природы "незаконных" гибридов, потерявших хромосому III ...................763.6. Изучение фенотипического проявления первичных повреждений генетическогоматериала в клеточном цикле .................................................................................................7943.6.1. Подбор условий для синхронизации дрожжевых штаммов, используемых в альфатесте ...........................................................................................................................................793.6.2. Тест на "незаконную" гибридизацию с использованием синхронизированных настадии G1 дрожжевых культур...............................................................................................863.6.3.
Тест на "незаконную" цитодукцию с использованием дрожжевых культур,заблокированных на стадии G1 ..............................................................................................90Глава 4. Обсуждение ...............................................................................................................954.1.Молекулярнаяприродапервичныхповреждений,способныхпроявлятьсяфенотипически .........................................................................................................................954.2.
Особенности устранения различных типов первичных повреждений в ходеклеточного цикла .....................................................................................................................964.3. Преимущества и ограничения альфа-теста ..................................................................105Заключение .............................................................................................................................107Выводы....................................................................................................................................108Список литературы ................................................................................................................109Благодарности ........................................................................................................................1265Список сокращений8-ОГ – 8-оксогуанинАП-сайты – апуриновые/апиримидиновые сайтыВП – Временные повреждения в локусе MATα (одновременно в MATα1 и MATα2 или вдвустороннем промоторе);ГАП – 6-N-гидроксиламинопуринКонв – Конверсия кассеты HMRa в локус MATαМВП – Мутации и временные повреждения в локусе MATαМут а* – Мутации одновременно в MATα1 и MATα2 или в двустороннем промоторе,делеции МАТα)Мут n/m – Мутации в MATα1 или MATα2ОЧГ – Общая частота "незаконной" гибридизацииOЧЦ – Общая частота цитодукцииПХ – Потеря хромосомы IIIППХ – Потеря правого плеча хромосомы IIIРек – Реципрокная рекомбинация между локусом МАТα и кассетой HMRaУФ излучение – ультрафиолетовое излучениеMMR – репарация ДНК с неспаренными основаниями (mismatch repair)TLS – синтез ДНК в обход повреждения (translesion DNA synthesis)6ВведениеАктуальность темы.
