Диссертация (1145828)
Текст из файла
САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТНа правах рукописиЖук Анна СергеевнаФЕНОТИПИЧЕСКОЕ ПРОЯВЛЕНИЕ ПОВРЕЖДЕНИЙ ГЕНЕТИЧЕСКОГОМАТЕРИАЛА, УЧИТЫВАЕМЫХ В АЛЬФА-ТЕСТЕ У ДРОЖЖЕЙ SACCHAROMYCESCEREVISIAEспециальность: 03.02.07 - генетикаДиссертацияна соискание ученой степеникандидата биологических наукНаучный руководитель:доктор биологических наук, профессор, академик РАН,Инге-Вечтомов Сергей ГеориевичСанкт-Петербург20162ОглавлениеСписок сокращений ...................................................................................................................5Введение .....................................................................................................................................6Глава 1. Обзор литературы.
....................................................................................................11Формирование представлений о мутационном процессе ....................................................111.1. Первые гипотезы о причинах мутационных изменений ...............................................111.2. Вклад физиологической теории мутационного процесса М. Е. Лобашева вформирование современных представлений о мутационных изменениях генетическогоматериала ..................................................................................................................................131.3. Современные представления о мутационном процессе................................................151.4.
Методы выявления первичных повреждений ДНК .......................................................211.5. Методы генетической токсикологии для выявления мутаций и хромосомныхаберраций ..................................................................................................................................231.6. Альфа-тест как метод для выявления фенотипического проявления первичныхповреждений и наследуемых изменений генетического материала ...................................261.6.1.
Генетические механизмы, лежащие в основе альфа-теста ........................................271.6.1.1. Жизненный и клеточный циклы гетероталличных дрожжей Saccharomycescerevisiae ...................................................................................................................................271.6.1.2. Генетический контроль типов спаривания у дрожжей Saccharomyces cerevisiae 301.6.1.3.
Переключение типов спаривания у дрожжей Saccharomyces cerevisiae ...............311.6.2. Генетические события, учитываемые в альфа-тесте ..................................................341.6. Постановка задачи ............................................................................................................41Глава 2. Материалы и методы ................................................................................................432.1. Штаммы дрожжей Saccharomyces cerevisiae, использованные в работе.....................432.2.
Плазмиды ...........................................................................................................................442.3. Среды и условия культивирования .................................................................................452.4. Реактивы ............................................................................................................................462.5. Стандартные методы генетики дрожжей .......................................................................462.6. Молекулярно-генетические методы ...............................................................................4632.7. Обработка клеток эталонными мутагенами ...................................................................472.8.
Фотореактивация ..............................................................................................................472.9. Тесты на "незаконную" гибридизацию и цитодукцию .................................................482.10. Определение общей частоты "незаконной" гибридизации и цитодукции. ...............482.11. Определение типа спаривания "незаконных" гибридов и цитодуктантов ................492.12. Количественный тест на индукцию прямых мутаций устойчивости к канаванину 502.13. Процедура синхронизации дрожжевых клеток перед проведением проточнойцитометрии ...............................................................................................................................502.14.
Подготовка образцов для проточной цитометрии .......................................................512.15. Микроскопия с флуоресцентной окраской DAPI (4',6-диамидино-2-фенилиндол) .512.16. Статистические методы..................................................................................................52Глава 3. Результаты .................................................................................................................543.1. Исследование фенотипического проявления модификаций оснований ДНК,индуцированных аналогами оснований, в системах "незаконной" гибридизации и"незаконной" цитодукции .......................................................................................................543.1.1.
Влияние 6-N-гидроксиламинопурина на частоту наследуемых и ненаследуемыхповреждений ДНК ...................................................................................................................543.1.2. Влияние накопления эндогенного 8-окcогуанина на частоту наследуемых иненаследуемых изменений генетического материала ..........................................................603.2. Влияние инактивации репарации ДНК с неспаренными основаниями на частотунаследуемых и ненаследуемых изменений генетического материала, выявляемых всистемах "незаконной" гибридизации и "незаконной" цитодукции ...................................633.3. Изучение способности пиримидиновых димеров проявляться фенотипически вальфа-тесте ...............................................................................................................................673.4.
Исследование фенотипического проявления двунитевых разрывов ДНК в системах"незаконной" гибридизации и "незаконной" цитодукции ...................................................713.5. Изучение природы "незаконных" гибридов, потерявших хромосому III ...................763.6. Изучение фенотипического проявления первичных повреждений генетическогоматериала в клеточном цикле .................................................................................................7943.6.1. Подбор условий для синхронизации дрожжевых штаммов, используемых в альфатесте ...........................................................................................................................................793.6.2. Тест на "незаконную" гибридизацию с использованием синхронизированных настадии G1 дрожжевых культур...............................................................................................863.6.3.
Тест на "незаконную" цитодукцию с использованием дрожжевых культур,заблокированных на стадии G1 ..............................................................................................90Глава 4. Обсуждение ...............................................................................................................954.1.Молекулярнаяприродапервичныхповреждений,способныхпроявлятьсяфенотипически .........................................................................................................................954.2.
Особенности устранения различных типов первичных повреждений в ходеклеточного цикла .....................................................................................................................964.3. Преимущества и ограничения альфа-теста ..................................................................105Заключение .............................................................................................................................107Выводы....................................................................................................................................108Список литературы ................................................................................................................109Благодарности ........................................................................................................................1265Список сокращений8-ОГ – 8-оксогуанинАП-сайты – апуриновые/апиримидиновые сайтыВП – Временные повреждения в локусе MATα (одновременно в MATα1 и MATα2 или вдвустороннем промоторе);ГАП – 6-N-гидроксиламинопуринКонв – Конверсия кассеты HMRa в локус MATαМВП – Мутации и временные повреждения в локусе MATαМут а* – Мутации одновременно в MATα1 и MATα2 или в двустороннем промоторе,делеции МАТα)Мут n/m – Мутации в MATα1 или MATα2ОЧГ – Общая частота "незаконной" гибридизацииOЧЦ – Общая частота цитодукцииПХ – Потеря хромосомы IIIППХ – Потеря правого плеча хромосомы IIIРек – Реципрокная рекомбинация между локусом МАТα и кассетой HMRaУФ излучение – ультрафиолетовое излучениеMMR – репарация ДНК с неспаренными основаниями (mismatch repair)TLS – синтез ДНК в обход повреждения (translesion DNA synthesis)6ВведениеАктуальность темы.
Характеристики
Тип файла PDF
PDF-формат наиболее широко используется для просмотра любого типа файлов на любом устройстве. В него можно сохранить документ, таблицы, презентацию, текст, чертежи, вычисления, графики и всё остальное, что можно показать на экране любого устройства. Именно его лучше всего использовать для печати.
Например, если Вам нужно распечатать чертёж из автокада, Вы сохраните чертёж на флешку, но будет ли автокад в пункте печати? А если будет, то нужная версия с нужными библиотеками? Именно для этого и нужен формат PDF - в нём точно будет показано верно вне зависимости от того, в какой программе создали PDF-файл и есть ли нужная программа для его просмотра.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
