Диссертация (Совершенствование двухстадийной методики хромато-масс-спектрометрического определения свободных и этерифицированных жирных кислот в биологических образцах), страница 6

PDF-файл Диссертация (Совершенствование двухстадийной методики хромато-масс-спектрометрического определения свободных и этерифицированных жирных кислот в биологических образцах), страница 6 Химия (46275): Диссертация - Аспирантура и докторантураДиссертация (Совершенствование двухстадийной методики хромато-масс-спектрометрического определения свободных и этерифицированных жирных кислот в биоло2019-06-29СтудИзба

Описание файла

Файл "Диссертация" внутри архива находится в папке "Совершенствование двухстадийной методики хромато-масс-спектрометрического определения свободных и этерифицированных жирных кислот в биологических образцах". PDF-файл из архива "Совершенствование двухстадийной методики хромато-масс-спектрометрического определения свободных и этерифицированных жирных кислот в биологических образцах", который расположен в категории "". Всё это находится в предмете "химия" из Аспирантура и докторантура, которые можно найти в файловом архиве СПбГУ. Не смотря на прямую связь этого архива с СПбГУ, его также можно найти и в других разделах. , а ещё этот архив представляет собой кандидатскую диссертацию, поэтому ещё представлен в разделе всех диссертаций на соискание учёной степени кандидата химических наук.

Просмотр PDF-файла онлайн

Текст 6 страницы из PDF

СЖК (наряду с глюкозой)подавляют экспрессию гена инсулина и уменьшают секрецию инсулина, но делают это ненапрямую, а опосредованно [72]. В результате этерификации СЖК образуются, в частности,церамиды, воскообразные липиды, состоящие из сфингозина (2-амино-4-октадецен-1,3диол) и жирной кислоты.Церамиды в больших концентрациях присутствуют в клеточных мембранах, составляя основу сфинголипидов (например, сфингомиелина), класса фосфолипидов клеточныхмембран. Церамиды являются не просто структурными элементами, но участвуют во внутриклеточной сигнализации, регулируя дифференцировку, пролиферацию, программируемую клеточную гибель клеток [73,41].

Метаболическое профилирование ЖК оказалосьочень перспективным методом, который может повысить чувствительность и специфичность диагностики, дискриминировать диабет 2-го типа от различных стадий ДН. В одномиз исследований в плазме крови больных было идентифицировано 15 СЖК и 15 ЭЖК, приэтом наиболее информативным показателем оказалась арахидоновая кислота и ее производные, которые участвуют в синтезе простагландинов - известных участников воспалительных процессов [71]. Эндотелий сосудов – одна из главных мишеней СЖК, а поражениемикрососудов почек – главная причина ДН [74,75].МиопатияНарушение нормальных процессов окисления ЖК является причиной важнойгруппы заболеваний, которые могут сопровождаться тяжелыми осложнениями, в том числе,со смертельным исходом.

Они охватывают широкий спектр клинических расстройств,включая миопатию, обусловленную накоплением липидов, прогрессивную кардиомиопатию, рецидивирующию гипогликемическую энцефалопатию или Рейе-подобный синдром,судороги, а также психические торможения. Среди прочих методов диагностики таких заболеваний применяется определение степени окисления дейтерированного пальмитата [1С], октаноата и бутирата, дейтерированной олеиновой кислоты в фибропластах, для уста-14новления специфики нарушений окисления ЖК [76].251.3. Инструментальные методы определения свободных и этерифицированных жирных кислот1.3.1 Определение жирных кислот методами газовой хроматографии.Наличие у ЖК полярных функциональных групп, которые препятствуют их качественному и количественному определению методом ГХ-МС, обуславливает необходимость проведения предварительной дериватизации перед анализом.

В литературе описаныосновные подходы к дериватизации ЖК, однако существуют методы определения ЖК и бездериватизации, но обычно они используются для определения высоких концентраций ЖК,или для достаточно простых матриц, наподобие фармакологических добавок с малым содержанием примесей [77].Один из самых популярных методов дериватизации карбоновых кислот, это переводих в метиловые эфиры. При метилировании происходит конверсия органических кислот вих метиловые эфиры, более удобные для ГХ анализа соединения за счёт уменьшения полярности и увеличения летучести [78].Основно-катализируемые реакции дериватизации ЖКОсновно-катализируемые реакции чаще всего используют для определения ЭЖК.Применяемые для этой процедуры реагенты редко подходят для этерификации СЖК. Самый распространенный агент для конверсии ацилглицеридов в метиловые эфиры это метоксид натрия в метаноле [79].

Этот реагент, однако, не может быть успешно применен вслучае высокой концентрации СЖК в анализируемой пробе [80]. Реакция переэтерификации протекает быстро даже при комнатной температуре. В таких мягких условиях не протекают реакции изомеризации двойных связей в ЖК, а также не происходит высвобождениеальдегидов из плазмалогенов, которые могут помешать хроматографическому определению.

В таких условиях не происходит переэтерификация сфигнолипидов и холестерола, длякоторых требуются более жесткие условия. Особенностью этого основно-катализируемогометода переэтерификации является отсутствие конверсии СЖК в метиловые эфиры. Условием протекания реакции является отсутствие воды в пробе, так как в противном случаепроисходит гидролиз сложных эфиров с образованием карбоновых кислот, что может вестик потерям при определении ЭЖК. Увеличение времени реакции дериватизации может статьпричиной изменения исходного состава ЖК, например, высокие концентрации основанияи высокая температура может привести к образованию сопряженных (конъюгированных)ЖК.Наряду с метоксидом натрия часто используют спиртовой раствор гидроксида калия.Чаще всего он используется для переэтерификации глицеридов при анализе масел.26Было отмечено, что процедура с метоксидом калия (реакция с которым протекаетоколо двух минут) подходит для определения ЖК, входящих в состав большого количестваразнообразных жиров.Намного реже для этерификации масел и жиров используются растворы гуанидинаи его алкилпроизводны в метаноле.

Этот щелочной реагент катализирует комплексный метанолиз масел, превращает ацилглицериды и свободные ЖК в их метиловые эфиры. Этотреагент также необходимо удалить из пробы перед газохроматографическим анализом. Реакция проходит в мягких условиях, поэтому не протекают реакции изомеризации двойныхсвязей, время пробоподготовки занимает 2 минуты на водяной бане.Кислотно-катализируемые реакции.Среди всех разновидностей кислотно-катализируемых реагентов только трифторидбора в метаноле конвертирует и ацилглицериды, и свободные ЖК в метиловые эфиры.

Применение трифторида бора для определения ЖК описано еще в 1964 г [81]. Он является реакционноспособным переэтерифицирующим реагентом, способен реагировать с плазмалогенами и высвобождать альдегиды, которые затем конвертируются в диметилацетали. Присутствие диметилацеталей в пробе может мешать газохроматографическому анализу ЖК.Система BF3-метанол, реагируя с холестеролом, образует холестириловый метиловый эфири холистадиен, которые также являются мешающими компонентами при определении ЖК.Кроме того, раствор трехфтористого бора в метаноле имеет ограничения по возможнымусловиям хранения [79]. В работе [82] систему BF3-метанол применяли для определенияжирно-кислотного состава триглицеридов. Для этого производили экстракцию липидовкрови смесью хлороформ/метанол, а затем к высушенному осадку добавляли трифторидбора с метанолом.

Возможность применения трифторида бора для анализа ЖК сывороткикрови и мембран эритроцитов описана в [83]; при это была использована экстракция липидов смесью хлороформ-метанол. Трифторид бора может быть использован как отдельно,для переэтерификации ЭЖК, таких как холестерин и триглицериды, так и в комбинации сметанолом и гидроксидом натрия для конверсии метиловых эфиров и СЖК, полярных эфиров, ТГ и т.д. [84].Хлорид алюминия в метаноле также используют для переэтерификации некоторыхлипидов. В молочных и овощных маслах этот реагент может быть использован без предварительной экстракции липидов.

Хлорид алюминия в метаноле сравним с системой BF3метанол по возможности переэтерификации холестероловых эфиров. Продукты метилирования, которые содержатся в пробе после реакции, не мешают последующему ГХ анализу.Однако такой способ не подходит для метилирования СЖК [85,79].27Ацетилхлорид также, как и хлорид алюминия, добавляют в пробу без предварительнойпробоподготовки,азатемпроизводятэкстракциюметиловыхэфировн-гексаном [85]. С помощью ацетилхлорида в исследовании [86] проводили метилированиехолестероловых эфиров, фосфолипидов и сфингомиелина смесью метанол-бензол-ацетилхлорид.

В результате авторы установили, что такая смесь применима для широкого спектралипидов, однако не подходит для дериватизации СЖК.Метанольный раствор соляной и серной кислот часто используют для метилирования как СЖК, так и для переэтерификации сфинголипидов [85]. Для определения СЖК используют 2, 5 или 10% растворы серной кислоты в метаноле и выдерживают при 60-70С втечении часа [54].Было проведено исследование [87] кислотно-катализируемой дериватизации с использованием ацетил хлорида 5% и 10%, 2% H2SO4, 5% H2SO4, 14% BF3 и 5% HCl в метаноле.

От процентного соотношения реагентов зависел выход метиловых эфиров различныхтипов липидов триглицеридов, фосфолипидов и холестерина. Наибольший общий выходреакции наблюдали при использовании 5% ацетилхлорида в метаноле, - Реакция проходила30 минут при 90 °С.Так как ЖК в организме человека находятся в двух видах - в этерифицированном инеэтерифицированном, то их раздельное определение может дать полную картину о нарушении метаболизма.

Например, был описан метод построения метаболического профиляпациентов с заболеванием диабета 2го типа. Для этого было предложено сначала метилировать этерифицированные ЖК с помощью 0,4М гидроксида натрия в метаноле и провестижидкость-жидкостную экстракцию для их извлечения из плазмы. Затем в остаточнойплазме провести метилирование неэтерифицованных ЖК с помощью 5% серной кислоты вметаноле при 70°С 30 минут. Выход продуктов составил около 80%. Таким образом былоопределено 20 ЖК в этерифицированном и неэтерифицированном виде [88,89].Одним из главных недостатков метилирования является относительно длительноевремя реакции и высокая температура, что способствует изменению структуры определяемых ЖК.Помимо метилирования, для дериватизации ЖК можно использовать различные реагенты, например, такие, как бис-триметилсилил-трифторацетамид (BSTFA [90], N-метилN-(трет-бутилдиметилсилил)трифторацетамид (MTBSTFA [91].

бис-(Пентафторфенил)диметилсилан, реакция с которым проходит всего 15 минут при комнатной температуре, является одним из наиболее мягких и надежных способов дериватизации [92]. Описан методдериватизации пентафторбензилбромидом (PFBBr), в котором определяли 33 свободные28ЖК в плазме. Продолжительность реакции составляла 20 минут при комнатной температуре, а пределы обнаружения составили 0,05-1 пг/мкл.1.3.2 Определение жирных кислот методом жидкостной хроматографииВ связи с тем, что определение ЖК методом ГХ-МС сопряжено с необходимостьюпроведения трудоёмкой и времязатратной процедуры дериватизации, жидкостная хроматография является хорошей альтернативой.

Свежие статьи
Популярно сейчас
Как Вы думаете, сколько людей до Вас делали точно такое же задание? 99% студентов выполняют точно такие же задания, как и их предшественники год назад. Найдите нужный учебный материал на СтудИзбе!
Ответы на популярные вопросы
Да! Наши авторы собирают и выкладывают те работы, которые сдаются в Вашем учебном заведении ежегодно и уже проверены преподавателями.
Да! У нас любой человек может выложить любую учебную работу и зарабатывать на её продажах! Но каждый учебный материал публикуется только после тщательной проверки администрацией.
Вернём деньги! А если быть более точными, то автору даётся немного времени на исправление, а если не исправит или выйдет время, то вернём деньги в полном объёме!
Да! На равне с готовыми студенческими работами у нас продаются услуги. Цены на услуги видны сразу, то есть Вам нужно только указать параметры и сразу можно оплачивать.
Отзывы студентов
Ставлю 10/10
Все нравится, очень удобный сайт, помогает в учебе. Кроме этого, можно заработать самому, выставляя готовые учебные материалы на продажу здесь. Рейтинги и отзывы на преподавателей очень помогают сориентироваться в начале нового семестра. Спасибо за такую функцию. Ставлю максимальную оценку.
Лучшая платформа для успешной сдачи сессии
Познакомился со СтудИзбой благодаря своему другу, очень нравится интерфейс, количество доступных файлов, цена, в общем, все прекрасно. Даже сам продаю какие-то свои работы.
Студизба ван лав ❤
Очень офигенный сайт для студентов. Много полезных учебных материалов. Пользуюсь студизбой с октября 2021 года. Серьёзных нареканий нет. Хотелось бы, что бы ввели подписочную модель и сделали материалы дешевле 300 рублей в рамках подписки бесплатными.
Отличный сайт
Лично меня всё устраивает - и покупка, и продажа; и цены, и возможность предпросмотра куска файла, и обилие бесплатных файлов (в подборках по авторам, читай, ВУЗам и факультетам). Есть определённые баги, но всё решаемо, да и администраторы реагируют в течение суток.
Маленький отзыв о большом помощнике!
Студизба спасает в те моменты, когда сроки горят, а работ накопилось достаточно. Довольно удобный сайт с простой навигацией и огромным количеством материалов.
Студ. Изба как крупнейший сборник работ для студентов
Тут дофига бывает всего полезного. Печально, что бывают предметы по которым даже одного бесплатного решения нет, но это скорее вопрос к студентам. В остальном всё здорово.
Спасательный островок
Если уже не успеваешь разобраться или застрял на каком-то задание поможет тебе быстро и недорого решить твою проблему.
Всё и так отлично
Всё очень удобно. Особенно круто, что есть система бонусов и можно выводить остатки денег. Очень много качественных бесплатных файлов.
Отзыв о системе "Студизба"
Отличная платформа для распространения работ, востребованных студентами. Хорошо налаженная и качественная работа сайта, огромная база заданий и аудитория.
Отличный помощник
Отличный сайт с кучей полезных файлов, позволяющий найти много методичек / учебников / отзывов о вузах и преподователях.
Отлично помогает студентам в любой момент для решения трудных и незамедлительных задач
Хотелось бы больше конкретной информации о преподавателях. А так в принципе хороший сайт, всегда им пользуюсь и ни разу не было желания прекратить. Хороший сайт для помощи студентам, удобный и приятный интерфейс. Из недостатков можно выделить только отсутствия небольшого количества файлов.
Спасибо за шикарный сайт
Великолепный сайт на котором студент за не большие деньги может найти помощь с дз, проектами курсовыми, лабораторными, а также узнать отзывы на преподавателей и бесплатно скачать пособия.
Популярные преподаватели
Добавляйте материалы
и зарабатывайте!
Продажи идут автоматически
5288
Авторов
на СтудИзбе
417
Средний доход
с одного платного файла
Обучение Подробнее