Диссертация (Сочетанное применение интраоперационной микроскопии и высокоинтенсивных лазеров при лечении пациентов с поражениями в периапикальных тканях), страница 9

При этомпроводили замеры костной полости, используя кронциркуль по диаметруполости.Всем пациентам (n=67) выполняли прицельную внутриротовуюконтактную рентгенографию на этапе диагностики и лечения и впослеоперационном периоде (n=67) (рис. 2).Рис. 2. ВКР. Выявление причинного зуба и степени вовлечения соседних зубовОртопантомографияДанный вид лучевого исследования выполняли на цифровом аппарате«STRATO 2000» (Италия). Во время проведения данного исследованияпациентсиделспрямойшеей,асагиттальнаяплоскостьстрогоперпендикулярна полу кабинета. Зубы в процесе съемки разделялиспециальном валиком,ортопедические конструкции просили извлечь изполости рта, а также убрать все металлические декоративныеукрашения.Технические параметры исследования представлены в таблице 4.51Таблица 4 - Технические параметры цифровой ортопантомографиина аппарате «STRATO 2000»ТелосложениемАkVсекундНормостеническое107415Гипостеническое107015Гиперстеническое107615На этапе первичной диагностики у пациентов с периапикальнымипоражениями (n=67) при анализе ортопантомограмм определяли размерыпатологического очага, локализацию и отношение к близлежащим анатомическим образованиям (рис.

3).Рис. 3. ОПТ. Оценка объема поражения и близости периапикальногопоражения к соседним анатомическим структурам52Впослеоперационномпериодепроведениеортопантомографиипозволило оценить качество остеорегенерата (n=138).Дентальная объемная томографияДанный вид цифрового лучевого исследования выполняли на аппарате«Galileos» (Германия) с коническим лучом рентгеновского излучения врежимах высокого разрешения и пониженной лучевой нагрузкой. Во всехслучаях для обработки данных компьютерной томографии используютсяпрограммы-просмотрщики GALILEOS viewer соответственно, в функциикоторых входит обработка, управление изображениями и сохранение их вбазе данных. На предоперационном этапе для уточнения истинного размераочага периапикального поражения и определения соотношения полостикисты к важным анатомическим структурам в некоторых случаях дополнительно выполняли ДОТ (п=12) (рис.

4).Рис. 4. ДОТ. Планирование операции цистэктомия на нижней челюсти с помощьюпрограммного обеспечения «GALILEOS Viewer»На этапе планирования операции цистэктомии ДОТ применялась для53прецизионной оценки размеров кисты, а также соотношение очаговпоражениякважнымверхнечелюстнымотверстию)ианатомическимпазухам,измерениясоседнихобластях.Такжеобразованиямнижнечелюстномуплотностикостипроводилась(полостиканалу,вочагеобщаяноса,ментальномупораженияоценкаисостояниязубочелюстной системы с целью выявления иной патологии и выявленияпротивопоказаний к операции.

Технические параметры сканирования надентальном объемном томографе GALILEOS представле ы в таблице 5.Таблица 5 - Технические параметры сканирования на дентальных объемныхтомографахПараметрыGALILEOSПроизводительSiCAT Gmbh&Co, ГерманияРазмер сенсора, см15Х15Размер вокселя, мм0,150-0,300Лучевая нагрузка, мкЗв45-50 (постоянная)Время сканирования, сек14В послеоперационном периоде данное исследование выполняли сцелью контроля качества проведённой операции цистэктомии.542.4. Биохимические методы исследования содержания в десневойжидкости гомоцистеина, лактоферрина и фактора ростафибробластовБиохимические исследования проводились на кафедре биологическойхимии МГМСУ им. А.

И. Евдокимова.Методика сбора, получения и подготовки элюатов десневой жидкостипациентов с радикулярными кистами челюстей к исследованиюПередисследованиемизготавливалисьполоски-cстрипыизхроматографической бумаги длиной 1,5 см, шириной 0,4 мм, где один крайстрипа был заострён (рис. 5).Рис. 5. Полоска хроматографическойбумагиРис. 6. Методика забора десневой жидкостииз десневого желобка с помощью полоскииз хроматографической бумагиПеред введением полоски в десневую борозду зуба с радикулярнойкистой зуб протирали от зубного налёта и высушивали подачей воздухаиз наконечника. После этого полоски заостренным концом вводили понаправлению ко дну борозды на 1 мм и оставляли полоску на 5 минут55(рис.

6).Полоску, пропитанную десневой жидкостью (ДЖ), помещали впластиковую пробирку типа «эпиндорф», содержащую 0,5–1,0 мл 0,9 % NaClи элюировали на вортексе в течение 4 часов. По окончании этапа элюацииполоску извлекали из пробирки и полученный элюат ДЖ до началаисследования хранился на холоде при t -30°С.Сроки забора образцов ДЖ составляли 3 и 7 дней после операции.Методика количественного анализа белков и пептидовВ супернатанте образцов ДЖ иммуноферментным методом наанализаторе «StatFax» - 2200 (США) (рис.

7) определяли количествоосновного фактора роста фибробластов -β (ФРФ -β), лактоферрина (ЛФ) иаминокислоты гомоцистеина (Hcy). Принцип иммуноферментного анализаоснован на оценке иммунологической реакции антиген-антитело (ШтруноваЛ. Н., 2011).Рис. 7. Полуавтоматический анализатор для проведенияиммуноферментного анализа «StatFax» - 220056Методика определения основного фактора роста фибробластов-βС целью количественного определения основного фактора ростафибробластов-βбылиспользованнаборфирмы«ИММУНОАСАЙ»,поставляемый российской компанией «БиоХимМак».

Принцип методаоснован на твердофазном иммуноферментном анализе, с применениемполиклональных антител к основному фактору роста фибробластов-β (оФРФβ).В ячейках при добавлении исследуемого образца во время первойинкубации происходит связывание оФРФ-β с поликлональными антителами,иммобилизованными на внутренней поверхности лунок.

По завершенииобработки добавляются биотинилированные антитела против оФРФ-β,которые во второй инкубации связываются с иммобилизованным оФРФ-β,связавшимся в первой инкубации.В соответствующие ячейки вносили по 0,05 мл поверочного образца ипробных проб в титре 500, 250, 125, 62.5, 31.2 и 15.6 пг/мл и 50 мклисследуемых образцов костной ткани.

Выводили 45 минут при температуре37°С. Обрабатывали ячейки промывочным раствором 0,4 мл 4 раза.Добавляли в ячейки по 0,1 мл рабочего раствора конъюгата стрептавидинпероксидазы. Выводили 30 минут при температуре 37°С. Повторнообрабатывали ячейкиПослеэтогорабочим промывочным растворомвносиливячейкипо0,1мл0,4 мл 4 раза.рабочегорастворатетрaметилбензидинa и выводили в темноте 30 мин при температуре 18-25°С.Затем добавляли в ячейки по 0,1 мл stop-реагента и смешивали планшет нашейкере в течение 10-15 сек, stop-реакцию выдерживали в течение 2-х часов;при этом содержимое лунок принимало желтый цвет. При 450 нм измерялиоптическую плотность. Чувствительность данного метода не превышает 15,6пг/мл.Методика определения содержания гомоцистеинаС целью выявления количества гомоцистеина в десневой жидкости былиспользованкоммерческийнаборфирмыАКСИС,поставляемый57«БиоХимМак» (Россия).Данный солидный иммуноферментный анализоснован на конкуренции между SAH (S-аденозилгомоцистеин) в образце иSAH,неподвижнымвячейкахпланшета,засайтысвязываниясмоноклональными анти-SAH антителами.

После удаления анти-SAH антител,не связавшихся с планшетом, добавляются вторые кроличьи антимышиныеантитела, меченые пероксидазой хрена.Изначально перед анализом за 1 час был изготовлен (SPS) раствор,необходимый для первичной обработки образцов. Чтобы получить этотраствор смешивали следующие реагенты: 0,25 мл раствора aденозиндитиотреитола и 0,25 мл рaствора телячьей, S-аденозил-L-гомоцистеингидролaзы и трис-буфер с глицеролом-метилпарабеном и раствор лимоннойкислоты, 0,09 % раствора NaN3 4,5 мл и фосфатного буфера,. Далее к 0,025мл кaлибраторов, образцов и контролей добавляли 0,5 мл приготовленногораствора, накрывалии плёнкой и выводили полчаса при t 37°С. В готовыепробирки добавляли 0,5 мл 0,15 % раствора мертиолят-фосфатного буфера,смешивали в шейкере, и полученную смесь выводили 15 минут при 18-25°С,а затем добавляли реагент, состоящий из раствора аденозиндезаминазы,бычьего сывороточного альбумина (БСА), фосфатного буфера, 0,09 %раствора NaN3 и фенолового красного красителя затем смешивали ивыводили 15 минут при t 18-25°С.В соответствующие ячейки, покрытые SAH-антителами, вносили по0,025 мл разведённых калибраторов, контролей и образцов костной ткани.В каждую ячейку добавляли 0,2 мл моноклональных анти-S-аденозил-Lгомоцистеин-антител мышей, БСА, 0,01 % раствора мертиолята, накрывалиплёнкой и выводили 30 минут при t 18-25°С.

Затем полоски 3 разапромывали 0,4 мл промывного раствора (фосфатный буфер, твин 20, 0,01 %раствормертиолята и БСА) и вновь вносили в каждую ячейку 0,1 млферментного конъюгата с антителами кроликов и мышей, БСА, пероксидазойхрена, 0,01 % раствора мертиолята, выводили 20 минут при t 18-25°С.Стрипы промывали 400 мкл промывного раствора 3 раза, добавляли 0,1 мл58тетраметилбензидина, выводили 10 минут при t 18-25°С. Добавляли 0,1 млstop-раствора (0,8 М Н2SO4), смешивали на шейкере и оптическуюплотность вычисляли при 450 нм на протяжении 15 минут. Чувствительностьданного метода находится в диапазоне от 4,0 до 0,5 пг/мл.Методика определения лактоферринаДля количественного определения лактоферрина был использованнабор фирмы «Вектор-Бест» (Россия).