Диссертация (Теоретические и методологические подходы к стандартизации и оценке качества лекарственного растительного сырья и масляных экстрактов на его основе), страница 12

Окисление - одна из главных причин порчи масел и жиров. Ненасыщенные ЖК, легко окисляясь по двойным связям, превращаются в перекисные и затем гидро-53перекисные соединения [365]. У масел, в которых произошли процессы окислительного прогоркания, значительно снижаются органолептические показатели качества (вкус и запах). Многиепродукты окисления также могут вызывать различные заболевания и отравления [365]. Известно,что продукты окисления масел и жиров делятся на три группы. Первичные продукты окисления: гидроперекиси, представляющие особую опасность как канцерогены-прооксиданты [333].Вторичные продукты окисления: карбонильные соединения, эпокиси- и многоатомныеспирты.

Третичные продукты окисления: карбоновые кислоты и альдегиды низкомолекулярнойгруппы. Выделяют следующие типы прогоркания: окислительное и гидролитическое. Под действиемферментов - липаз протекает гидролитическое прогоркание, чему способствует свет, влага, доступ воздуха, и повышенные температуры. При этом накапливаются в маслах свободные ЖК, повышая величину КЧ.

После гидролитического прогоркания происходит окислительное, или же оно может быть и безнего. Окислительное прогоркание бывает трех видов [333,365]. Первое - неферментативное, сопряжено с окислением кислородом воздуха ненасыщенных ЖК в триглицеридах. По месту разрыва двойных связей присоединяется кислород, образуя пероксиды. Разложение пероксидов ЖК приводит к образованию альдегидов, обусловливающих появление у масла неприятного вкуса и запаха:Второе - ферментативное (кетонное), происходящее часто при воздействии микрофлоры, и характерно дляжирных РМ, в жирнокислотный состав которых входят кислоты С6 —С12-:Третий вид окисительного пргоркания - ферментативное под действием липоксидаз и липоксигеназ.Образующиеся при этом гидропероксиды, способны окислять БАВ, содержащиеся в РМ, в частности каротиноиды и токоферолы.Для определения степени и характера изменений липидов в отечественной и зарубежнойпрактике научных исследований используют следующие подходы:- определение содержания исходных компонентой субстрата (например, свободных ЖК (КЧ),сопряженных диенов, поглощенного кислорода, образовавшихся свободных радикалов, определение жирнокислотного и фракционного состава липидов);- определение первичных продуктов окисления масла (например, пероксидов – ПЧ) [70]; определение содержания вторичных продуктов окисления жира, таких как малоновый диальдегид,карбонильные соединения и другие вещества (тест с 2-тиобарбитуровой кислотой, альдегидноечисло, АЧ, тест Kreis, количество карбонильных соединений) [85,89]; оценка совокупных изме-54нений липидов при тотальном окислении (totox-показатель); косвенные методы, которые включают определение структуры, спектральных характеристик, функциональных свойств и цветаисследуемого объекта.На основе данных УФ-спектра РМ в настоящее время принято рассчитывать такой важный параметр, как ИО, характеризующий качество липидного комплекса БАВ РМ.

Этот показатель отражает содержание суммы продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ) [3,37,187,236,245,304]. НД в настоящеевремя [3,37,187,236, 245,304] расчет ИО рекомендует проводить разными методами. Во-первых, ИО может бытьвычислен по отношению оптической плотности раствора ФП в этаноле или н-гексане при λ=232 нм, где поглощают конъюгированные гидропероксиды, к оптической плотности при λ=206 – 210 нм, где поглощают– С - С – связи образца [3].

В данном случае ИО отражает содержание продуктов первичного окисления –конъюгаты гидропероксидов в образце. Во-вторых, по сведениям автора [245], этот показатель может бытьпредставлен как соотношение оптических плотностей раствора ФП в этаноле или н-гексане при λ=233 нм кλ=215 нм. По рекомендациям Британской фармакопеи рассчитывают величину соотношения светопоглощения продуктов первичного и вторичного окисления липидов А232 / А270 [3]. ИО в настоящее время рекомендован ОФС ГФ XIII для оценки качества РМ фармацевтического назначения [93].Определение БАВ. Комплекс БАВ РМ, среди которых важнейшими являются каротиноиды, фосфолипиды, токоферолы, биофлаваноиды, полиненасыщенные ЖК, фитостерины исквален, определяют биологическую ценность масла.

Физико-химические показатели, по которым оценивают в настоящее время качество РМ, недостаточно полно характеризуют их фармакологические свойства и не дают информации о качественном и количественном составе БАВРМ. До недавнего времени НД не нормировала содержание основных БАВ РМ [90].

Однако,именно они обусловливают их терапевтическую эффективность и безопасность [217]. В ОФСГФ XIII «Масла жирные растительные» появился раздел «Количественное определение». Различные ГОСТы содержат нормативы только на состав ЖК в РМ [44,46, 52,71,74,79-81,277,333].Качественная идентификация основных групп БАВ РМ описана в литературе [333,363,365] и представлена в таблице 29.С помощью качественных реакций можно проводить определение не только жирорастворимых БАВ в РМ, но и устанавливать вид РМ (таблица 30).С применением метода дифференциальной спектрофотометрии исследованы спектральные характеристики РМ, а также изучено влияние на них растворителей [126]. В результате выявлены характеристические полосы поглощения, характерные для РМ и МЭ в органическихрастворителях, обусловленные присутствием в них различных групп БАВ.

Выявленные полосыпоглощения могут быть обусловлены присутствием: максимумы поглощения при 420, 440-456,472-490 нм близки к спектрам каротиноидов и ЖК; 320-360 нм – фенольные соединения; поло-55сы в диапазоне 539-542 нм – характерны для АЦ; 653-672 нм – хлорофилловые соединения[126].Таблица 29№п/пТокоферолыК 0,5 мл РМ добавляют 0,5 мл конц. В течение 1 мин. на границе раздела фаз масазотной кислотыло – кислота появляется широкое кольцо коричнево-красного цвета.

При взбалтываниивсе масло окрашивается в оранжево-красныйцветВитамины группы К (в присутствии витаминов группы А и Е)К 1-2 мл РМ добавляют несколько кри- Появляется темное красно-коричневое окрасталликов резорцина и 3-4 капли конц. шивание (для светлых масел) или темно-синеесерной кислоты(для темно-окрашенных масел)КаротиноидыК 0,5 мл РМ прибавляют 1-2 каплиПоявляется темно-синее окрашиваниеконц. серной кислотыК 0,5 мл РМ добавляют 1,0 мл конц.

При перемешивании в течение 1 мин. появляазотной кислотыется темно-зеленое окрашивание, переходящее в темно-вишневое при стоянии в течение10 минФЛ, содержащие аминогруппыК 1-2 мл РМ в фарфоровую чашку доПоявляется окаемка красно-фиолетовогобавляют 5 мл ацетона, несколько крицветасталликов нингидрина и выпариваютна кипящей водяной бане до сухогоостатка1234№п/п12345Качественные реакции на основные группы БАВ в РМ и МЭРеактивы и условия реакцииАналитический эффектТаблица 30Качественные реакции для установления вида РМ [333]Вид РМРеактивы и условия реАналитический эффектакцииМиндальное масло5 мл РМ взбалтывают сПолучается масса слабо1 мл смеси равных объжелтого цветаемов воды, конц.

серАбрикосовое маслоПолучается масса красногонойкислотыидымяцветаПерсиковое маслощей азотной кислотыКунжутное маслоПолучается масса бурогоцветаХлопковое маслоАнализ ЖК триацилглицеролов. Традиционным направлением для оценки качества жиров и РМ и МЭ является изучение их полного компонентного состава и количественного определения в РМ триацилглицеридов, составляющих более 90% липидных комплексов.

Для разделения ЖК, их эфиров и других производных (амидов) наиболее эффективными и доступными внастоящее время методами являются такие, как ГЖХ; ТСХ; обращенно-фазой вариант ВЭЖХ.56ЖК в основном разделяют методом ГЖХ после их перевода чаще в метиловые или реже бутиловые эфиры [86].При исследовании ЖК-состава особенное внимание уделяют установлению присутствиятранс-изомеров ЖК. ГЖХ позволяет успешно разделять транс- и цис- изомеры ЖК, используяопределенные хроматографические колонки с сорбентами. Так, метиловые эфиры элаидиновойи олеиновой кислот можно легко разделить на длинных колонках (в м) с 15% OV-275. Дляидентификации ПНЖК авторы [269,365] предлагают использовать каталитическое гидрирование, как простой и удобный метод.

Сравнивают ГЖХ-хроматограммы до и после насыщениядвойных связей водородом (исчезают пики, соответствующие ПНЖК, а увеличиваются пики,соответствующие тем же насыщенным ЖК). Предложена модернизированная методика определения облепихового масла в препаратах «Олазоль», «Статизоль», «Облекол» и др.

методомГЖХ. Содержание данного масла в них составляет всего от 1% до 3% и судить о подлинности иколичестве только по сумме каротиноидов представляется маловероятным. Поэтому присутствие облепихового масла в ЛП устанавливается путем идентификации пальмитиновой кислотыметодом внутреннего стандарта (миристиновя кислота). В отличие от традиционных методов,абсолютное содержание облепихового масла рассчитывается по отношению к сумме всех ЖК свведением соответствующих калибровочных коэффициентов. Количественное соотношениеолеиновой кислоты к пальмитиновой (должно быть не менее 0,9), что достоверно характеризуетприсутствие облепихового масла. Сводные данные по составу ЖК в различных РМ фармацевтического назначения обобщены в таблице 31.Таблица 31№п/п1234567891011Состав ЖК различных РМ фармацевтического назначения [333]РМОсновной типСодержание и состав ЖК, %жировнасыщенныемононенаПНЖКсыщенныеОливковоемононенасы15-1762-6622-28щенныеРапсовое2-628-5422-32Хлопковоеполиненасы22-2530-3540-48щенныеПальмовоенасыщенные44-5740-45До 9КокосовоеДо 905-101-2Кукурузноеполиненасы10-1430-4948-56щенныеАрахисовоемононенасы13-2250-6313-33щенныеПодсолнечноеполиненасы6-1224-4046-63щенныеСоевое12-1423-2954-63Кунжутное10-1635-4837-48Льняное9-1113-2959-9157Триглицеридный состав РМ.

Для получения данных о триглицеридном составе РМ всечаще применяют обращено-фазовый вариант ВЭЖХ с рефрактометрическим и УФ-детекторами[4,102,109,231,333].Поскольку обнаружение по поглощению в УФ-области спектра не позволяет уловитьмалые количества ЖК, были разработаны методы получения производных с сильным поглощением в УФ-области. Показано, что метод ВЭЖХ может быть использован также для количественного определения суммы триглицеридов в РМ различных типов [4,102,109,231,333].