Диссертация (Теоретические и методологические подходы к стандартизации и оценке качества лекарственного растительного сырья и масляных экстрактов на его основе), страница 13

В работе [102] авторами использован поливолновый режим детектирования, позволяющий контролировать содержание не только триацилглицеридов, но и ЖРВ, АО и других соединений при254-270 нм (рис. 4).Рис. 4. Вид хроматограммы разеления БАВ облепихового масла методом ВЭЖХ, зарегистрированная при 3-х длинах волнМетодами ВЭЖХ и ХМС получены хроматографические профили ЖК, токоферолов,стеринов и монотерпенов, определены основные показатели, характеризующие качество, пищевую и биологическую ценности РМ, обогащенных БАВ.Для исследования ЖК возможно также использование бумажной хроматографии и ТСХ.Так, например, для разделения ЖК масла семян бузины черной, снежной ягоды, жимолости монетолистной и абелии щитковидной была использована техника ТСХ на силикагеле в системепетролейный эфир-диэтиловый эфир-ледяная уксусная кислота (9:1:0,1) [269].В ЕФ [400-403] изложен доступный, простой и экспрессный метод определения вида РМ методом ТСХ.

В качестве сорбента используется модифицированный С18 силикагель для ВЭТСХ. Пробудважды хроматогафируют сначала в первой системе (высота пробега – 0,5 см) – диэтиловый эфир, азатем двукратное элюирование во второй системе (высота пробега – 8 см) – смесь метиленхлорид:уксусная кислота: ацетон (20:40:50). Объем пробы - 1 мкл раствора 20 мг масла в 3 мл метиленхлорида. Детекция пластин – 10 % спиртовый раствор ФМК.

Типичный вид получаемых хроматограммРМ приведен на рис. 5.58Анализ отечественной литературы позволил обнаружить работу [5], в которой авторы предлагают также идентифицировать РМ и прогнозировать их свойства по видам хроматографических профилей токоферолов, остатков ЖК и стеринов.ЖК, входящие в состав триацилглицеринов, могут быть определены с использованиемферментативных методов [269].Рис. 5. Типичный вид хроматограммы для идентификации вида РМ (1.

Масло кукурузное; 2. Маслоарахисовое; 3. Масло какао; 4. Сезамовое масло; 5. Масло льняное; 6. Масло миндальное; 7. Масло оливковое;8. Масло рапсовое; 9. Масло рапсовое (без кислоты эруковой); 10. Соевое масло; 11. Масло подсолнечное)[400-403]Анализ каротиноидов в РМ. В составе липофильных БАВ растительных объектов обнаружено более 80 представителей группы каротиноидов. К ним относятся β-каротин, его природные (структурные и пространственные) изомеры, алифатический изомер каротина — ликопин, а также значительное количество каротиноидов, являющихся окси- и оксопроизводнымиструктурных изомеров β-каротина [269].Суммарное содержание каротиноидов в РМ, в пересчете на β-каротин, как правило, является единственным критерием стандартизации РМ по содержанию БАВ [25,146,147,180,351,354], и определяется с помощью спектрофотометрии в видимой области.

Метод включен в ФСна масло шиповника, облепиховое масло и различные ЛС на его основе. Однако данный подходне дает представления о присутствии отдельных компонентов в сумме.М.С. Цветом разработана методика разделения каротиноидов на колонках с сорбентом, иза все последующие годы она подвергалась различному усовершенствованию. На сорбентах свысокой полярностью лучше разделяются группа каротинов. Ксантофиллы же хорошо элюируются с адсорбента органическими растворителями с высокой элюирующей способностью(метанол, этанол).

Колоночный вариант хроматографирования позволяет не только разделятьсложные смеси каротиноидов на индивидуальные БАВ, но и подготовить вытяжки для последующего анализа другими методами, например методом ТСХ [269].59При анализе веществ, относящихся к группе каротиноидов, большая часть публикацийпосвящена использованию ТСХ. Варьируя различными типами сорбентов и подвижных фаз,авторы часто добиваются хороших результатов разделения каротиноидов методом ТСХ. Сприменением в качестве элюента малополярной системы гексан-бензол (19:1) проведено разделение каротиноидов в облепиховом масле и масле шиповника [370].Большие возможности в области идентификации и количественного определения каротиноидов в РМ открываются при использовании ВЭЖХ. Метод ВЭЖХ широко применяетсядля разделения и количественного определения α- и β-каротинов, ликопина, криптоксантина,лютеина, зеаксантина.

Наряду с ВЭЖХ [428], широкое применение нашли также ГЖХ и ГХ/МС— уникальные методы анализа каротиноидов и ретинолов. Они позволяют не только быстроидентифицировать вещества, но и определить их молекулярную массу, получать информацию,касающуюся стереохимии первоначального каротиноида [269,333].Анализ стеринов РМ. К неомыляемой фракции жирных РМ также относятся высокомолекулярные циклические спирты, имеющие стероидный скелет – стерины.

В действующей НД на жирные маслане регламентируется компонентный состав стериновой фракции. Стерины с трудом поддаются разделению, что, в частности, связано с высоким содержанием гомологов в данном классе соединений. Методикам хроматографического анализа стеринов в маслах посвящен ряд работ. В зарубежной печати опубликованы работы обзорного характера, посвященные анализу растительныхстеринов методом ГХ. В ГФ Украины 1 изд. [15] и ЕФ [400-403] присутствует ОФС «Стерины вжирных маслах», которая описывает методику определения компонентного состава стериновойфракции в различных РМ и количественного содержания стеринов методом ГХ.

Методика основана на получении неомыляемого остатка анализируемого масла, далее из неомыляемогоостатка методом ТСХ выделяют стериновую фракцию, компонентный состав которой определяют методом ГХ после обработки силилирующим реактивом [400-403].Для разделения сложных смесей растительных стеринов часто используются методикиВЭЖХ. Высокой разрешающей способностью обладает адсорбционная хроматография на силикагеле, проводимая в режиме изократического, градиентного или рециклического элюирования[269].Анализ токоферолов РМ.

Эти вещества экстрагируют каким-либо органическим растворителем (гексаном, диэтиловым, эфиром, дихлорметаном), а затем путем гидролитическойобработки сырого экстракта получают содержащую витамин Е фракцию неомыляемых липидов, которые можно сравнительно легко разделить, используя разнообразные хроматографические методы. ТСХ нашла широкое применение как метод определения витамина Е во многихобразцах [174,237,238]. Определение витамина А и Е в РМ осуществляют с применением аттестованной методики ГОСТ 30417 [68], в соответствии с которой выделяют из масел неомыляе-60мую фракцию БАВ, с последующим разделением витаминов в тонком слое сорбента, их элюированием и количественным анализом на фотоэлектроколориметре после добавления цветореагентов – реактива Эммера-Энгеля и хлорида сурьмы (III) для токоферолов и ретинола соответственно.

Разработаны многочисленные хроматографические методики, позволяющие проводитьопределение жирорастворимых витаминов без процедуры омыления [12,237,238].С целью количественной оценки содержания токоферолов в растительных объектахбольшинство авторов используют ГЖХ. Наиболее приемлемые результаты по разделению позиционных изомеров β- и γ-токоферолов были получены с применением В Э Ж Х [ 1 3 4 , 1 5 2 ,1 5 8 , 1 7 3 , 1 7 5 , 2 6 9 , 3 4 8 , 3 9 3 , 4 1 5 , 4 2 5 , 4 2 7 ] .

Основные методы определения токоферолов вРМ и МЭ проанализированы и обобщены в работах [174,290].Анализ фосфолипидов (ФЛ). Липиды семян, как известно, подразделяются на несколько классов, таких как нейтральные липиды, ФЛ, гликолипиды [9]. Для ТСХ основных типов ФЛРМ в качестве элюентов чаще всего применяют смеси, состоящие из хлороформа, метанола иводы, модифицированные добавками кислоты уксусной или растворами аммиака. Прекрасногоразделения ФЛ при одномерной ТСХ можно добиться, применяя в качестве подвижной фазысистему хлороформ-метанол-раствор аммиака (13:5:1 или 13:7:1).

Эта система ширококо используется в анализе не только ФЛ в РМ, но и в животных тканей и синтетических образцах.Смеси хлороформ-метанол-4 М раствор аммиака (13:7:1) или хлороформ-метанол-7 М раствораммиака-вода (26:14:1:1) наиболее часто применяются в двумерном варианте ТСХ. При обработке хроматограмм 5% спиртовым раствором ФМК образуются синие пятна на желтом фонепри наличии фосфатидилхолина. Все ФЛ, содержащие NH2-группу (лизофосфатидилэтаноламин, фосфатидилэтаноламин, фосфатидилсерин), идентифицируются в виде розовых пятен набелом фоне после обработки хроматограмм 0,3% раствором нингидрина в н-бутаноле, содержащем 3% уксусную кислоту. Количественное определение ФЛ в РМ аттестованным методомсводится к измерению содержания фосфата, входящего в состав этих соединений [245,269] впересчете на стеароолеолецитин или фосфорный ангидрид.Последние достижения в области ВЭЖХ ФЛ продемонстрировали большие возможностиколонок с кремниевой кислотой и эффективность проводимого на них разделения в сочетании сколичественной оценкой.

Однако количества веществ, которые можно разделить с помощьюэтого метода, сравнительно невелики, поэтому он вряд ли найдет применение в рутинных анализах [9,269,333].Определение антиоксидантов (АО) в РМ. Одним из обязательных требований к частной ФС на конкретное РМ является указание названия введенного экзогенного АО, определение его подлинности и количественного содержания [233,410]. Для ГФ ХIII издания подготовлен проект ОФС, в который включены методики определения каче ственного со-61держания АО в РМ. Проект ОФС составлен на основе статей ГФ Республики Казах стан,ГФ Республики Беларусь и ЕФ [400-403]. Испытания проводят методом ТСХ.