Диссертация (Теоретические и методологические подходы к стандартизации и оценке качества лекарственного растительного сырья и масляных экстрактов на его основе), страница 14

Идентифицируютнеполигидроксиантиоксиданты(НПГАО),полигидроксиантиоксиданты(ПГАО) и АО, не растворимые в метиловом спирте. Условия проведения анализа пре дставлены в таблице 32.Таблица 32Условия проведения ТСХ-анализа АО в РМ [233,333]Тип АОПробоподготовкаУсловия ТСХ-анализаНПГАОПространРаствор РМ в метаПластинки с силикагелем G;ственно заноледвумерное хроматографировамещенныение: элюент 1 – хлороформ (выалкилфенолысота пробега 10 см), элюент 2 бензол (высота пробега 10 см).Если на линии старта обнаруживаются синие пятна, то идентифицируют ПГАОПГАОНордигид- Раствор РМ в метанолеПластинки с силикагелем G;рогваяретоваяэлюент: ледяная уксусная кислокислота и алта-бензол-петролейный эфиркилгаллаты(30:60:60)АО, не растворимые в метиловом спиртеα-токоферол, Неомыляемые АО расПластинки с силикагелем G;бутилгидрокси- творяют в петролей- двумерное хроматографирование:толуолном эфире, получен- элюент 1 – хлороформ, элюент 2 ные после кипячения в бензол.

Если на линии старта обтеченинаруживаются синие пятна, тоидентифицируют ПГАОПроявитель20% спиртовыйраствор ФМК20% спиртовыйраствор ФМК0,01% спиртовыйраствор 2,6дихлорхинонхлоримидаВид получаемых хроматограмм приведен на рис. 6. Идентификация АО ос уществляется путем сравнения положения пятен на хроматограммах испытуемого раствора со свидетелями.Определение антиоксидантной активности (АОА) РМ и МЭ фармацевтическогоназначения.

Известно, что МЭ из растительного сырья содержат целый комплекс БАВ, обладающих АОА (токоферолы, каротиноиды, фосфолипиды, флавоноиды и др.). В литературе описано определение АОА масла из зародышей пшеницы на модели Fe2+-индуцированного перекисного окисления липидов мембран липосом методом хемилюминесцентного анализа, а такжеспектрофотометрически по накоплению продуктов, реагирующих с 2-тиобарбитуровой кислотой [6].

Показано, что мембранозащитное действие масла обусловлено содержанием токоферолов, обрывающих цепь АО [390,410,430]. Данная методика длительна, трудоемка и требуетспециального оборудования, а также больших затрат реактивов и материалов.62аба. Вид хроматограмм при идентификации НПГАО и АО, не растворимых в метиловомспирте (1 – гваяковая смола; 2 – 3-(1,1-диметилэтил)-4-метоксифенол; 3 – 2-(1,1диметилэтил)-4-метоксифенол; 4 – 2,2,5,7,8-пентаметил-6-хроманол; 5 – тетраэтилтиурам дисульфид; 6 - α-токоферол; 7 – дибутилгидроксианизол; 8 – бутилгидрокситолуол)б.

Вид хроматограмм при идентификации ПГАО (1 – окрашенная зона на старте; 2 – бутилированный гидроксианизол; 3 - гваяковая смола; 4 - нордигидрогваяретовая кислота; 5– метилгаллат; 6 – этилгаллат; 7 - пропилгаллат; 8 – октагаллат; 9 – декагаллат)Рис. 6 а и б. Вид хроматограмм при идентификации АО в РМ (а,b и с – пятна на старте;А – желтый; В - красный; С – синий).Определение показателей чистоты и безопасности применения РМ. В соответствии сНД РМ и МЭ подвергаются анализу на степень чистоты по следующим показателям: наличие мыла (качественная проба); присутствие воска, парафина, перекисей, альдегидов и смоляных масел; содержание влаги илетучих веществ; присутствие воды, белков и посторонних масел [43,47,61,361]. Для косточковых маселпроводят испытание также на цианиды и синильную кислоту.

Основные требования в отношении степеничистоты РМ, обобщены в таблице 33.Таблица 33Основные требования в отношении степени чистоты РМ фармацевтического назначения [43,47,61,90,93,400403]№Условия реакции и реактивыЭффект реакциип/п123Парафин, воск, смоляные масла11 мл РМ + 10 мл 0,5 М этанольного раствора КОН, нагревают при непрерыв- Раствор должен оставатьсяпрозрачнымпри добавлении 25ном взбалтываниимл водыВода и белки21 мл РМ + 2 мл бензинаРастворы прозрачные, безосадкаМыла для РМ, не используемых для приготовления инъекционных растворов3В конической колбе объемом 250 см3 смешивают 50 см3 дистиллированной Раствор не должен приобретатьрозовое окрашиваниеводы с несколькими каплями фенолфталеинаи 10 см3 испытуемого РМ и6314567832кипятят втечение 5 – 10 мин.

По окончании кипячения добавляют ещене- (отсутствие мыла или его содержание не более 0,01 %)сколько капель фенолфталеинаМыла для РМ, используемые для приготовления инъекционных растворовОстаток не должен превышать5 мл РМ сжигают в фарфоровом тигле и прокаливают0,01%К остаткуприбавляют 1 мл воды и при легкомнагревании добавляют 2 капли Жидкость не должна окрашиваться в стойкий розовый цвет.фенолфталеинаСодержание мыла в масленеболее 0,001%Примеси мыла в РМ (по ЕФ)10 мл РМ растворяют в смеси 10 мл ацетонаи 0,3 мл воды, добавляют 0,05 мл Добавление не более 0,1 мл 0,01М раствора HCl должно вызы0,04% спиртового раствора бромфенолового синеговать изменение синей окраскина желтуюПерекиси, альдегиды1 мл РМ взбалтывают в течение 1 минуты с 1 мл конц.

HCl, Не должно появлятьсяприбавляют 1 мл раствора флороглюцина в эфире (1:1000) розового или красногои снова встряхиваютокрашиванияЦианиды, синильная кислота5 мл РМ + 5 мл разведенной H2SO4. Колбу неплотно закрыНе должно навают корковой пробкой со щелью в нижней части пробки по блюдаться синего илидиаметру, в которую вставляютголубогополоску фильтровальной бумаги шириной 1 см и такой дли- окрашивания жидконы, чтобы нижний край полоски находился на 1 —1,5 см надсти или бумагиуровнем жидкости.

Нижний конец полоски смачивают 1каплей раствора NaOH. Колбу закрывают пробкой со вставленной полоской и ставят на горячую водяную баню на 15минут. Затем колбу снимают, кончик полоски, смоченныйраствором NaOH, отрезают и помешают в фарфоровую чашку. На бумагу в чашке наносят 1 каплю насыщенного раствора FeSO4 и нагревают на водяной бане 1 минуту. На бумагу в чашке наносят 1 каплю 5% раствора FeCl3 и 1 каплюконцентрированной HClМинеральные масла4 г РМ нагревают на водяной бане в колбе с обратным хоРаствор должен осталодильником с 50 мл 0,5 М спиртового раствора KOH доваться прозрачнымполного омыления. К 20 мл омыленной жидкости прибавляют 40 мл теплой водыОсновными тяжелыми металлами (ТМ), нормируемыми в РМ, согласно ОФС ГФ XIII[93], являются свинец, мышьяк, кадмий и ртуть.

В соответствующих ГОСТах на отдельные виды РМ дополнительно определяют железо и медь. Допустимые нормы по содержанию тяжелых металлов для РМ пищевого назначения и БАД на основе РМ приведены в таблице 34.Нормирование радионуклидов (РН) и остаточных пестицидов (ОП), а также веществканцерогенного действия – бензопиренов и микотоксинов (МТ) проводится только для РМ,контролируемых ГОСТами. МТ в РМ определяют в соответствии с требованиями СанПин [244]64преимущественно методами иммуноферментного анализа (ИФА) и ВЭЖХ.

В некоторых НДиспытание на присутствие МТ в РМ проводят по биотесту с инфузориями [333]. Для здоровьячеловека одни из наиболее опасных токсинов – афлатоксин, содержание которого должно бытьне более 0,005 мг/кг для нерафинорованных РМ и масличных культур, и охратоксин, содержание которого не нормируется [244].Таблица 34Допустимые нормы для пищевых РМ и БАД на основе РМ, [93,244,400-403]№ п/пТяжелый металлДопустимое содержание (не более,мг/кг)1Pb0,1 (арахисовое 0,2)2Cd0,053Hg0,034As0,15Cu0,56Fe5,07Ni (в арахисовом гидрогенизирован1,0ном масле по ЕФ)Микробиологическая чистота РМ.

Определение проводят в соответствии с требованиями ОФС «Микробиологическая чистота» (категория 3А) для фармакопейных масел. В 1 г испытуемого масла допускается наличие не более 1000 бактерий и 100 дрожжевых и плесневыхгрибов (суммарно). Не допускается наличие бактерий Escherichia coli [93]. Для МЭ фармацевтического назначения предельно допустимое содержание микрофлоры должно соответствовать требованиям ОФС «Экстракты» и «Микробиологическая чистота».

Для оценкикачества МЭ, относящихся к БАД, по данному показателю используются нормативы, изложенные в СанПин 2.3.2.1078-01 [244] для РМ и БАД на основе РМ (таблица 35).Таблица 35Нормативные показатели микробиологической чистоты для МЭ и масел-экстрагентов,применяемых в фармации [244]Объект исследованияРМ и БАД на основе РМ пищевогоРМ для наружного примененияназначения12Количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов,КОЕ/г, не более1·104Масса продукта (г), в которой не допускаются бактерии группы кишечной палочки(коли-формы)0,0010,01Масса продукта (г), в которой не допускается золотистый стафиллококкМасса продукта (г), в которой не допускаются патогенные микроорганизмы (в т.ч.сальмонеллы)25256512Дрожжи, КОЕ/г, не более1·10350Плесени, КОЕ/г, не более1·102КОЕ – колоний образующих едениц.50Хранение РМ.

В результате длительного хранения на свету, при повышенной температуре или под действием микроорганизмов РМ портятся (прогоркают), что сопровождаетсяухудшением органолептических свойств, а также повышением КЧ, ПЧ, АЧ, ИО и снижениемвеличин ЙЧ, ПП и ЧО [359]. Установлено, что окисление БАВ РМ происходит задолго до изменения данных физико-химических показателей [280,333,365].Продукты окисления ЖК, низкомолекулярные ЖК и их глицериды, продукты распадакаротиноидов, стеринов, витаминов, ФЛ придают РМ неприятный запах и вкус [280,359].

Дляпредотвращения прогоркания РМ хранят в герметичной упаковке, максимально наполненной, в сухом,прохладном затемненном месте. Срок годности РМ зависит от содержания в нем ЖК и витаминаЕ. РМ с высоким содержанием насыщенных ЖК сохраняются дольше масел, у которых высокоесодержание ненасыщенных ЖК. Содержание витамина Е также увеличивает срок годностимасла [280,414].ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ 11. Анализ данных литературы позволяет сделать следующие выводы. Титриметрические методы рекомендованы НД и широко распространены для количественного определения БАВ вфармацевтических субстанциях или однокомпонентных ЛП. Поляриметрический метод даетважную информацию о качестве индивидуальных субстанций оптически активных веществ, ноне пригоден для анализа суммы оптических изомеров БАВ без предварительного их разделенияна отдельные компоненты.2.