Диссертация (Разработка инъекционных лекарственных форм цифетрилина), страница 14

Электронная микроскопия липосом цифетрилина до (А) и после (Б)лиофилизации.853.2.6. Обобщенная технология получения и состав ЛЛФ-лиоцифетрилинаВ результате проведенных исследований разработана технологияполученияЛЛФ-лиоцифетрилина,котораявключаетследующиетехнологические стадии:1. Получение липидной пленки.Берут навески липидных компонентов ЛФ – ЯФХ, холестерина иПЭГ-ДГФА и растворяют в хлороформе.

В отдельной емкости готовятхлороформный раствор активной субстанции цифетрилина. Полученныерастворы компонентов ЛФ смешивают, фильтруют через нейлоновыймембранный фильтр с размером пор 0,22 мкм и переносят в круглодоннуюколбу. В таблице 16 приведены массы навесок компонентов ЛЛФцифетрилина и объем хлороформа, необходимые для приготовленияхлороформного раствора при использовании в технологическом процессекруглодонной колбы вместимостью 2 л.Таблица 16.Состав хлороформного раствора компонентов ЛЛФ цифетрилина для получениялипидной пленки в круглодонной колбе вместимостью 2 лКомпонент ЛФМасса/объём компонентаЯФХ1591 мгХолестерин160 мгПЭГ-ДГФА20 мгЦифетрилин29 мгХлороформ30–35 млХлороформный раствор на роторном испарителе отгоняют вусловиях низкого давления (150–200 мбар) при температуре выше Тф.п.ЯФХ 37 ± 1°С и скорости вращения ротора 75–110 об/мин до полученияоднородной полупрозрачной липидной плёнки.

Для удаления остаточногорастворителя пленку досушивают под вакуумом (120–150 мбар) не менее50 мин.2. Гидратация липидной пленки.86Для получения 12 % раствора криопротектора к навеске сахарозыдобавляют воду для инъекций, перемешивают и фильтруют черезнейлоновыймембранныйфильтрсразмеромпор0,22мкм.Профильтрованным раствором сахарозы гидратируют липидную пленку сполучением дисперсии МСЛ цифетрилина с концентрацией ЛВ 1 мг/мл.3. Фильтрация/экструзия дисперсии МСЛ цифетрилина.ПолученнуюдисперсиюМСЛцифетрилинафильтруютподдавлением (0,5–0,8 бар) последовательно через нейлоновые мембранныефильтры с диаметром пор 1,2, 0,45 и 0,22 мкм.

Затем дисперсиюэкструдируют через поликарбонатные фильтры с размером пор 0,2 мкм 5раз.4. Дозирование и лиофилизация липосомальной дисперсии.Дисперсию ОСЛ цифетрилина дозируют во флаконы по 6 мл ипомещают в камеру сублимационной сушки для получения лиофилизатаЛЛФ.Технологическая схема получения липосомального цифетрилинапредставлена на рисунке 16.Для отработки технологической схемы получения липосомальногоцифетрилина и выполнения комплекса химико-фармацевтических ибиологических исследований были наработаны экспериментальные сериипрепарата «Цифетрилин липосомальный, лиофилизат для приготовлениядисперсии для инъекций 6,0 мг» (Рисунок 15), для которого установленследующий состав:Состав (на 1 флакон)ЦифетрилинЯФХХолестеринПЭГ-ДГФАСахарозаИтого6,0 мг318,0 мг32,0 мг4,0 мг707,0 мг1067 мгРисунок 15.

Внешний вид флакона с препаратом «Цифетрилин липосомальный,лиофилизат для приготовления дисперсии для инъекций 6,0 мг»87ВР-2.1. Подготовка воздухаВР-2.2. Подготовкадезинфицирующих имоющих растворовВР-2.3. Подготовкапомещений иоборудованияВР-1. Подготовкаводыв канализациюПромстокВР-2. Санитарнаяобработкапроизводствав атмосферуПотериВР-2.4. Подготовкатехнологической одеждыВР-2.5. Подготовкаперсоналас ВР.1.ВР-3.1. ПодготовкафлаконовВР-3.2. Подготовка пробокв канализациюВР-3. ПодготовкатарыВР-3.3.

ПодготовкаколпачковПромстокНа свалкуОтходыТП-4.1. Приготовлениехлоформного растворацифетрилинаТП-4.2. Получениелипосомальной дисперсиицифетрилинаТП-4.2. Фильтрациялипосомальной дисперсиицифетрилина и розлив вофлаконыВ канализациюТП-4. Получениестерильнойлипосомальнойдисперсиицифетрилина; Кт,КхПотериНа сжиганиеОтходыТП-5.1. ЗамораживаниеТП-5.2. СублимационнаясушкаНа сжиганиеОтходыТП-5.

Получениелиофилизата; Кт,КхТП-5.3. Обжим флаконов ссублиматом колпачкамиУМО-6.1. Просмотрготовой продукцииУМО-6.2. Маркировка иупаковкаВ канализациюПотериНа сжиганиеУМО-6. Упаковкаи маркировкаготового продукта;Кт, КхОтходыВ канализациюПотериНа склад готовой продукцииОБО. Обезвреживаниеотходов производстваРисунок 16.

Технологическая схема получения ЛЛФ-лио цифетрилина88ЗАКЛЮЧЕНИЕВ результате проведенных исследований установлен оптимальныйсостав ЛЛФ цифетрилина. Из исследуемых моделей с приемлемымразмером везикул (180 ± 6 нм) и высоким количеством включенного ЛВ влипосомы (97 ± 1) для получения ЛЛФ был выбран состав 8 с молярнымисоотношениями компонентов цифетрилин/ЯФХ = 1 : 70 и ЯФХ/Хол/ПЭГДГФА = 1 : 0,2 : 0,014.Разработанацифетрилина.технологияполученияГидрофобнаяприродаинъекционнойсубстанцииЛЛФ-лиоцифетрилинаобуславливает технологические особенности получения его ЛЛФ.

Так настадии формирования липидной пленки субстанция растворяется ворганическом растворителе вместе с липидами, а полученную липиднуюпленку гидратируют раствором криопротектора – 12 % раствор сахарозы.Измельчениелипосомцифетрилинацелесообразнеепроводитьсприменением методов экструзии с использованием поликарбонатныхфильтров с размером пор 0,2 мкм или гомогенизации, что обусловленовысокойпроизводительностьюуказанныхметодов,сохранениемстабильности липосом и высокого процента включения активноговещества в липосомальный бислой. На этапе отделения не включенного влипосомы цифетрилина, учитывая нерастворимость данного вещества вводе,применяетсяметодфильтрации,которыйсочетаетсясостерилизацией липосомальной дисперсии с использованием нейлоновыхмембранных фильтров с размером пор 0,45 и 0,22 мкм.

Для стабилизации иповышения срока хранения ЛЛФ цифетрилина предложены условия еесублимационного высушивания. В качестве криопротектора выбранасахароза, вводимая в липосомальную дисперсию на стадии гидратациилипидной пленки в молярном соотношении сахароза/ЯФХ = 1 : 5 (12 %раствор сахарозы). Для лиофилизации липосомального цифетрилинацелесообразноиспользованиережимасостадией«быстрого»замораживания.

Представлены состав и технологическая схема полученияЛЛФ-лио цифетрилина.89Глава 4. Разработка методик качественного и количественногоанализа ЛЛФ и ЛЛФ-лио цифетрилина. Стандартизация ЛЛФ-лиоцифетрилина.4.1. Разработка методики тонкослойной хроматографии длякачественного анализа ЛЛФ и ЛЛФ-лио цифетрилинаДлякачественногоанализацифетрилинаивспомогательныхкомпонентов, входящих в состав полученной ЛЛФ и ее лиофилизата,применялиметодхроматографиивтонкомслоесорбентаилитонкослойной хроматографии (ТСХ).

Целью исследования по разработкеметодики ТСХ-анализа ЛФ цифетрилина являлся подбор условийхроматографирования,обеспечивающихэффективноеразделениекомпонентов смеси (цифетрилина, липидных компонентов и сахарозы).Для решения поставленной цели необходимо было решить следующиезадачи:• обобщить полученные результаты исследования и представить их ввиде методики ТСХ-анализа ЛЛФ и ЛЛФ-лио цифетрилина;• выбрать подвижную фазу (элюент) для хроматографическогоразделения анализируемых веществ;• определить предел обнаружения анализируемых веществ и провестиоценку пригодности выбранных хроматографических систем.Поскольку сахароза в отличие от цифетрилина и липидныхкомпонентов присутствует в ЛЛФ в значительно большем количестве иявляется водорастворимым соединением, хроматографический анализданного вспомогательного вещества проводили отдельно.ДляразработкиметодикиТСХ-анализаисследуемойЛФиспользованы хроматографические пластинки с силикагелем «Sorbfil»марки ПТСХ-АФ-А.904.1.1.

ТСХ-анализ цифетрилина и липидных компонентов ЛФМетодика ТСХ-анализа цифетрилина и липидных компонентов ЛФПриготовление исследуемого образца ЛФ цифетрилина.К 6 млсвежеприготовленной липосомальной дисперсии или регидратированнойЛЛФ-лио цифетрилина (содержимое флакона в 5,3 мл воды) добавляют 6мл спирта 95 % и перемешивают. В полученном образце концентрацияцифетрилина составляет 0,5 мг/мл.Приготовление стандартных образцов веществ-свидетелей (СОВС):СОВС-1 – спиртовой раствор цифетрилина 0,5 мг/мл.

1,0 мг цифетрилинарастворяют в 20 мл спирта 95 %.СОВС-2 – спиртовой раствор ЯФХ 26,5 мг/мл. 133,0 мг ЯФХ растворяют в5 мл спирта 95 %.СОВС-3 – спиртовой раствор холестерина 2,7 мг/мл. 27,0 мг холестеринарастворяют в 10 мл спирта 95 %.Подготовкахроматографическойкамеры.Вотдельнойёмкостисмешивают растворители, входящие в состав подвижной фазы, иполученную смесь переливают в хроматографическую камеру.