Диссертация (1141337), страница 13
Текст из файла (страница 13)
Можно получать ЛЛФ в асептическихусловиях, но это сложная и дорогостоящая процедура. В большинствеслучаев для липосомальных дисперсий применяют стерилизующуюфильтрацию через фильтры с размером пор 0,45 и 0,22 мкм.С целью подбора оптимального фильтрующего материала должныпроизводиться исследования, приводящие к минимальной сорбцииактивной субстанции и липосом; режим и способ фильтрации должныминимально влиять на стабильность липосом и не приводить к снижениюфармакологического действия получаемого препарата.
[7]. Как показалирезультаты исследований, экструзия дисперсии МСЛ цифетрилина снейлоновымифильтрамисразмеромпор0,45и0,22мкмиполикарбонатными фильтрами с размером пор 0,2 мкм включает в себя,во-первых, метод уменьшения диаметра везикул до получения ОСЛоптимального размера, во-вторых, отделение не включенной субстанции и,в-третьих, стерилизующую фильтрацию, обеспечивающая сохранениевысокого уровня инкапсулирования ЛВ в липидном бислое.783.2.5. Разработка технологии лиофилизации ЛЛФ цифетрилинаХранение ЛЛФ в жидком виде сопряжено с рядом проблем наиболеесущественнымиизкоторыхявляется:окислениеигидролизлипосомальных ФЛ, а также ряд физических изменений (агрегация,слияние и др.) в липосомальной дисперсии. В связи с этим существуетмножество способов предотвращения данных явлений [1].Поэтому следующим этапом технологии получения липосомальногопрепаратаявляетсялиофилизациялипосомальнойдисперсии.Лиофилизация или сублимационное высушивание является наиболеераспространенным направлением стабилизации липосомальной дисперсиифармакологически активных субстанций.Основными задачи разработки технологии лиофилизации ЛЛФцифетрилина являлись выбор криопротектора и режима сублимационнойсушки, которые бы обеспечивали получение лиофилизата надлежащегокачества, стабильного в течение длительного срока хранения.− Выбор криопротектора для лиофилизации ЛЛФ цифетрилинаОдним из наиболее важных факторов при лиофилизации являетсярациональныйвыборкриопротектора,которыйнедолжениметьэвтектические свойства, т.е.
не быть способным к кристаллизации призамерзании. Также существенное значение имеет правильное определениеэтапа для введения криопротектора (углеводов) в липосомы. Необходимоучитывать, что должны быть обеспечены условия создания защитнойсреды как внутренней, так и наружной поверхности липосом. Применениекриопротектора с более высокой температурой изменения матрицы имеетпреимущество, в том числе за счет ускорения первичной сушки [7]. Крометого, необходимо учитывать концентрацию криопротектора и липидов.В качестве криoпротекторов исследовали вещества из класса«углеводы»: моносахарид – глюкозу и дисахариды – лактозу, сахарозу итрегалозу. Криопротектор вводили в липосомальную дисперсию после79стадии измельчения липосом цифетрилина в различных молярныхсоотношениях ЯФХ/криoпротектор (Таблица 13).
В качестве контроляиспользовалиобразецлипосомальнойкриoпротектора.80дисперсиибездобавленияТаблица 13.Выбор криопротектора для лиофилизации ЛЛФ цифетрилина№образца123456789101112Средний размер липосом, нмМолярноесоотношение ЯФХ/КПСКП вдисперсии, %до лиофилизациипосле лиофилизации–1:31:41:51:61:81:101:21:31:41:51:2–45671013579125143±6131±7136±13131±5130±4133±4139±6122±2126±3136±7151±2121±61:371:415161314171819КПКонтрольГлюкозаЛактозаСахарозаТрегалозаКВП, %Регидратируемость(+/-)525±26203±22157±12174±21150±22130±7120±6142±10131±5126±2130±10163±209892929491969692осадокосадокосадок96++++++++++124±3141±597+9123±2139±1098+1:512124±2123±398+1:25124±2165±2095+1:37120±5151±2095+1:49126±3137±496+1:512120±4122±696+Примечания: ЯФХ – яичный фосфатидилхолин, КП – криопротектор, СКП – концентрация криопротектора81В ходе работы было получено и проанализировано 19 образцовлиофилизата по показателям «Внешний вид», «Регидратируемость»,«Размер липосом», «КВП».
Все образцы, за исключением контрольного,представляли собой сухую массу белого цвета. Было показано, что прирегидратации контрольного лиофилизата образуется густая комковатаядисперсия и отмечается значительное увеличение среднего размеравезикул преобладающей фракции после сублимационной сушки от 143 до525 нм. Также нарушение процесса регидратации отмечалось в образце сглюкозой в соотношении ЯФХ/криопротектор 1 : 3.Увеличениеразмеровлипосомвпроцесселиофилизациинаблюдалось в образцах лиофилизатов с глюкозой, вводимой в ЛЛФ всоотношении ЯФХ/криопротектор 1 : 4, 1 : 5 и 1 : 6, лактозой, вводимой всоотношенииЯФХ/криопротектор1:2,сахарозой,вводимойвсоотношении ЯФХ/криопротектор 1 : 2, 1 : 3 и 1 : 4, и трегалозой,вводимой в соотношении ЯФХ/криопротектор 1 : 2, 1 : 3 и 1 : 4.
Вероятно,что рост размера везикул в данных образцах обусловлен низкойконцентрациейнедостаточныйиспользуемыхпротективныйкриопротекторов,эффектнаобеспечивающихстадиизамораживаниялипосомальной дисперсии цифетрилина.При использовании лактозы в качестве криопротектора ЛЛФцифетрилина в концентрациях 7, 9 и 12 % обеспечивало сохранениеразмеров везикул, однако при регидратации лиофилизата и его разведениипо методике количественного анализа наблюдалось выпадение белогоосадка. Наличие осадка обусловлено медленным растворением указанноговещества в воде и его нерастворимостью в спирте 95 %, что затрудняетпроведениеколичественногоспектрофотометрическогоопределенияцифетрилина в ЛФ.Таким образом, по показателям качества «Регидратируемость» и«Размерлипосом»былиотобраныобразцылиофилизатовскриопротекторами глюкозой 10 и 13 %, сахарозой 12 % и трегалозой 12 %.82Данные образцы лиофилизатов далее сравнивали, исходя из физикохимических свойств веществ-криопротекторов, которые могут влиять натехнологический процесс получения и качество ЛЛФ-лио цифетрилина, атакже данные по уровню включения.
Глюкоза является бесцветнымкристаллическим веществом, хорошо растворимым в воде. Однако, вотличиеотсахарозыгигроскопичностью,чтоитрегалозы,неприемлемоглюкозаприобладаетдлительномвысокойхранениилиофилизата. Трегалоза имеет более низкую растворимость в воде, чемсахароза – 68,9 г/100 г воды против 200,0 г/100 г воды, соответственно.Кроме того, при использовании в качестве криопротектора 12 % растворасахарозы сохраняется исходный уровень включения цифетрилина влипосомах.На основании вышеизложенного, в качестве криопротектора длялиофилизацииЛЛФцифетрилинавыбранасахароза,вводимаявлипосомальную дисперсию в соотношении ФХ/криопротектор 1 : 5.− Выбор режима лиофилизации ЛЛФ цифетрилинаОт обоснованного режима сублимации зависит стабильностьлипосом, количество включенного в ЛЛФ и, наконец, размер липосом. Этотребует тщательного управления процессом дегидратации, так как процесслиофилизации включает замораживание препарата с последующимудалением воды, и возникает проблема, связанная с тем, что на стадиизамораживания и обезвоживания возможно физическое повреждениеструктуры липосомы.
[7]Процесслиофилизациилипосомобычновключает3этапа:замораживание дисперсии липосом, первичную сушку (сублимацию) ивторичную сушку (десорбцию). Замораживание является ключевойстадией этого процесса, определяющей формирование кристаллов льда иморфологиюзамороженногоматериала.Наоснованииэтого,мыисследовали 2 режима лиофилизации ЛЛФ цифетрилина – со стадиями«быстрого» и «медленного» замораживания, различающихся по скорости83процессаохлажденияпродукта.При«медленном»замораживаниииспользовали постепенное (ступенчатое) понижение температуры полок вкамере сублимационной сушки, при «быстром» – липосомальный препаратподвергали стремительному (быстрому) замораживанию (Таблица 14).Таблица 14.Характеристика стадий «медленного» и «быстрого» замораживания прилиофилизации ЛЛФ цифетрилина«Медленное»«Быстрое» замораживаниезамораживаниеОперацияТемпература, °СВремяТемпература, °СВремяУстановка флаконов спрепаратом на полки+(20–22)+(20–22)сублимационной сушки1 ч 20+(20–22) → -17мин1 ч 15-17 → -25минОхлаждение полок и+(20–22) → -452чпрепарата1 ч 20-25 → -35мин1 ч 20-35 → -45минВыдерживаниепрепарата при-453ч-453чминимальнойтемпературеДанные режимы лиофилизации ЛЛФ цифетрилина сравнивали путемоценки качества полученных лиофилизатов по следующим показателям:внешний вид, регидратируемость, размер везикул и КВП цифетрилина(Таблица 15).Таблица 15.Результаты анализа лиофилизатов, полученных при лиофилизации ЛЛФцифетрилина с использованием различных режимов замораживанияРежимлиофилизациис «медленным»замораживаниемс «быстрым»замораживаниемВнешнийвидлиофилизатаСухаяпористаямассабелогоцветаРазмер везикул, нмРегидратируемость+/-долиофилизациипослелиофилизацииКВП, %+164 ± 12170 ± 797,0 ± 1,0+171 ± 10172 ± 897,0 ± 1,084Способ замораживания не влияет на показатели качества конечногопродукта, что было выяснено в ходе анализа полученных данных и обарежима дают возможность получить равноценные образцы ЛЛФ-лиоцифетрилина.
По внешнему виду полученные лиофилизаты представлялисобойсухуюпористуюмассубелогоцвета,котораялегкорегидратировалась с образованием липосомальной дисперсии белого цвета.Режим замораживания не влиял на включение цифетрилина и размервезикул после лиофилизации – в обоих случаях КВП находилась на уровне97 %, а средний диаметр липосом составил около 170 нм.С учетом полученных результатов, а также на основании того, чторежим с «быстрым» замораживанием требует меньших затрат времени исоответственно электрической энергии, целесообразно использованиеданного режима для получения стабильной ЛФ цифетрилина.На микрофотографии, представленной на рисунке 14, видно, чтолипосомы, полученные с использованием разработанной технологиилиофилизации после регидратации имеют такую же округлую форму как идо сублимации.АБРисунок 14.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
