Диссертация (1141337), страница 12
Текст из файла (страница 12)
Это достигается путем длительного досушивания сформированнойпленки под вакуумом до постоянной массы. В ходе экспериментаустановлено, что оптимальный период времени для сушки липиднойпленки с цифетрилином при значении вакуума 120–150 мбар составляет неменее 50 мин (Таблица 7).69Таблица 7.Потеря в массе липидной пленки с цифетрилином в процессе сушкиМасса содержимого колбы, гВремя сушкиПотеря вплёнки, минОпыт 1Опыт 2Опыт 3массе, %01020304050602,508 ± 0,0071,866 ± 0,0041,798 ± 0,0041,784 ± 0,0021,780 ± 0,0021,783 ± 0,0031,787 ± 0,0022,751 ± 0,0062,086 ± 0,0031,826 ± 0,0021,799 ± 0,0021,799 ± 0,0021,806 ± 0,0021,806 ± 0,0022,393 ± 0,0061,790 ± 0,0051,781 ± 0,0021,777 ± 0,0031,771 ± 0,0021,780 ± 0,0021,777 ± 0,00325,0 ± 1,00,5–12,50,2–1,50,2–0,30,00,03.2.2.
Гидратация липидной пленкиПосле досушивания проводят диспергирование (гидратирование)полученной липидной пленки. Именно на данном этапе происходитобразованиеМСЛи«включение»гидрофобногоцифетрилинавлипосомальный носитель путем встраивания его в липидный бислой.Эффективность включения во многом зависит от химических свойств ЛВ.Учитывая коэффициент распределения цифетрилин в липосомальномбислое, можно добиться высокой степени его включения и стабильногоудерживания в двойном слое липидов путем подбора оптимальногосоотношения препарат/липид [8].В качестве растворителей для гидратации липидной пленки сцифетрилином исследовали воду для инъекций и раствор криопротектора(сахарозы).Согласнорезультатам,представленнымвтаблице8,установлено, что оптимальным растворителем для получения дисперсииМСЛ цифетрилина является 12 % раствор сахарозы.№12Таблица 8.Выбор растворителя для получения дисперсии МСЛ цифетрилинаРазмер липосом, нмрНРастворительКВП, %после гидратации после экструзии дисперсииВода для инъекций691 ± 25175 ± 66,3 ± 0,297 ± 1Раствор сахарозы330 ± 20155 ± 66,2 ± 0,297 ± 112 %703.2.3.
Сравнение методов получения однослойных липосом (ОСЛ)цифетрилинаДля измельчения липосомальных дисперсий (более 10–30 мл),содержащихМСЛ,чащевсегоприменяютметодыэкструзииигомогенизации/микрофлюидизации; гораздо реже используют методыобработки УЗ, замораживания-оттаивания и дегидратации-регидратации.Каждый из используемых методов имеет как свои достоинства, так инедостатки.При проведении исследования по оценке методов измельчениялипосом в каждом случае предварительно дисперсию МСЛ цифетрилина,полученную при гидратации липидной пленки, фильтровали черезнейлоновые мембранные фильтры с размером пор 1,2 и 0,45 мкм.ЭкструзияДля оценки эффективности экструзии при измельчении МСЛцифетрилинасравнивалитритипафильтрующихмембран–поликарбонатных с диаметром пор 0,2 мкм, нейлоновых с диаметром пор0,22 мкм и целлюлозных с диаметром пор 0,22 мкм (Таблица 9).Предварительно липосомальную дисперсию цифетрилина для удалениявозможных механических включений фильтровали через мембраны сдиаметром пор 1,2 и 0,45 мкм.
Процесс экструзии дисперсии МСЛпроводили при уровне давления 0,8–0,9 бар.Таблица 9.Числоциклов012345678910Размеры липосом цифетрилина при экструзииРазмер липосом*, нмПоликарбонатныйНейлоновый фильтр,Целлюлозныйфильтр, 0,2 мкм0,22 мкмфильтр, 0,22 мкм215 ± 15183±9205±10204±12181±14231±26186±11175±6269±15169±10171±10226±18180±10164±12185±15176±6159±10175±10180±14151±10191±10169±8161±14184±12171±12160±10201±11183±10163±10208±10171±1071Согласно представленным результатам экструзия с применениемполикарбонатногофильтрадаётвозможность«быстрее»получитьлипосомальную дисперсию с подходящим размером везикул.
Уже при 1кратномпропусканиидисперсииМСЛцифетрилиначерезполикарбонатный фильтр размер липосом снижается с 215 до 183 нм, а при7-кратном – до 151 нм (Рисунок 8 А–В). Последующее измельчениеспособствовалонезначительномуувеличениюдиаметралипосомцифетрилина.АБВРисунок 8. Размер везикул после экструзии с поликарбонатным фильтром: А – послефильтрации до экструзии (215 нм); Б – после 1-кратного пропускания (183 нм); В –после 7-кратного пропускания (151 нм)В отличие от экструзии с поликарбонатным фильтром припропусканиидисперсиичерезнейлоновыйфильтрпервоначальноотмечали укрупнение липосом до 269 нм, а затем постепенное уменьшениеих размера, и спустя 6 циклов были получены везикулы с минимальнымсредним диаметром 175 нм (Рисунок 9). Тем не менее, последующаяэкструзия опять способствовала росту размеру липосом.72БАРисунок 9. Размер везикул после экструзии с нейлоновым фильтром: А – после 3кратного пропускания (269 нм); Б – после 6-кратного пропускания (175 нм)Приэкструзиииспользованиемлипосомальнойцеллюлозногофильтрадисперсиинаблюдалицифетрилинасволнообразныйхарактер изменения размера везикул – чередование процессов их сниженияи укрупнения (диаграмма).
Минимальный диаметр липосом (169 нм) былдостигнут на 3 и 7 циклах экструзии (Рисунок 10)Рисунок 10. Размер везикул после 3- и 7-кратной экструзии с целлюлозным фильтром(169 нм)Такимобразом,дляполученияОСЛцифетрилинаможноиспользовать два типа фильтров – поликарбонатных и целлюлозных. Нонаиболее эффективна экструзия с использованием поликарбонатныхмембран, поскольку позволяет сократить время стадии измельчения МСЛцифетрилина.Кроме того, следует отметить, что при экструзии МСЛ цифетрилинас использованием мембранных фильтров не отмечались значительныеизменения в показателе включения активного вещества в липосомах и73значений рН, что свидетельствует о низком уровне окисления ФЛ,входящих в состав ЛФ, и сохранении качества продукта.ГомогенизацияДля уменьшения размера липосом в промышленных масштабахприменяют технологию гомогенизации, поскольку в отличие от экструзииизмельчение в гомогенизаторах под высоким давлением характеризуетсяболее высокой производительностью, достигая для некоторых моделей 15л/ч, что позволяет получать за короткий промежуток времени большиеобъемы стабильных липосомальных дисперсий.В настоящем исследовании 150 мл профильтрованной дисперсииМСЛ цифетрилина рециркулировали в гомогенизаторе/микрофлюидайзерепри величине давления 280 кПа (2,8 бар) в течение 5 мин с отборомобразцов через каждую минуту от начала процесса (Таблица 10).Таблица 10.Время,мин012345Влияние гомогенизации на качество ЛЛФ цифетрилинаСредний размер везикул по фракциям, нмПосле гомогенизацииЧерез 1 день326 ± 20286 ± 30102 ± 2(98 %) / 11 ± 2 (2 %)101 ± 22 (93 %) / 24 ± 2 (7 %)134 ± 12 (86 %) / 34 ± 11(14 %)137 ± 22 (88 %) / 31 ± 4 (12 %)123 ± 13 (71 %) / 35 ± 12 (29 %) 124 ± 21 (75 %) / 25 ± 5 (25 %)76 ± 13 (75 %) / 19 ± 5 (25 %)120 ± 55 (68 %) / 26 ± 5 (32 %)62 ± 7 (71 %) / 15 ± 4 (29 %)151 ± 35 (74 %) / 35 ± 4 (26 %)КВП, %96 ± 1,091 ± 1,092 ± 2,286 ± 1,881 ± 3,075 ± 3,0Как показали результаты, средний размер везикул преобладающейфракции через 1 мин измельчения сократился с 326 до 102 нм, (Рисунок11А) а через 2–3 мин липосомы укрупнялись и обладали диаметромпреобладающей фракции около 123–134 нм (Рисунок 11Б).
При этомполученные дисперсии оставались стабильными в течение суток. Тем неменее,гомогенизациянапротяжении4–5минспособствовалаобразованию хотя и более мелких везикул, но неустойчивых, склонных кслиянию липосом. Также во время оценки уровня включения цифетрилинабыло установлено, что количество препарата в липосомах значительно74снижалось с каждой минутой гомогенизации, что вероятно обусловленочастичным разрушением мембраны липосом в результате нагреваниядисперсии (рН снижается со скоростью 0,3 ед./мин).АБРисунок 11.
Размер везикул после гомогенизации. А – после 1 мин, Б – после 2 мин.Таким образом, в результате установлено, что уже спустя 1 минциркуляции, за которую дисперсия совершает 6 полных цикловгомогенизации, образуются везикулы размером около 100 нм. Однако заэтотпериодуровеньвключенияцифетрилинаснижаетсяотпервоначального 96 до 91 %. Поэтому для получения липосомцифетрилина приемлемого диаметра с сохранением высокого уровнявключения проводили исследования по подбору «щадящего» режимагомогенизации.
Для этого липосомальную дисперсию цифетрилинагомогенизировали по циклам (Таблица 11).Таблица 11.Размеры липосом цифетрилина при гомогенизации по цикламРазмер липосом, нм (распределение по фракциям)ЧислоКВП, %сразу послеспустя сутки послецикловгомогенизациигомогенизации0326 ± 20286 ± 301179 ± 14*164 ± 9 / 11 ± 296 ± 12144 ± 9*151 ± 4 / 11 ± 23153 ± 3*166 ± 26 / 27 ± 104128±1*125 ± 2*95 ± 1,55170 ± 17 / 11 ± 3130 ± 7 / 15 ± 76135 ± 29 / 28 ± 8176 ± 2 / 29 ± 1692 ± 2,07214 ± 58 / 43 ± 6152 ± 32*8168 ± 53 / 40 ± 3114 ± 9 / 11 ± 291 ± 1,09121 ± 7 / 13 ± 2102 ±3 / 11 ± 310115 ± 7 / 18 ± 3111 ± 6 / 19 ± 190 ± 1,011116 ± 6 / 11 ± 2120 ± 27 / 26 ± 15Примечание: * – одна фракция (100%)75Согласно данным, представленным в таблице 11, для полученияотносительно стабильных липосом цифетрилина со средним диаметром150 нм (Рисунок 12) и первоначальным уровнем включения (96 %)достаточно 2-х циклов гомогенизации дисперсии (20 сек).Рисунок 12.
Размер везикул после гомогенизации 2 цикловОбработка УЗЛипосомальную дисперсию цифетрилина объемом 30 мл помещалина УЗ-баню и озвучивали в течение 10–50 мин с отбором образцовпрепарата через каждые 10 мин. (Таблица 12).Как показали полученные данные, в результате обработки УЗлипосомы цифетрилина оказались неоднородны и достигли среднегоразмера преобладающей фракции 179 нм лишь спустя 50 мин озвучивания(Рисунок 13), при этом показатель рН за данный период времени снизилсяс 6,2 до 4,5, а КВП – с 97 до 94 %. Это говорит о нецелесообразностиприменения УЗ в процессе получения ЛЛФ цифетрилина.Таблица 12.Средний размер липосом цифетрилина при обработке УЗВремя,Средний размерКВП, %рНминлипосом, нм0330 ± 32*6,3 ± 0,197 ± 1,010324 ± 30*6,2 ± 0,120442 ± 27 / 79 ± 2196 ± 1,25,9 ± 0,230365 ± 25 / 71 ± 2496 ± 1,05,2 ± 0,140421 ± 27 / 66 ± 1896 ± 1,54,7 ± 0,250179 ± 10 / 20 ± 994 ± 1,24,5 ± 0,3Примечание: * – одна фракция (100 %)76Рисунок 13.
Размер везикул после спустя 50 мин озвучивания (179 нм)Исходя из изложенных выше данных для наработки липосомцифетрилина в условиях лаборатории целесообразно применять методэкструзии, а для масштабирования технологии получения ЛЛФ – методгомогенизации.Уменьшение размеров липосом цифетрилина за счет экструзииобладает многом преимуществ, таких как получение однородных поразмеру везикул; незначительное окисление липосомальных ФЛ посравнению с УЗ и гомогенизацией; возможность измельчения небольшихобъемов дисперсии и др.
Кроме того, процесс экструзии способствуетболее однородному распределению гидрофобного ЛВ в структуре бислоя,что делает данный метод целесообразным для получения липосомцифетрилина.Неоспоримыми преимуществами применения гомогенизации в ходемасштабированиятехнологическогопроцессаполученияЛЛФцифетрилина являются высокая производительность, незначительныйуровеньокисленияФЛ(присоблюдениирежима),стабильностьполучаемых липосом. Существенное значение имеет использованиесерийного промышленного оборудования и получение препарата встерильныхусловияхвзакрытомрежиме,приэтомвходетехнологического процесса существует возможность осуществленияконтроля температуры и давления.773.2.4.
Отделение субстанции, не включившейся в липосомы, истерилизация липосомальной дисперсии цифетрилинПо завершении процесса формирования липосом с включенным вних цифетрилином необходимо провести отделение свободного («невключенного») вещества. При создании ЛЛФ гидрофобной субстанции дляотделения «не включенного» вещества достаточно провести фильтрациючерез каскад фильтров с различным диаметром пор. При этом, как правило,отделение«невключенной»активнойсубстанциисочетаетсясоследующей технологической стадией – стерилизующей фильтрацией.Инъекционные ЛЛФ, как и любые ЛФ, используемые для парентеральногоприменения, должны выдерживать испытание на стерильность, согласнотребованиямОФС.1.4.1.00007.15«Лекарственныеформыдляпарентерального применения» [2].
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
