Диссертация (Иммуногенетические маркеры прогнозирования эффективности программ экстракорпорального оплодотворения у женщин с трубно-перитонеальным бесплодием), страница 7

Это подразумевает внутрифолликулярную продукцию ипотенциальную аутокринную или паракринную роль M-CSF в регуляциифолликулогенеза и овуляции [148].Таким образом, уровни M-CSF всыворотке могут отражать созревание фолликулов [128, 134, 135, 184].37Известно, что у мышей CSF-1R экспрессируется на ооцитах, раннихэмбрионах и клетках трофобласта, а CSF-1 продуцируетсяклеткамигранулезы, яйцевода и максимально эпителием матки беременных мышей. Уop/op мышей наблюдается относительная малочисленность яичниковыхмакрофагов [128, 134, 184]. Мыши с дефицитом M-CSF имеют удлиненныеэстральныециклы,значительно болеенизкиепоказатели овуляции,существенно меньшее количество как антральных, так и зрелых фолликуловв проестрическом яичнике, а также сниженную способность к пролиферацииклеток гранулезы в антральных фолликулах [162]. В своих исследованиях Y.Fukumatsu с соавторами [163], K.

Nishimura с соавторами [162] показали, чтоM-CSF и яичниковые макрофаги оказывают стимулирующее действие нафолликулогенез, способствуя овуляции у крыс. Было также показано, чтоCSF-1 ускоряет образование полости бластоцисты и увеличивает количествотрофобластных клеток [118, 276]. Авторы предположили, что плохаяовуляция может быть результатом потери трофических эффектов макрофаговили потери прямой регуляции ооцитов. Эти данные также подтверждаютучастие M-CSF в процессе фолликулогенеза и овуляции.В исследовании A. Salmassi с соавторами [130] было сделанопредположение, что уровень M-CSF в циркулирующей крови может бытьпрогностическим фактором исходов ЭКО у человека.

В работе былоотмеченопостепенноеувеличениеуровняМ-CSFнапротяжениистимулированного цикла ЭКО, с 3-5-го дня до максимальной концентрации вдень трансвагинальной пункции (TVP). Авторы указывают на вероятноевлияние используемых гонадотропинов на высвобождение М-CSF.Эти данные согласуются с результатами исследований [127, 162, 163],согласнокоторымM-CSFияичниковыемакрофагиоказываютстимулирующее действие на фолликулогенез, способствуя овуляции унезрелых крыс, получающих гонадотропин.38Известно, что внутривенное введение М-CSF в циклах ЭКО оказываетположительное действие на фолликулогенез, особенно у женщин сосниженным сывороточным содержанием М-CSF в начале фолликулярнойфазы [131].

В своих исследованиях A.R. Gargiulo с соавторами [152]показали, что концентрация М-CSF в цервикальной слизи коррелировала суровнем Е2 и с соотношением Е2/Р в крови.В исследовании A. Salmassi с соавторами [130] после прекращениястимуляции яичников и введения ХГЧ уровень M-CSF увеличивался до дняпереноса эмбрионов.Вероятно, полученные результаты обусловленывлиянием ХГЧ на синтез M-CSF [137, 172, 266]. Авторы также отмечают, чтохарактерный профиль экспрессии M-CSF в дни после переноса эмбрионовотражаетважную роль M-CSF в процессе имплантации и поддержаниибеременности [130]. У забеременевших пациенток в циклах ЭКО уровеньM-CSF значительно увеличивался со дня переноса эмбрионов и достигалсамого высокого уровня в день подтверждения беременности и достигалплато во время беременности (через 34 недели после переноса эмбрионов).Напротив, у пациенток с неблагоприятным исходом процедуры не былозарегистрировано изменений в уровне M-CSF со дня переноса эмбрионов додня подтверждения отстутствия беременности.Высокий уровень M-CSF во время лютеиновой фазы (имплантация,день подтверждения беременности, гестация) указывает на важную рольэтого цитокина.

Было отмечено, что если имплантация не происходит,уровень M-CSF не изменяется. Авторы также указывают на то, чтоповышенныйуровеньM-CSFотражаетвоспалительныйпроцесс,сопровождающий инвазию прикрепленного эмбриона в децидуа, вероятно,регулируемую прогестероном [169, 196, 294, 308, 352].Следует отметить результаты работы P. Bhatnagar [118], показавшегочто эмбрионы, обработанные M-CSF, имеют значительно больше клетоктрофобласта, чем контрольные эмбрионы.

Кроме того, V. Chitu и39E. R. Stanley [128] сообщали, что клетки трофобласта за счет M-CSFрегулируемоймодуляциииммунныхреакциймогутзащищатьотвторгающихся патогенов на границе между материнским организмом иплодом.Известно, что M-CSF играет важную роль не только в физиологическихизменениях эндометрия, но и в патогенезе эндометриоза [87, 210].Повышенные уровни CSF-1 были обнаружены в перитонеальной жидкостипациентов с эндометриозом [139, 280].Протоонкоген с-fms локализован в q33q34 районе длинного плеча 5-йхромосомы человека и имеет размер около 61 000 н.п. Ген состоит из 22экзонов и 21 интрона [26, 153, 272]. В связи с тотальным секвенированиемгенома человека было обнаружено большое число полиморфных сайтов длягена c-fms  более 60 однонуклеотидных полиморфизмов, два из которыхлокализованы в кодирующей части, а остальные  в некодирующих областях[42].Согласно литературным данным, выявлена ассоциация гена c-fmsпреимущественно с онкологическими заболеваниями  раком молочнойжелезы [129], раком легких у женщин [94], носоглоточной карциномой [275],неблагоприятнымтечениемязвеннойкарциномыпочек[194],наследственной диффузной лейкоэнцефалопатией [193, 256] и бронхиальнойастмой [110].Таким образом, анализ литературных источников свидетельствует онеобходимостиииммуногенетическихцелесообразностифакторовисвязанныхуглубленногоснимиизучениямолекулярныхмеханизмов регуляции функциональной активности эндометрия в целяхповышения результатов восстановления фертильности в программах ЭКО.40ГЛАВА 2.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ2.1. Материалы исследованияВ соответствии с целью исследования и поставленными задачами вотделениивспомогательныхрепродуктивныхтехнологийГБУЗРМ«Мордовский республиканский клинический перинатальный центр» былообследовано120перитонеальнойпациентокформойрепродуктивногобесплодия,возрастаобратившихсядляструбно-проведенияпрограммы ЭКО.Критерии включения в исследование. Возраст женщин 1839 лет. Трубно-перитонеальный фактор бесплодия. Регулярный менструальный цикл. Нормальный овариальный резерв (по данным гормонального исследованияи УЗИ органов малого таза). Наличие в анамнезе не более 3 неудачных попыток ЭКО. Отсутствие патологии эндометрия, по данным УЗИ. Перенос только эмбрионов хорошего качества. Отсутствие противопоказаний к проведению ЭКО. Фертильная сперма супруга/партнера. Нормальный кариотип обоих супругов/партнеров.Критерии исключения из исследования. Бесплодие, обусловленное отсутствием овуляции. Бесплодие, обусловленное иммунологическим фактором. Экстрагенитальная патология, при которой проведение базовой программыЭКО противопоказано. Гинекологические заболевания: эндометриоз, миома матки. Острые воспалительные заболевания органов малого таза.41 Хронические заболевания в стадии обострения. Ожирение 23-й степени. Олигоастенотератозооспермия (нормативы ВОЗ, 2010 г.). Синдром поликистозных яичников и наружный генитальный эндометриоз3-4-й степени. Гиперандрогенемия. Гипо- и гипергонадотропная недостаточность функции яичников. Аномалии развития женской половой системы.В зависимости от исхода проведенного ЭКО ретроспективно былисформированы 2 группы: 40 женщин с беременностью, подтвержденной УЗИ (I группа); 80 женщин с не наступившей после ЭКО беременностью (II группа).Всем женщинам были изложены цели научного исследования инеобходимое обследование как в устной, так и в письменной форме.

Всепациентки подписали добровольное информированное согласие на участие висследовании.Материалом для исследования служила периферическая венознаякровь, асептически взятая путем венепункции на 34-й день менструальногоцикла, предшествующего программе ЭКО. Обследование проводилосьоднократно.2.2. Методы исследованияПредварительное обследование женщин проводилось в соответствии сприказом № 107н Министерства здравоохранения России от 30 августа2012 г.

«О порядке использования вспомогательных репродуктивныхтехнологий, противопоказаниях и ограничениях к их применению». Былииспользованы общеклинические и специальные методы исследования.422.2.1. Общеклинические исследованияБыли проведены общее и специальное гинекологическое обследование;ультразвуковоеменструальногоменструальногоисследованиецикла);тестостерона,гормональныецикла):фолликулостимулирующегооргановмалоготазаисследованиялютеинизирующегогормона(на(ФСГ),2-йдень(23-йденьгормонаэстрадиола,дегидроэпиандростерон-сульфата(ЛГ),пролактина,(ДГЭА-С),17-оксипрогестерона (17-ОН), кортизола, тиреотропного гормона (ТТГ),свободного тироксина (Т4), трийодтиронина (Т3), антимюллерова гормона(АМГ) и прогестерона (20-22-й день менструального цикла); кольпоскопия,цитологическое исследование мазков с шейки матки; бактериальный посев нафлору отделяемого влагалища, цервикального канала и уретры; исследованиемазка на степень чистоты из влагалища; исследование на инфекции методомПЦР в цервикальном мазке (хламидии, микоплазма, уреаплазма); УЗИмолочных желез или маммография (от 35 лет); УЗИ щитовидной железы;флюорография; анализ крови на антитела к ВПГ, ЦМВ, токсоплазме,краснухе (со стадией заболевания); анализ крови на антитела к ВИЧ, HBsантиген, антиHCV, реакцию Вассермана; клинический и биохимическийанализ крови; гемостазиограмма; определение группы крови и резус-фактора;общий анализ мочи; электрокардиограмма; консультация терапевта, попоказаниямврача-генетикаидругихспециалистов;спермограммамужа/партнера, консультация андролога.Обследование мужа/партнера пациентки: сбор анамнестическихданных (возраст, национальность, наследственность, данные о перенесенныхсоматических, психических, воспалительных и инфекционных заболеваниях,наличие профессиональных и других вредностей), исследование качестваспермы (дважды), анализ мазков на наличие хроническмх инфекций,консультация врача-андролога.43Сбор анамнестических данных у женщин проводился с цельюизучения аллергической предрасположенности, наследственности, данных оперенесенныхтравмах.соматических,Изучалисьинфекционныхособенностизаболеваниях,менструальнойоперациях,функции(возрастнаступления менархе, регулярность и продолжительность цикла, характерменструаций, дисменорея), половой функции (возраст начала половой жизни,количество браков) ииспользование методов контрацепции.