Диссертация (Иммуногенетические маркеры прогнозирования эффективности программ экстракорпорального оплодотворения у женщин с трубно-перитонеальным бесплодием), страница 9

в обоих случаях. Продукты50амплификацииочищалипраймеровмикроколонкахнаочищенных продуктовотПЦРизбыткадезоксинуклеотидтрифосфатов(QIAGEN,Германия).осуществлялисоднимиСеквенированиеизпраймеров,использованных на стадии ПЦР, на генетическом анализаторе ABI PRISM3500 с использованием наборов для циклического сиквенса BigDye®Terminator v3.1 Cycle Sequencing Kit и соответствующего программногообеспечения к прибору согласно инструкции производителя (AppliedBiosystems, США).Полиморфный маркер гена IL-1αВ гене IL-1α методом ПЦР с последующим секвенированием поСенгеру исследовали полиморфный маркеры rs1800587 (UTR-5 областигена).

Амплификацию фрагмента гена IL-1α, содержащего полиморфныйлокус, проводили с использованием подобранных в рамках настоящегоисследования праймеров в двух раздельных реакциях. Для подборапраймеровиспользовалиинтернет-ресурсPrimer-BLAST(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer-blast) и референтную нуклеотиднуюпоследовательностьNM_000575.4изБазыданныхNCBI(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/NM_000575.4).

Размер амплифицируемого фрагмента составлял около 100 п.н. Продукты амплификации очищалиот избытка дезоксинуклеотидтрифосфатов и праймеров на микроколонках(QIAGEN,Германия).СеквенированиеочищенныхпродуктовПЦРосуществляли с одним из праймеров, использованных на стадии ПЦР, нагенетическом анализаторе ABI PRISM 3500 с использованием наборов дляциклического секвенирования BigDye® Terminator v3.1 Cycle Sequencing Kitи соответствующего программного обеспечения к прибору согласноинструкции производителя (Applied Biosystems, США).Полиморфный маркер гена IL-1RААмплификацию полиморфного участка гена rest2234663(2/4) генаIL-1Rа проводили с использованием соответствующих праймеров. После 3551циклов ПЦР аллели этого полиморфного локуса определяли методомэлектрофореза в 2 % агарозных гелях, которые окрашивали бромистымэтидием.2.2.6.

Статистическая обработка данныхСтатистическуюобработкурезультатоввыполнялиспомощьюстандартного пакета прикладных программ Stat Soft Statistica 10.0 (США).Дляоценкинормальностираспределенияколичественныхданныхприменялись графические (частотная гистограмма) и расчётные (критерийКолмогорова  Смирнова, Шапиро  Уилка) методы.В качестве меры центральной тенденции количественных признаковбыла выбрана медиана (Ме), а для интервальной оценки  25 и 75 квартиль,поскольку в большинстве случаев распределение данных было отличным отнормального. Результаты представлены в виде Me(Q0,25 –Q0,75). Качественныезначения отражены в виде абсолютных величин (n) и процентных долей.Распределение частот генотипов всех исследованных полиморфных маркеровсоответствовало уравнению Харди  Вайнберга.Для анализа межгрупповых различий количественных признаковиспользовалась описательная статистика с использованием t-критерияСтьюдента и рангового U-критерия Манна  Уитни.

Для выявления различийчастот значений качественных показателей между группами и оценки ихстатистической значимости применялся критерий χ 2, при небольшомколичестве наблюдений рассчитывался точный критерий Фишера.Дляоценки взаимосвязи между изучаемыми показателями проводился линейныйкорреляционный анализ с определением коэффициента корреляции Пирсона(r) и его значимости по критерию t. Для оценки ассоциаций генотипов снаступлением беременности использовались критерий χ2 Пирсона иотношение шансов (OR) с 95 % доверительным интервалом (CI). Значимость52выявленных различий и взаимосвязей во всех видах анализа была принятапри уровне p< 0,05.53ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ3.1.

Анализ клинико-анамнестических данных и данных гормональногостатуса пациентокВсего в исследовании принимали участие 120 женщин, проходящихлечение по поводу трубно-перитонеального бесплодия на базе «Мордовскогореспубликанского клинического перинатального центра».Критерии включения в группу I (основна группа, n=40): возраст 2539лет; трубно-перитонеальное бесплодие; программа ЭКО; короткий протоколстимуляции суперовуляции; наступление беременности после настоящейпрограммыЭКО(визуализацияплодногояйцаприультразвуковомисследовании через 3 недели после переноса эмбрионов), подписаниеинформированного согласия.Критерии включения в группу II (группа сравнения, n=80): возраст2539 лет; трубно-перитонеальное бесплодие; программа ЭКО; отсутствиебеременностипосленастоящейпрограммыЭКО,подписаниеинформированного согласия.Все обследованные женщины были репродуктивного возраста, которыйв среднем составил 32,8±4,1 года.

Следует отметить, что 62,5 % женщинбыли раннего репродуктивного возраста (от 25 до 35 лет). Возрастнаяхарактеристика пациенток представлена в таблице 3.1. Статистическизначимых межгрупповых различий выявлено не было (р=0,379).Таблица 3.1.Распределение женщин, включенных в исследование, по возрастуВозраст2530 лет, n (%)3135 лет, n (%)3639 лет, n (%)Средний возраст,годы (M±m)Основная группа(n=40)9 (22,5)13 (32,5)18 (45)33,4±3,8Группа сравнения(n=80)17 (21,2)36 (45)27 (33,8)32,6±4,3Всего(n=120)26 (21,7)49 (40,8)45 (37,5)32,8±4,154При оценке характера менструальной функции выявлено, что всеобследованные женщины имели регулярный менструальный цикл беззначительныхотклоненийотнормы.У75,8%женщинвыявленосвоевременное начало менструальной функции в возрасте от 12 до 14 лет.Раннее становление менструации выявлено у 5 % женщин, позднее – у19,2 %.

Продолжительность менструального цикла варьировала от 21 до 35дней, в среднем составила 28,7±1,5 дня. Длительность менструальныхвыделений колебалась от 3 до 7 дней, в среднем 5,1±0,9 дня. Статистическизначимых межгрупповых различий выявлено не было (р=0,169) (табл.3.2).Таблица 3.2Характеристика менструальной функции обследованных женщинПризнакОсновнаягруппа(n=40)40 (100)Регулярныйритмменструации, n (%)Среднийвозраст13,3±1,5menarche, годы (M±m)Продолжительность менструального циклаДо 25 дней, n (%)3 (7,5)25 (62,5)2629 дней, n (%)12 (30)3035 дней, n (%)Средняя28,6±1,9продолжительность,дней (M±m)Длительность менструации30 (75)35 дней, n (%)Более 5 дней, n (%)10 (25)Средняя длительность5,0±0,9менструации, дни(M±m)Интенсивность менструацииСкудные, n (%)4 (10)Умеренные, n (%)30 (75)Обильные, n (%)6 (15)Болезненные, n (%)13 (32,5)Безболезненные,n (%)27 (67,5)Группасравнения(n=80)80 (100)Всего(n=120)120 (100)13,3±1,713,3±1,65 (6,25)53 (66,25)22 (27,5)28,8±1,78 (6,7)78 (65)34 (28,3)28,7±1,558 (72,5)22 (27,5)5,1±0,788 (73,3)32 (26,4)5,1±0,99 (11,25)58 (72,5)13 (16,25)24 (30)56 (70)12 (10)88 (73,3)20 (16,7)37 (30,8)83 (69,2)55Из анамнеза заболевания было выявлено, что продолжительностьбесплодия у исследованных женщин варьировала от 1 года до 17 лет, всреднемсоставив5,3±3,5года,приэтомстатистическизначимыхмежгрупповых различий выявлено не было (р=0,213) (табл.

3.3).Таблица 3.3Распределение обследованных женщин по длительности бесплодияДлительность бесплодияДо 2 лет, n (%)От 2 до 5 лет, n (%)Более 5 лет, n (%)Средняя длительностьбесплодия, годы (M±m)Основнаягруппа(n=40)3 (7,5)16 (40)21 (52,5)5,6±3,3Группасравнения(n=80)7 (8,75)29 (36,25)44 (55)5,1±3,6Всего(n=120)10 (8,3)45 (37,5)65 (54,2)5,3±3,5При анализе репродуктивной функции было выявлено незначительноепреобладание частоты встречаемости вторичного бесплодия (59,2 %) надпервичным (40,8 %). Первичное бесплодие было выявлено у 42,5 % женщинв основной группе и у 40 % в группе сравнения. Вторичное бесплодиедиагностировано у 57,5 % пациенток в основной группе и у 60,0 % в группесравнения (рис.

1).100%90%80%70%57.50%60%59.20%60%50%Вторичное бесплодие40%Первичное бесплодие30%20%42.50%40%40.80%ОсновнаягруппаГруппасравненияВсего10%0%Рисунок 1. Распределение пациенток по типу бесплодия56Данныеорепродуктивнойфункциивисследуемыхгруппахпредставлены в таблице 3.4. У женщин с вторичной формой бесплодия(n=71) наиболее частыми исходами беременности были: внематочныебеременности – у 32 (45,1 %) женщин и искусственные аборты – у 29(40,8 %) женщин. Родами заканчивалась беременность у каждой третьейженщины (33,8 %).

У 14 женщин (19,7 %) беременность заканчиваласьсамопроизвольными абортами на ранних сроках. Значимых различийвструктуре исходов предыдущих беременностей в исследуемых группахвыявлено не было (p=0,527).Таблица 3.4Характеристика репродуктивной функции обследованных женщинс вторичным бесплодиемПараметрРоды, n (%)Эктопическая беременность, n (%)Медицинский аборт, n (%)Самопроизвольный выкидыш наранних сроках, n (%)Основнаягруппа(n=23)9 (39,1)11 (47,8)9 (39,1)5 (21,7)Группасравнения(n=48)15 (31,25)21 (43,75)20 (41,7)9 (18,75)Всего(n=71)24 (33,8)32 (45,1)29 (40,8)14 (19,7)Как видно из данных, приведенных в таблице 3.5 в структуреперенесенных гинекологических заболеваний у обследованных женщинпреобладали хроническое воспаление матки и/или придатков (80,8%).Инфекции, передаваемые половым путем, в анамнезе обнаружены у каждойпятой женщины (19,2 %), при этом встречались уреаплазмоз (у 18 женщин),хламидийная инфекция (у 9), микоплазмоз (у 2) и сифилис (у 1).