Диссертация (Иммуногенетические маркеры прогнозирования эффективности программ экстракорпорального оплодотворения у женщин с трубно-перитонеальным бесплодием)

федеральное государственное автономное образовательное учреждениевысшего образования Первый Московский государственныймедицинский университет им. И.М. Сеченова Министерстваздравоохранения Российской Федерации(Сеченовский университет)На правах рукописиЛАПШТАЕВА АННА ВАСИЛЬЕВНАИММУНОГЕНЕТИЧЕСКИЕ МАРКЕРЫ ПРОГНОЗИРОВАНИЯЭФФЕКТИВНОСТИ ПРОГРАММ ЭКСТРАКОРПОРАЛЬНОГООПЛОДОТВОРЕНИЯ У ЖЕНЩИН С ТРУБНО-ПЕРИТОНЕАЛЬНЫМБЕСПЛОДИЕМ14.03.09 – Клиническая иммунология, аллергологияДиссертацияна соискание ученой степени кандидата медицинских наукНаучные руководители:доктор медицинских наук, доцентИ.В. Евсегнеевадоктор биологических наук, профессорВ.В.

НовиковМосква – 20181ОГЛАВЛЕНИЕВВЕДЕНИЕ…………………………………………………………………4ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ………………………………………121.1. Современное состояние проблемы бесплодия……………………….121.2. Экстракорпоральное оплодотворение и существующиепрогностические критерии его эффективности…………………………...141.3. IL-1: роль в репродукции………………………………………………201.4.

Участие M-CSF и CSF1R в репродуктивных процессах…………….32ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ…………………………………412.1. Материалы исследования……………………………………………...412.2. Методы исследования…………………………………………………422.2.1. Общеклинические исследования…………………………………..432.2.2. Исследование гормольного статуса………………………………..462.2.3.

Ультразвуковое исследование органов малого таза………………472.2.4. Иммуноферментные исследования………………………………...472.2.5. Молекулярно-генетические исследования………………………...482.2.6. Статистическая обработка данных………………………………...52ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ….543.1. Анализ клинико-анамнестических данных и данныхгормонального статуса пациенток…………………………………………543.2. Содержание IL-1α в сыворотке и носительство полиморфныхвариантов его гена rs1800587 у женщин с трубно-перитонеальнойформой бесплодия…………………………………………………………..623.2.1. Содержание IL-1α в сыворотке крови у женщин с трубноперитонеальной формой бесплодия………………………………………623.2.2.

Полиморфный маркер rs1800587 5`UTR области гена IL-1αу женщин с трубно-перитонеальной формой бесплодия………………..673.3. IL-1β у женщин с трубно-перитонеальной формой бесплодия……..7323.4. Содержание IL-1Ra в сыворотке и носительство минисателлитногомаркера IL1RN-VNTR у женщин с трубно-перитонеальной формойбесплодия……………………………………………………….…………...783.4.1. IL-1Rа у женщин с трубно-перитонеальной формой бесплодия...783.4.2.

Полиморфный минисателлитный маркер IL1RN-VNTR уженщин с трубно-перитонеальной формой бесплодия………………...823.5. Содержание M-CSF в сыворотке и носительство полиморфныхмаркеров rs3216780 и rs386693509 гена CSF1R у женщин с трубноперитонеальной формой бесплодия………………………………………..863.5.1. M-CSF у женщин с трубно-перитонеальной формой бесплодия…863.5.2. Полиморфный маркер rs3216780 гена CSF1R у женщинс трубно-перитонеальной формой бесплодия……………………………903.5.3. Полиморфный маркер rs386693509 гена CSF1R у женщинс трубно-перитонеальной формой бесплодия……………………………943.6. Общая прогностическая ценность изучаемых показателей вразвитии ЭКО-индуцированной беременности…………………………...99ГЛАВА 4.

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ…...………………………102ВЫВОДЫ……………………………………………………………………122ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ…………………………………124СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ…………………..125ПРИЛОЖЕНИЕ А...……………………………………………………….127ПРИЛОЖЕНИЕ Б...……………………………………………………….128ПРИЛОЖЕНИЕ В...……………………………………………………….130ПРИЛОЖЕНИЕ Г...……………………………………………………….132ПРИЛОЖЕНИЕ Д...……………………………………………………….135ПРИЛОЖЕНИЕ Е...……………………………………………………….136ПРИЛОЖЕНИЕ Ж..……………………………………………………….138ПРИЛОЖЕНИЕ И...……………………………………………………….139СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ..………………..….1413ВВЕДЕНИЕАктуальность научного исследованияБесплодный брак – одна из наиболее значимых медико-социальных,социальныхиэкономическихпроблемсовременности.ПоданнымВсемирной организации здравоохранения, в экономически развитых странахмира за последние 20–30 лет регистрируется увеличение доли бесплодныхсупружеских пар до 2530 % [80, 191].

В Российской Федерации страдаютбесплодием  78 млн женщин детородного возраста, состоящих в браке, чтосущественно снижает репродуктивный потенциал нации [1]. Низкаяэффективность методов восстановления естественной фертильности женщинстимулироваларазвитиеметодоввспомогательныхрепродуктивныхтехнологий (ВРТ). В настоящее время для многих супружеских пар, ранееобреченных на бездетность, методы ВРТ  единственное решение проблемыбесплодия, что подтверждается регистрируемым ежегодным ростом ихиспользования во всем мире.

Одним из наиболее популярных и достаточноэффективных методов избавления от бесплодия является экстракорпоральноеоплодотворение (ЭКО) [70]. Вместе с тем, оценивая терапевтическуюэффективность ЭКО, приходится констатировать, что более половиныначатых циклов все еще являются нерезультативными: лишь в 31,5 %случаев цикл ЭКО приводит к наступлению беременности, а в 22,8 %завершается родами [33-39].Учитывая высокую стоимость и относительно низкую эффективностьпроцедуры ЭКО, в последние годы все большее внимание уделяется поискуновых современных прогностических критериев, использование которых напреконцептивном этапе позволит прогнозировать исход процедуры с цельюрешенияпроблемынеэффективноголечениябесплодия.Выявлениемолекулярно-генетических маркеров, указывающих как на благоприятныйисход ЭКО, так и на его неудачу, несомненно повысит результативностьиспользования данного метода, оптимизирует процесс лечения бесплодия и,4вероятно, снизит экономическую нагрузку на систему здравоохранения вцелом.Механизмсогласованнымполноценногонаступлениябеременностивзаимодействиемэмбрионаидвухвофактороврецептивногомногомэндометрия,обусловленфункциональночтоявляетсяопределяющим в создании оптимальных условий для имплантации.Реализация этого процесса осуществляется за счет генетических имолекулярных преобразований, регулируемых экспрессией ряда иммунныхфакторов, в том числе интерлейкинов, факторов роста, молекул адгезии,хемокинов, простагландинов и их рецепторов.

Все это, в итоге, определяетэффективность процессов дифференцировки, адгезии и инвазии трофобласта.Степень разработанности темыНесмотря на достаточное количество работ по изучению цитокиновойрегуляции плацентации, родовой деятельности и некоторых осложненийбеременности [25, 41, 48, 63, 71, 72, 77, 78, 150], данные о ролииммуногенетическихфактороввнаступленииЭКО-индуцированнойбеременности единичные, а их результаты часто противоречат друг другу[69, 212]. Это можно объяснить как особенностями дизайна исследований,так и полифункциональностью изучаемых показателей.

В связи с этим недостигнуто единой точки зрения о ценности выявления цитокинов,являющихся оптимальными маркерами прогнозирования исхода процедурыЭКО. В данном направлении поиски активно продолжаются. Следует такжеотметить, что, вероятнее всего, использование какого-то одного маркера дляпрогнозирования эффективности процедуры ЭКО недостаточно как ввидусложного механизма имплантации эмбриона, так и индивидуальныхособенностей гомеостаза, участвующих в программе ЭКО пациенток.Таким образом, исследования по изучению иммуногенетическихфакторов и связанных с ними молекулярных механизмов регуляциифункциональной активности эндометрия в целях повышения результатов5восстановленияфертильностивпрограммахЭКОявляютсявесьмаактуальными.Цель исследованияОпределить роль цитокинов и их генов в качестве предикторовнаступления беременности в программах ЭКО у женщинс трубно-перитонеальным бесплодием с целью разработки персонифицированногоподхода к лечению и для повышения эффективности процедуры.Задачи исследованияСравнить содержание IL-1α, IL-1β, IL-1Rа, M-CSF в сыворотке1.крови пациенток с различными исходами процедуры ЭКО.Выявить концентрации IL-1α, IL-1β, IL-1Rа, M-CSF в сыворотке2.крови женщин, ассоциируемые с благоприятным исходом программы ЭКО.Изучить распределение частот генотипов полиморфных маркеров3.rs1800587 (C/T) гена IL-1α, rs2234663 (2/4) гена IL-1Rа, rs386693509 (CA/TC)и rs3216780 (del/G) гена CSF1R у женщин с трубно-перитонеальнымбесплодием, участвующих в программе ЭКО.Выявить ассоциацию полиморфных вариантов генов IL-1α,4.IL-1Rа и CSF1R с эффективностью процедуры ЭКО.Провести анализ содержания IL-1α, IL-1Rа, M-CSF в сыворотке5.кровивзависимостиотrs1800587 (C/T) гена IL-1α,носительстваполиморфныхвариантовrs2234663 (2/4) гена IL-1Rа , rs386693509(CA/TC) и rs3216780 (del/G) гена CSF1R соответственно у женщин с трубноперитонеальным бесплодием, участвующих в программе ЭКО.6.Установитьоптимальноесочетаниеизучаемыхмаркеров,обладающее максимальной прогностической ценностью исхода ЭКО уженщин с трубно-перитонеальным бесплодием.6Научная новизнаУстановлены основные различия концентраций IL-1α в сывороткекрови на 2-й день менструального цикла, предшествующего протоколу ЭКО,у женщин с различными исходами процедуры.Впервые в сыворотке крови пациенток выявлены концентрации IL-1α иM-CSF, которые на преконцептивном этапе ассоциированы с наступлениембеременности в циклах ЭКО.Впервыеустановленораспределениеносительствагенотиповполиморфных маркеров rs1800587 (C/T) гена IL-1α, rs2234663 (2/4) гена IL1Rа, rs386693509 (CA/TC) гена CSF1R, rs3216780 (del/G) гена CSF1R уженщин с трубно-перитонеальным бесплодием, участвующих в программеЭКО.Впервые показано, что для женщин с трубно-перитонеальной формойбесплодия прогностически значимыми в плане наступления беременности вциклах ЭКО являются полиморфные варианты Т/Т rs1800587 гена IL-1α,ТС/СА rs3693509 гена CSF1R и del/G rs3216780 гена CSF1R.Впервые установлена ассоциация генотипа ТС/ТСполиморфногомаркера rs3693509 гена CSF1R с повышенным содержанием M-CSF всыворотке крови.Изучены корреляционные связи между цитокинами IL-1α, IL-1β, IL1Rа, M-CSF между собой, а также с гипофизарными и яичниковымигормонами.Теоретическая и практическая значимостьРасширены и дополнены представления о роли цитокинов в реализациирепродуктивныхпоказатели,функций.обладающиеВпервыеопределенынаибольшейиммуногенетическиеинформативностьюдляпрогнозирования наступления беременности в результате процедуры ЭКО.Генотипирование женщин на носительство полиморфных вариантовТ/Т rs1800587 гена IL-1α, ТС/СА rs3693509 гена CSF1R и del/G rs32167807гена CSF1R, а также определение концентрации IL-1α и M-CSF в сывороткекрови могут быть использованы для прогнозирования эффективностипрограмм ЭКО на преконцептивном этапе, что позволит обоснованнопланировать индивидуальную тактику ведения пациенток в предстоящемцикле лечения методом ЭКО и снизить затраты государства и частных лиц напроведение процедуры.Материалы диссертации вошли в учебные рабочие программы ииспользуются в лекционных курсах и на практических занятиях ряда кафедрФГАОУ ВО Первый МГМУ им.