Диссертация (Разработка фармакопейных стандартных образцов для лекарственных средств пептидной структуры), страница 11

Коэффициенткорреляции составил 0,99973, что соответствует требованиям НД (не менее0,999).Былвыполненрасчётконцентрацийэтилацетатапоуравнениюкалибровочной зависимости, после чего полученные результаты сравнивались сфактическими, а затем были рассчитаны значения относительной погрешности.Таблица 12C факт, мг/мл0,050,10,20,30,40,0478 0,0969 0,18450,27910,3655С рассчит, мг/мл0,0480,1020,1990,3030,398ε, %3,910,150,660,970,47Отношение площадипика ЭА к площади пика ВСКалибровочнаякривая № 1Полученныезначениятребованиям НД (не более 5%).относительнойпогрешностисоответствуют76Правильность и прецизионностьОценку показателей правильности и прецизионности осуществляли путёмисследования образцов контроля качества (3 независимых образца каждойконцентрации).

Правильность и прецизионность определяли в течение 1 рабочегодня (внутри серии) и в течение нескольких дней (между сериями). Расчётконцентраций определяемых веществ в образцах контроля качества выполняли поуравнениюкалибровочногографика,полученноговсоставетекущейаналитической серии.Таблица 13Результаты оценки правильности и прецизионности методики (внутри серии)введено(мг/мл)найдено(мг/мл)найденоS.D.(мг/мл), среднее(n=5)значение (n=5)RSD,%(n=5)εКритерийε, % приемлемости0,0460,0490,051-RSD < 5%,0,04820,0023,990,20880,0031,604,400,41260,0092,160,153,60ε < 5%,0,0470,050,0480,2110,205RSD < 5%,0,209ε < 5%,0,2130,20,2060,4240,411RSD < 5%,0,4150,4070,40,419ε < 5%,77Таблица 14Результаты оценки правильности и прецизионности методики (между 2-мясериями)введенонайдено(мг/мл)(мг/мл)найдено(мг/мл), среднеезначение (n=10)S.D.(n=10)RSD,%(n=10)εКритерийε, %приемлемости0,0460,0490,0510,0470,0480,04840,0024,790,045-RSD < 5%,3,20ε < 5%,0,0480,0520,0510,0470,10,2110,205RSD < 5%,0,20,2090,20790,0041,853,95ε < 5%,0,2130,206780,2130,2050,2010,2070,2090,4240,4110,4020,4070,4190,4RSD < 5%,0,40790,0102,451,970,396ε < 5%,0,3910,4050,4110,413Правильность и прецизионность методики соответствуют требованиям НД(RSD не более 5 %).УстойчивостьУстойчивость, или робастность, системы испытывали при незначительномизменении параметров методики количественного определения.

В данном случаеменяли температуру детектора и скорость потока газа-носителя.79Таблица 15Результаты валидации по показателю «Устойчивость»Температура Скорость Среднеедетекторапроцентноесодержание Среднеепотокааналита в испытуемом растворе, от значениегаза-заданного количества[%]носителя,мл/мин2202404,898,95,0100,74,899,45,0101,299,80100,3Средняя величина x100,05Стандартное отклонение sx0,353Относительноестандартное 60,353отклонение sxrelКритерии допуска коэффициент вариации ≤3% выполнен. Устойчивостьметода удовлетворительная.Контроль качества стандартных образцов Дилепта необходимо проводить попоказателю «Остаточные органические растворители» с помощью метода ГЖХ.Норма – содержание этилацетата не более 0,2%.803.4.

Количественное определение стандартных образцов Дилептаметодом Кьельдаля.Дилепт является по своему строению метиловым эфиром N-капроил-Lпролил-L-тирозина, таким образом наличие азота позволяет использовать методКъельдаля для количественного определения стандартных образцов.АнализпроводилипометодикеГФXIIIизд.Дилептявляетсятрудносжигаемым соединением, поэтому в процессе минерализации использовалиметаллический селен в качестве катализатора.Содержание Дилепта в стандартном образце (Х%) рассчитывают поформуле:Х%=ГдеV1 – объем кислоты хлористоводородной, пошедший на титрованиеиспытуемого раствора, мл;V2 – объем кислоты хлористоводородной, пошедший на титрованиеконтрольного раствора, мл;К – поправочный коэффициент;28 – молекулярная масса азота, входящего в состав Дилепта;390,48 – молекулярная масса Дилепта;Mнав – масса навески Дилепта, г.1 мл кислоты хлористоводородной соответствует 0,001401 г азота.Результаты количественного определения стандартных образцов Дилептапредставлены в таблице 16.81Таблица 16Результаты количественного определения стандартных образцов ДилептаНомерКоличественное содержание, %СреднееСерииЗначение,%I99,94100,1299,91100,23100,02100,04II100,1499,9299,9199,90100,0399,99III99,90100,2099,5799,7399,8199,84In=5, x=100,04 s=0,132x±IIx=100,04 ± 0,16 Доверит интервал ср = 0,16%n=5, x=99,99 s=0,104x±IIIx=0,13 (Р=0,95)x=99,99 ± 0,13 Доверит интервал ср = 0,16%n=5, x=99,84 s=0,22x±x=0,16 (Р=0,95)x= 0,27 (Р=0,95)x=99,99 ± 0,27 Доверит интервал ср = 0,27%Из результатов проведенного анализа трех серий стандартных образцоввидно, что содержание Дилепта колеблется от 99,57 до 100,2%.

Результаты могутбыть связаны с погрешностью самого метода количественного определения.Таким образом установлена норма количественного содержания Дилепта встандартных образцах не менее 99,5% и не более 100,5%.Метод Кьельдаля является фармакопейным методом анализа, поэтомупроведение его валидации не требуется, согласно требованиям ICH.823.5. Установление показателей качества и норм для стандартных образцовДилептаПослепроведенияполногофармакопейногоанализаизучаемыхстандартных образцов, нами выбраны показатели качества, необходимые длявключения в нормативную документацию, а также установлены научнообоснованные нормы по ним.

Показатели качества и нормы для изучаемыхстандартных образцов представлены в таблице № 17.Таблица 17Спецификация контроля качества стандартного образца ДилептаПоказатели иРезультатыметодыIОписаниеIIУстановленныеУстановленныенорма качестванормы качествадля субстанциидля СОIIIБелый кристаллический порошокВизуальноРастворимостьГФ XIII, Том 1, стр.Практически нерастворим в воде, умеренно растворим вэтилацетате, растворим в ацетоне, легко растворим в этаноле.531(ОФС.1.2.1.0005.15)ПодлинностьУФ-0,01% раствор в 0,01% раствор вспектрофотометрияспиртев спирте в областиобласти от 250 от 250 до 350 нм83до350долженнм должениметьиметь максимуммаксимумпоглощенияпоглощенияоколо 278±2нм,около 278±2нм.иминимумпоглощенияоколо 218±0,2.ИК-спектрометрияИК-спектрИК-спектрстандартногостандартногообразца должен образца долженсовпадать с ИК- совпадать с ИКспектромна спектромнаприлагаемомприлагаемомрисунке.рисунке.ЯМР-ПоказательЯМР-спектрспектроскопияотсутствуетстандартногообразца долженсовпадатьсЯМР-спектромприлагаемогорисунка.ПрозрачностьГФ XIII, Том 1, стр.542Раствор 0,5 г препарата Прозрачный или не Растворв10спиртамлэтилового болеедолженпрозрачным0,5гэталонного препарата в 10 млбыть раствора I (5 % этилового спиртараствор в этаноле)долженбыть84(ОФС.1.2.1.0007.15)ЦветностьГФ XIII, Том 1, стр.прозрачнымБесцветныйРаствор,приготовленныйдляРаствор,приготовленныйтеста «Прозрачность»,для545должен«Прозрачность»,(ОФС.1.21.0008.15)бесцветнымбытьдолжентестабытьбесцветнымТемпература121,0-121,5- 121,0-От 119 до 124От 121 до 123плавления, 0С123,0122,5-49,60-50,80 -49,20От -48,0 до – 53,0От -49,0 до -51,00,150,12ПоказательНе более 0,2123,0ГФ XIII, Том 1, стр.560(ОФС.1.2.1.0011.15)Удельноевращение, оГФ XIII, Том 1, стр.605(ОФС.1.2.1.0018.15)Вода, %0,13отсутствуетГФ XIII, Том 1, стр.719(ОФС.1.2.3.0002.15)Сульфатная зола, % 0,059ГФ XIII, Том 1, стр.7140,0710,089Не более 0,1Не более 0,185(ОФС.1.2.2.2.0014.15)Тяжелые металлы0,00090,0010,151±0,0110,159±0,0130,001Не более 0,001%Не более 0,001%ПоказательотсутствуетЭтилацетатаболее 0,2%ГФ XIII, Том 1, стр.708(ОФС.1.2.2.2.0010.15)Остаточныеорганическиерастворители0,110±0,014неГЖХПосторонниепримесиНе обнаруженоИндивидуальнойСуммавсехпримеси не более единичных0,5 %примесейболее 0,1%ВЭЖХКоличественноесодержаниеМетод Къельдаля100,0499,99 99,84неНе менее 98,5% Не менее 99,5%ине100,5%более ине100,5%более86ГЛАВА 4.

Изучение физико-химических свойств и разработка методиканализа стандартного образца ГБ-115.4.1 Разработка методик анализа стандартного образца ГБ-115.В процессе проведенного исследования физико-химических свойствстандартного образца ГБ-115 изучены три серии субстанции по следующимпоказателям:внешнийвид,растворимостьвразличныхрастворителях,прозрачность и цветность полученных растворов, температура плавления,удельное вращение, а также вода и сульфатная зола. По полученным результатамбыли установлены нормы контроля качества стандартных образцов.4.1.1. Внешний вид стандартного образца ГБ-115По внешнему виду все образцы стандартного образца ГБ-115 представлялисобой белый или белый с кремоватым или желтоватым оттенком кристаллическийпорошок. Оценку проводили визуально, согласно методики ГФ XIII, Том 1, стр.179.

По результатам определения была установлена норма по показателю«Описание» - белый или белый с кремоватым или желтоватым оттенкомкристаллический порошок.4.1.2. Растворимость стандартного образца ГБ-115Определение растворимости проводили по методике ГФ XIII, Том 1, стр.531.Растворимость определяли в следующих растворителях: вода, гексан,хлороформ,этанол(95%),диоксан,ацетон,диметилформамид,диметилсульфоксид. Все изученные серии субстанции, предназначенной дляполучения стандартного образца ГБ-115 практически нерастворимы в воде, оченьмало растворимы в хлороформе, ацетоне, мало растворимы в гексане, этаноле87(95%), диоксане, легко растворимы в диметилсульфоксиде и легко растворимы вдиметилформамиде. Результаты анализа представлены в таблице 18.Таблица 18Растворимость серий стандартных образцов ГБ-115 в различных растворителях№ серииIIIIIIРастворительВодаМенее чем 1:10000Хлороформ1:15001:15001:1500Ацетон1:14001:15001:1600Гексан1:1501:1501:160Этанол (95%)1:1501:1401:140Диоксан1:1201:1201:130Диметилсульфоксид1:0,51:0,51:0,7Диметилформамид1:0,61:0,61:0,6При контроле качества стандартного образца ГБ-115определятьрастворимостьстандартногообразцавводепредложено(практическинерастворим), в ацетоне (очень мало растворим), в этаноле (95%) (малорастворим) и диметилсульфоксиде (легко растворим).

Данные нормы совпадают сНД для фармакопейной субстанции, так как дополнительная очистка стандартныхобразцов не может изменить нормы по показателю «Растворимость».4.1.3. Прозрачность и цветность растворов стандартного образца ГБ115Какбылоизученоранее,сериисубстанцииГБ-115практическинерастворим в воде, для оценки этих показателей качества из полученногообразца были приготовлены 0,5% растворы субстанций в этиловом спирте (0,05 гв 10 мл 95% этанола). [43]88Прозрачность и степень мутности полученных растворов определяли пометодике ГФ XIII, Том 1, стр. 542, а цветность полученных растворов определялисогласно методике ГФ XIII, Том 1, стр.

535.Из данных, представленных в таблице 19, видно, что по показателю«Прозрачность» все растворы стандартного образца ГБ-115 в этиловом спирте95% являются прозрачными, а по показателю «Цветность» - бесцветными.Таблица 19Результаты определения прозрачности и цветности 0,5% растворов стандартныхобразцов ГБ-115 в этиловом спирте 95%№ серииIIIIIIПоказательПрозрачность Прозрачный Прозрачный ПрозрачныйЦветностьБесцветный Бесцветный БесцветныйНами установлены нормы по показателям «Прозрачность» и «Цветность»спиртовых растворов стандартного образца. 0,5 % спиртовые растворыстандартного образца ГБ-115 должны быть прозрачными и бесцветными.