Диссертация (Разработка фармакопейных стандартных образцов для лекарственных средств пептидной структуры), страница 8

Выделившийся аммиак отгоняют вприемник с 20 мл 4% раствора борной кислоты и 5 каплями смешанногоиндикатора. Собирают 100 мл отгона, затем титруют его 0,1 М растворомхлористоводородной кислоты до перехода окраски индикатора из зеленой вкрасно-фиолетовую. Параллельно проводят контрольный опыт.46ГЛАВА 3. Изучение физико-химических свойств и разработка методиканализа стандартного образца Дилепта.3.1 Разработка методик анализа стандартного образца Дилепта.В процессе проведенного исследования физико-химических свойствсубстанции Дилепта, предназначенные для создания стандартного образца, былиизучены три серии субстанции по следующим показателям: внешний вид,растворимость в различных растворителях, прозрачность и цветность полученныхрастворов, температура плавления, удельное вращение, а также вода, сульфатнаязола и тяжелые металлы.

По полученным результатам были установлены нормыконтроля качества стандартных образцов.3.1.1. Внешний вид стандартного образца ДилептаПо внешнему виду все образцы субстанции Дилепта, предназначенные длясоздания стандартного образца, представляли собой белый кристаллическийпорошок.

Оценку проводили визуально, согласно методики ГФ XIII, Том 1 стр.179. По результатам определения была установлена норма для стандартногообразца по показателю «Описание» - белый кристаллический порошок.3.1.2. Растворимость стандартного образца ДилептаОпределение растворимости проводили по методике ГФ XIII, Том 1, стр.531.Растворимость определяли в следующих растворителях: вода, гексан,толуол, хлороформ, этанол (95%), этилацетат, диоксан, ацетон. Все изученныесерии субстанции Дилепта, предназначенные для создания стандартного образца,практически нерастворимы в воде, гексане и толуоле, умеренно растворимы вэтилацетате, легко растворимы в спирте и хлороформе; растворимы в ацетоне идиоксане.Результаты анализа представлены в таблице 1.47Таблица 1Растворимость стандартных образцов Дилепта в различных растворителях№ серииIIIIIIРастворительВодаМенее чем 1:10000ГексанМенее чем 1:10000ТолуолМенее чем 1:10000Этанол (95%)1:101:101:10Этилацетат1:601:551:60Диоксан1:201:251:20Ацетон1:151:151:15Хлороформ1:51:51:5При контроле качества стандартного образца Дилепта предложеноопределятьрастворимостьстандартногообразцавводе(практическинерастворим), этилацетате (умеренно растворим), ацетоне (растворим) и этаноле(легко растворим).Данные нормы совпадают с НД для фармакопейнойсубстанции, так как увеличенная степень чистоты стандартного образца не можетизменять показатель «Растворимость».3.1.3.

Прозрачность и цветность растворов стандартного образцаДилептаКак было изучено раннее, серии субстанции Дилепта практическинерастворимы в воде, для оценки этих показателей качества, из полученногообразца были приготовлены 0,5% растворы в этиловом спирте (0,05 г в 10 мл 95%этанола).Прозрачность и степень мутности полученных растворов определяли пометодике ГФ XIII, Том 1, стр. 542, а цветность полученных растворов определялисогласно методике ГФ XIII, Том 1, стр. 535.48Из данных, представленных в таблице 2, видно, что по показателю«Прозрачность» все растворы стандартного образца Дилепта в этиловом спирте95% являются прозрачными или по мутности не превышают эталон I, а попоказателю «Цветность» - бесцветные.

В ходе наших исследований ненаблюдалось изменений этих показателей, что может свидетельствовать опостоянстве состава стандартного образца.Таблица 2Результаты определения прозрачности и цветности 0,5% растворов стандартныхобразцов Дилепта в этиловом спирте 95%№ серииIIIIIIПоказательПрозрачность Прозрачный Прозрачный ПрозрачныйЦветностьБесцветный Бесцветный БесцветныйТаким образом нами установлены нормы по показателям «Прозрачность» и«Цветность» спиртовых растворов стандартного образца. 0,5% спиртовыерастворы стандартного образца должны быть прозрачными и бесцветными.3.1.4.

Определение температуры плавления стандартного образцаДилептаОпределение температуры плавления проводили со скоростью подъематемпературы 0,5-1 °С в минуту по методике ГФ XIII, Том 1 стр. 560.Предварительно высушенные образцы препарата плавились в интервале 119– 125С. Каждый отдельный образец субстанции Дилепта плавился в пределах 1-2 Счетко, без видимого разложения. Результаты представлены в таблице № 3. Дляпроведенияконтролякачествастандартныхобразцовпрепаратабылиустановлены нормы по показателю «Температура плавления», а именно от 121 до123 С0.

Результаты исследования показывают, что субстанция, предназначенная49для создания стандартного образца, более очищенная – пределы по данномупоказателю могут быть сужены в отличие от НД для фармакопейной субстанции.3.1.5. Определение удельного вращения растворов стандартногообразца ДилептаИзучение фармакопейной субстанции, позволило предположить наличие уэтого вещества двух асимметрических атомов углерода, что в свою очередьобуславливает наличие оптической активности.

[43] В связи с этим целесообразноопределять удельное вращение растворов стандартных образцов препарата.Рассчитывали удельное вращение для 2% раствора Дилепта в этаноле (95%) пометодике ГФ XIII, Том 1, стр. 605. Значение удельного вращения растворовДилепта находится в интервале от -49 до -510 и, следовательно, должны бытьвключены в нормативную документацию на полученный стандартный образец.Изменение угла вращения растворов стандартного образца свидетельствует оненадлежащем качестве и невозможности использования СО по назначению.Полученные результаты определения удельного вращения представлены втаблице № 3.3.1.6.

Определение содержания воды в стандартном образце ДилептаОпределение воды в стандартных образцах Дилепта проводили согласнометодике ГФ XIII, Том 1, стр. 719. Содержание воды определяли методомК.Фишера. Результаты представлены в таблице № 3. Включение данногопоказателя в НД на разрабатываемый стандартный образец необходимо, следуясовременным требованиям ведущих фармакопей, таких как ГФ РФ, Американскаяи Европейская Фармакопеи.50Таблица 3Результаты определения температуры плавления, удельного вращения исодержания воды для стандартных образцов Дилепта№ серииIIIIIIТемпература плавления121,0-123,0121,5-122,5121,0-123,0Вода0,15%0,12%0,13%Удельное вращение-49,60-50,80-49,20Показатель3.1.7. Определение сульфатной золы стандартных образцов ДилептаОпределение показателя «Сульфатная зола» проводили согласно методикеГФ XIII, том 1, стр.

714. Полученные результаты представлены в таблице № 4.Оценивая полученные результаты, был сделан вывод о необходимости включенияв ФС на разрабатываемый стандартный образец нормы не более 0,1 %, также каки для фармакопейной субстанции.3.1.8. Определение тяжелых металлов в стандартных образцах ДилептаОпределение показателя «Тяжелые металлы» проводили согласно методикеГФ XIII, том 1, стр. 708. Полученные результаты представлены в таблице № 4.Оценивая полученные результаты, был сделан вывод о необходимости включенияв ФС на разрабатываемый стандартный образец нормы не более 0,001 %, такжекак и для фармакопейной субстанции.51Таблица 4Результаты определения сульфатной золы и тяжелых металлов встандартных образцах Дилепта№ серииIIIIIIСодержание сульфатной золы0,0590,0710,089Тяжелые металлы0,00090,0010,0013.2.

Изучение спектральных характеристик стандартного образцаДилепта3.2.1. УФ-спектрофотометрия в анализе стандартного образца ДилептаИзучив литературные данные, а также ранее проведённые исследования[43], посвященные анализу субстанции Дилепта, нами выбрана методика УФспектрофотометрии,какодногоизметодовопределенияподлинностистандартных образцов. Наличие остатка тирозина в структуре Дилепта,обуславливает избирательное поглощение УФ-света, являясь хромофором.Так как для анализа стандартных образцов, в отличие от анализафармакопейной субстанции необходимо введение дополнительных параметровоценки подлинности нами были предприняты попытки установления новых норм,а именно минимумов поглощения. Для проверки спектральных свойств, готовили0,01 и 0,001 % спиртовые растворы стандартных образцов Дилепта. Спиртэтиловый в качестве растворителя был выбран в связи с особенностямирастворимости препарата.

Спектры снимали в интервале от 200 до 350 нм.Полученные спектры имеют четкие максимумы и минимумы поглощения. Нарис.3 и рис.4 представлены типичные спектры стандартных образцов Дилепта вэтаноле.52Рисунок 3. Типичный УФ-спектр 0,01 % раствора Дилепта в этаноле.Рисунок 4. Типичный УФ-спектр 0,001 % раствора Дилепта в этаноле.53Нами подтверждено, что полученные спектры 0,01% растворов Дилепта вэтаноле имеют характерный максимум поглощения длине волны около 278 нм, всвою очередь полученные спектры 0,001 % растворов Дилепта имеют максимумыпоглощения при длинах волн около 225 нм, 207 нм и 278 нм. А также былиустановлены характерные минимумы при следующих длинах волн – 249 нм и 218нм.В таблице № 5 представлены основные спектральные характеристикиполученных спектров поглощения.Таблица 5Основные спектральные характеристики растворов стандартного образца Дилептав этаноле (95%)Длина волны, нмОптическаяМолярныйКонцентрацияплотностькоэффициентрастворовпоглощенияМаксимумы207±0,20,430159020,01%225±0,20,30911427278±0,20,435163900,001%0,01%Минимумы218±0,20,27010173249±0,20,0501883НаличиевУФ-спектраххарактерныхмаксимумовиминимумовпоглощения, а также относительно высокие значения молярных показателейпоглощенияпозволяютиспользоватьметодУФ-спектрофотометриидляопределения подлинности стандартных образцов, а также демонстрирует54необходимость включения данного метода в нормативную документацию наполученные стандартные образцы.