Диссертация (1141384), страница 10
Текст из файла (страница 10)
Устойчивостьметода удовлетворительная.643.3.2. Газо-жидкостная хроматография в анализе стандартных образцовДилептаСтандартные образцы Дилепта, получают из фармакопейной субстанции,путем кристаллизации из этилацетата при соотношении 1:3,5 с добавлением 510% активированного угля. Поскольку этот растворитель может присутствовать встанлартном образце Дилепта, необходимо контролировать в ней его количество.ПотребованиямОФС«Остаточныеорганическиерастворители»содержание этилацетата, как растворителя 3-го класса токсичности, допускаетсяне более 0,5% (5000 ррм).Намиразработанагазохроматографическаяболееметодикачувствительнаяопределенияиостаточныхселективнаяорганическихрастворителей с применением статического парофазного метода ГХ- HS нагазовом хроматографе, снабженным HS-устройством для отбора проб (дозаторомравновесного пара).
В таблице 8 представлены условия хроматографирования, втаблице № 9 - параметры статического пробоотборника-HS.Таблица 8Хроматографические условия определения остаточных органическихрастворителей в стандартных образцах ДилептаДетекторТемператураПламенно-ионизационный детектор (ПИД).230 оСдетектораТемператураинжектора210оСТемператураНачальная температура 50оС в течение 4 мин., затемтермостата колонки вповышение температуры со скоростью 15оС/мин.
дорежимепрограммирования200оС и удерживается в течение 5 мин.65Газ носитель (азот)Скорость потока 4,9 мл/мин.Сплит-системаДеление потока 1:5ВодородСкорость потока - 30 мл/мин.ВоздухСкорость потока - 300 мл/мин.Таблица 9Параметры статического парофазного пробоотборника85 оСТемпература head space виалыВремя термостатирования (уравновешивания) head 40 мин.space виалыТемпература линии переноса135 оСHS-давление (давление наддува виалы)0,7 МпаВремя нагнетания (подачи под давлением)5 мин.Время отбора пробы10 секОбъём вводимой дозы равновесного пара1,0 млМетодика проведения анализа.Дляоценкисодержанияостаточногоорганическогорастворителяэтилацетата в стандартных образцах Дилепта был предложен метод внутреннегостандарта.Внутреннимстандартом былвыбранбутилацетат,растворомсравнения – диметилсульфоксид.I.
Приготовление стандартных и испытуемых растворов.1. Приготовление раствора внутреннего стандарта: в мерную колбувместимостью 100 мл отмеривали 20 мл диметилсульфоксида, далее вовзвешенную колбу помещали около 0,5 г (точная навеска в граммах)66бутилацетата, доводили объем раствора в колбе диметилсульфоксидом до метки,перемешивали (раствор А).
1 мл полученного раствора переносили в мернуюколбу вместимостью 10 мл, доводили объем раствора в колбе до метки тем жерастворителем, перемешивали (раствор Б). Концентрация раствора внутреннегостандарта 0,5 мг/мл.2. Приготовление раствора для определения поправочного коэффициента(раствор В): около 0,5 г (точная навеска) этилацетата и около 0,5 г (точнаянавеска) бутилацетата помещали в мерную колбу вместимостью 100 мл,наполненную наполовину диметилсульфоксидом, доводили объем раствора вколбе до метки тем же растворителем, перемешивали. 1 мл полученного растворапереносили в мерную колбу вместимостью 10 мл, доводили объем раствора вколбе до метки тем же растворителем, перемешивали.
Концентрации обоихвеществ в растворе 0,5 мг/мл.3.Приготовлениерастворадляпроверкипригодностихроматографической системы (раствор С): около 0,05 г (точная навеска)этилацетата и 0,05 г (точная навеска) бутилацетата помещали в мерную колбувместимостью100мл,наполненнуюнаполовинудиметилсульфоксидом,доводили объем раствора в колбе до метки тем же растворителем, перемешивали.1 мл полученного раствора переносили в мерную колбу вместимостью 10 мл,доводили объем раствора до метки тем же растворителем, перемешивали.Концентрации обоих веществ в растворе 0,05 мг/мл.4.
Контрольный раствор: 2,0 мл диметилсульфоксида помещали в headspace виалу вместимостью 10 мл, герметично закупоривают крышками стефлоновыми прокладками и обжимают горловины виал алюминиевымикрышками.5. Приготовление испытуемых растворов стандартных образцов Дилепта:около 0,2(точнаянавеска)стандартного образца,субстанции, предназначеннойдлясозданияпомещали в виалы для парофазной экстракции,прибавляли 2 мл раствора Б, перемешивали.67Растворы используют свежеприготовленными.II. Проверка пригодности хроматографической системы.В автоматическом режиме в указанных условиях (Таблицы № 7-8)дозатор хроматографаввводится паро-газовая фаза раствора С (раствора дляпроверки пригодности хроматографической системы в объеме 1,0 см3.
Раствор Схроматографируют последовательно в 6 повторностях. На хроматограммахрегистрируют пики этилацетата и бутилацетата. Результаты определениясчитаются достоверными, если выполняются требования теста «Проверкапригодности хроматографической системы»:- порядок выхода пиков растворителей:1- этилацетат; 2- бутилацетат; 3- диметилсульфоксид.- эффективность колонки, рассчитанная по пику этилацетата, должна быть неменее 5 000 теоретических тарелок;- разрешение между пиками этилацетата и бутилацетата должно быть не менее2,0;- коэффициент асимметрии пика этилацетата должен быть не более 1,5;- относительное стандартное отклонение площадей пиков этилацетата (RSD) порезультатам 6 измерений не превышает 10,0%.На рис.9 представлена типичная ГЖХ-хроматограмма раствора проверкипригодности хроматографической системы со следующими параметрами:- время выхода пика этилацетата- 5, 31 мин.;- время выхода пика бутилацетата - 8,54 мин.;- относительное время выхода этилацетата – 0,62;- разрешение (n, n+1) – 23,63;- асимметрия пика этилацетата - 1,07;- число теоретических тарелок по пику этилацетата (ТТ) – 21403;68- относительное стандартное отклонениепо площади пика этилацетата (RSD)-8,85%.Рисунок 9.
Типичная ГЖХ-хроматограмма раствора для проверки пригодностихроматографической системы(1-этилацетат; 2- бутилацетат)Относительное стандартное отклонение площадей пика этилацетата (RSD)по 6 последовательным введениям раствора для проверки пригодности69хроматографической системы рассчитывали с помощью программы Excel поданным, представленным в таблице № 10.Таблица № 10Расчет относительного стандартного отклонения площадей пика этилацетата(RSD) в растворе ППХСПлощадьФайл хроматограммыmV*секZB251433.chw28,14ZB251502.chw26,86ZB251537.chw27,72ZB251611.chw28,29ZB251645.chw27,45ZB251728.chw26,53Среднеезначениеэтилацетата,площадипика27,50Дисперсия0,406Стандартное отклонение2,435Относительноепикастандартноеотклонение (RSD), %8,85После проведения процедуры проверки пригодности хроматографическойсистемы в описанных выше хроматографических условиях последовательнохроматографируют контрольный раствор, испытуемый раствор и стандартныйраствор В.
Были исследованы 3 различные серии субстанции Дилепта,предназначенных для создания стандартного образца,для количественной70оценки содержания в них остаточного органического растворителя - этилацетата.Каждый стандартный раствор и каждый из испытуемых растворов каждой серииготовился в трех повторностях.На рис.10 представлена типичная ГЖХ-хроматограмма стандартногораствора В.Рисунок 10. Типичная ГЖХ-хроматограмма стандартного раствора В(1-этилацетат; 2- бутилацетат)71На рис.11 представлена типичная ГЖХ-хроматограмма исследуемыхстандартных образцов Дилепта.Рисунок 11. Типичная ГЖХ-хроматограмма испытуемого образца Дилепта(1-этилацетат; 2- бутилацетат)72III.Количественное определение этилацетата в стандартном образцеДилепта.По полученным хроматограммам рассчитывали количественное содержаниеэтилацетата в 3-х испытуемых сериях стандартных образцов Дилепта двумяальтернативными способами.IIIa.
Обработка полученных результатов с помощью компьютернойпрограммы МультиХром для Windows версия 1.5.Для этого из раствора В, содержащего одинаковые концентрацииэтилацетата и бутилацетата (0,5 мг/мл), готовили 5 калибровочных растворов сконцентрациями обоих веществ 0,05; 0,10; 0,20; 0,30; 0,40 мг/мл. Каждый изкалибровочных растворов хроматографировали 6 раз, вычисляя средние значенияплощадей, уравнение калибровочного графика и коэффициент корреляции R2.Калибровочный график (на рис.12) линеен в этом диапазоне концентраций иописывался уравнением: Y= 0,0025х - 0, 0155, где х - площадь пика этилацетата.Коэффициент корреляции R2 = 0,9979.73Рисунок 12.
Калибровочный график для определения этилацетата в стандартныхобразцах Дилепта методом ГЖХIIIб. Количественный расчет по формуле.Содержание этилацетата в процентах (Хi%) рассчитывали по формуле:=где Аисп. – отношение площадей пиков этилацетата и внутреннего стандарта(бутилацетата) на хроматограмме испытуемого раствора;74Аст = К – поправочный коэффициент (отношение площадей пиков этилацетата ибутилацетата на хроматограмместандартного раствора В). Для этилацетата к =2,42.Сст – концентрация этилацетата в стандартном растворе В, %;mисп – масса навески анализируемой пробы, г;V – объем растворителя (диметилсульфоксида), взятый для растворенияанализируемой пробы, мл.Результатыопределениясодержанияостаточногоэтилацетатавстандартных образцах Дилепта представлены в Таблице № 11.Таблица 11Содержания этилацетата (%) в стандартных образцах Дилепта№ п/пНомер серииСодержания этилацетата, % ± RSD1.I0,151 ± 0,0112.II0,159 ± 0,0133.III0,110 ± 0,014СелективностьНа хроматограммах, полученных при введении ДМСО без содержанияэтилацетатаибутилацетата,наблюдаетсяединичныйпиксвременемудерживания, соответствующим ДМСО; прочие пики отсутствуют, что говорит оселективности метода.ЛинейностьЛинейность – способность методики в диапазоне применения даватьвеличинысигнала,компонента.прямопропорциональныесодержаниюопределяемого75С целью оценки линейности методики осуществлялось построениекалибровочного графика.
Для построения калибровочного графика готовиликалибровочныемодельныесмеси. Готовили5калибровочныхобразцов,содержащих 0,05; 0,10; 0,20; 0,30; 0,40 мг/мл этилацетата соответственно и 0,1мг/мл внутреннего стандарта – бутилацетата. Проводили анализ калибровочныхобразцов, и по полученным данным строили калибровочный график с помощьюпрограммыMicrosoftExcel2010. Оценивализависимостьконцентрацииэтилацетата в калибровочном образце (ось Х) от отношения площадихроматографического пика этилацетата к площади хроматографического пика ВС(метод ВС). При этом определяли характер зависимости, тип аппроксимации,достоверность аппроксимации и коэффициенты соответствующего уравнениярегрессии.Представленныеопределяемоговеществаданныесвидетельствуюткалибровочныеграфикиотом,чтоописываютсядлялинейнойфункцией с высоким показателем достоверности аппроксимации.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
