Диссертация (1141384), страница 14
Текст из файла (страница 14)
Были исследованы 3 различные серии стандартных образцов ГБ-115для количественной оценки содержанияв них остаточного органического109растворителя - этанола. Каждый стандартный раствор и каждый из испытуемыхрастворов каждой серии готовился в трех повторностях.На рис.21 представлена типичная ГЖХ-хроматограмма стандартногораствора В.Рисунок 21. Типичная ГЖХ-хроматограмма стандартного раствора В(1- этанол; 2- н- пропанол)На рис.22 представлена типичная ГЖХ-хроматограмма исследуемыхстандартных образцов ГБ-115.110Рисунок 22. Типичная ГЖХ-хроматограмма испытуемого образца ГБ-115(1- этанол; 2- н- пропанол; 3- диметилсульфоксид)По полученным хроматограммам рассчитывали количественное содержаниеэтанола в 3-х испытуемых сериях ГБ-115 двумя альтернативными способами.111a. Обработка полученных результатов с помощью компьютернойпрограммы МультиХром для Windows версия 1.5.Для этого из раствора В, содержащего одинаковые концентрации этанола ин-пропанола (0,5 мг/мл), готовили 5 калибровочных растворов с концентрациямикаждого из веществ 0,05; 0,10; 0,20; 0,30; 0,40 мг/мл.
Каждый из калибровочныхрастворов хроматографировалиуравнениекалибровочного6 раз, вычисляя средние значения площадей,графикаикоэффициенткорреляцииR2.Калибровочный график (на рис.23) линеен в этом диапазоне концентраций иописывался уравнением:Y= 0,0104х – 0, 0002, где х - площадь пика этанола.Коэффициент корреляции R2 = 0,9997.Рисунок 23. Калибровочный график для определения этанола в стандартныхобразцах ГБ-115 методом ГЖХ112б.
Количественный расчет по формуле.Содержание этанола в процентах (Хi%) рассчитывали по формуле:=где Аисп. – отношение площадей пиков этанола и внутреннего стандарта (нпропанола) на хроматограмме испытуемого раствора;Аст = К – поправочный коэффициент (отношение площадей пиков этанола и нпропанола на хроматограмме стандартного раствора В). Для этанола К = 1,63.Сст – концентрация этанола в стандартном растворе В, %;mисп – масса навески анализируемой пробы, г;V – Объем растворителя (диметилсульфоксида), взятый для растворенияанализируемой пробы, мл.Результаты определения содержания этанола в стандартных образцах ГБ115 представлены в Таблице 28.Таблица 28Содержания этанола (%) в стандартных образцах ГБ-115№ п/пНомер серииСодержания этанола, % ± RSD1.I0,052 ± 0,0142.II0,078 ± 0,0113.III0,062 ± 0,013113СелективностьНа хроматограммах, полученных при введении ДМСО без содержанияэтанола и н-пропанола, наблюдается единичный пик с временем удерживания,соответствующим ДМСО; прочие пики отсутствуют, что говорит о селективностиметода.ЛинейностьС целью оценки линейности методики осуществлялось построениекалибровочного графика.
Для построения калибровочного графика готовиликалибровочныемодельныесмеси. Готовили5калибровочныхобразцов,содержащие 0,05; 0,10; 0,20; 0,30; 0,40 мг/мл этанола соответственно и 0,1 мг/млвнутреннего стандарта – н-пропанола. Проводили анализ калибровочныхобразцов, и по полученным данным строили калибровочный график с помощьюпрограммыMicrosoftExcel2010. Оценивализависимостьконцентрацииэтилацетата в калибровочном образце (ось Х) от отношения площадихроматографического пика этанола к площади хроматографического пикавнутреннего стандарта. При этом определяли характер зависимости, типаппроксимации,соответствующегодостоверностьуравненияаппроксимациирегрессии.икоэффициентыПредставленныеданныесвидетельствуют о том, что для определяемого вещества калибровочные графикиописываются линейной функцией с высоким показателем достоверностиаппроксимации. Коэффициент корреляции составил 0,99965, что соответствуеттребованиям НД (не менее 0,999).Был выполнен расчёт концентраций этанола по уравнению калибровочнойзависимости, после чего полученные результаты сравнивались с фактическими, азатем были рассчитаны значения относительной погрешности.114Таблица 29Концентрации этанола по уравнению калибровочной зависимостиC факт, мг/мл00,0500,100,200,300,4Отношениеплощади пика этанола к0площади пика ВСКалибровочная0,0716С рассчит, мг/млкривая № 10,126200,051ε, %02значенияотносительной00,24110,0992,15Полученные00,347900,201000,5600,403-1,45погрешности00,46880,296-0,59000,67соответствуюттребованиям НД (не более 5%).Правильность и прецизионностьОценку показателей правильности и прецизионности осуществляли путёмисследования образцов контроля качества (3 независимых образца каждойконцентрации).
Правильность и прецизионность определяли в течение 1 рабочегодня (внутри серии) и в течение нескольких дней (между сериями). Расчётконцентраций определяемых веществ в образцах контроля качества выполняли поуравнениюкалибровочногографика,полученноговсоставетекущейаналитической серии.Таблица 30Результаты оценки правильности и прецизионности методики (внутрисерии)введенонайдено(мг/мл)(мг/мл)найдено (мг/мл),среднее значение(n=5)S.D.RSD, %(n=5)(n=5)ε, %0,0480,050приемлемостиRSD < 5%,0,04790,05Критерий0,0023,334,20ε < 5%,1150,0490,0460,0470,2080,207RSD < 5%,0,2110,20770,0031,463,85ε < 5%,0,2100,20,2030,4180,407RSD < 5%,0,4050,40870,0061,562,17ε < 5%,0,4130,40,402Таблица 31Результаты оценки правильности и прецизионности методики (между 2-мясериями)найденовведенонайдено(мг/мл)(мг/мл)(мг/мл),среднеезначениеS.D.(n=10)RSD,%ε, %(n=10)(n=10)0,0480,10,04770,0500,0013,104,59Критерийприемлемости1160,0490,046RSD < 5%,0,047ε < 5%,0,0490,0480,0470,0450,0480,2080,2070,2110,2100,2030,2RSD < 5%,0,20680,0042,073,40ε < 5%,0,2090,2120,2080,1980,2030,4180,407RSD < 5%,0,40,4050,40640,0061,461,59ε < 5%,0,4130,4021170,4120,4050,4010,3990,403Правильность и прецизионность методики соответствуют требованиям НД(не более 5 %).Устойчивость, или робастность, системы испытывали при незначительномизменении параметров методикиопределения.
В данном случае менялитемпературу детектора и скорость потока газа-носителя.Таблица 32Результаты по показателю «Устойчивость»Температура Скорость Среднеедетекторапроцентноесодержание Среднеепотокааналита в испытуемом растворе, от значениегаза-заданного количества[%]носителя,мл/мин2202404,798,15,198,94,7101,45,199,398,50100,35Средняя величина x99,43Стандартное отклонение sx1,408Относительноеотклонение sxrelстандартное1,416118Критерии допуска коэффициент вариации ≤3% выполнен. Устойчивостьметода удовлетворительная.Контроль качества стандартных образцов ГБ-115 необходимо проводить попоказателю «Остаточные органические растворители» с помощью метода ГЖХ.Норма – содержание этанола не более 0,1%.4.4.КоличественноеопределениестандартныхобразцовГБ-115методом КьельдаляСодержание ГБ-115 в стандартном образце (X%) рассчитывают по формуле:гдеV1 – объем кислоты хлористоводородной, пошедший на титрование испытуемогораствора, млV2 - объем кислоты хлористоводородной, пошедший на титрование контрольногораствора, мл56 – молекулярная масса азота, входящего в состав ГБ-115434,52 – молекулярная масса ГБ-115mнав.
– масса навески ГБ-115, г1 мл кислоты хлористоводородной соответствует 0,001401 г азота.Результаты количественного определения ГБ-115 методом Къельдаляпредставлены в таблице 33.119Таблица 33Результаты количественного определения стандартных образцов ГБ-115НомерКоличественное содержание, %СреднеесерииЗначение,%I99,9199,6599,9099,81100,2099,73II100,1099,7699,8399,7099,8899,86III99,8799,9699,8199,9099,9199,87In=5, x=99,73 s=0,272x=99,73± 0,34, Доверит интервал ср = 0,341%x±IIn=5, x=99,86 s=0,154x±IIIx=0,19 (Р=0,95)x=99,86 ± 0,19 Доверит интервал ср = 0,19%n=5, x=99,87 s=0,06x±x=0,34 (Р=0,95)x= 0,075 (Р=0,95)x=99,87 ± 0,075 Доверит интервал ср = 0,075%Из результатов проведенного анализа стандартных образцов видно, чтосодержание ГБ-115 колеблется от 99,65 до 100,20 %.
Результаты могут бытьсвязаны с погрешностью самого метода количественного определения. Такимобразом была установлена норма количественного содержания ГБ-115 встандартных образцах не менее 99,5% и не более 100,5%.Метод Кьельдаля является фармакопейным методом анализа, поэтомупроведение его валидации не требуется, согласно требованиям ICH.1204.5.Установление показателей качества и норм для стандартныхобразцов ГБ-115Послепроведенияполногофармакопейногоанализаизучаемыхстандартных образцов, могут быть сформулированы показатели качества,необходимые для включения в нормативную документацию, а также могут бытьустановлены нормы. Показатели качества и нормы для изучаемых стандартныхобразцов представлены в таблице № 34.Таблица 34Спецификация контроля качества стандартных образцов ГБ-115Показатели иРезультатыметодыIОписаниеВизуальноРастворимостьГФ XIII, Том 1, стр.531IIУстановленныеУстановленныенорма качестванормы качествадля субстанциидля СОIIIБелый или белый с кремоватым или желтоватым оттенкомкристаллический порошок.Практически нерастворим в воде, очень мало растворим вацетоне, мало растворим в этаноле 95%, легко растворим вдиметилсульфоксиде.(ОФС.1.2.1.0005.15)ПодлинностьУФ-0,05% раствор в 0,04% раствор вспектрофотометрияспиртев спирте в областиобласти от 250 от 250 до 350 нм121до350нм должен иметь 2должен иметь 2 максимумамаксимумапоглощенияпоглощения при около 282±2нм и282±2нми 290±2нм, а также290±2нмминимум около287±0,2.ИК-спектрометрияИК-спектрИК-спектрстандартногостандартногообразца должен образца долженсовпадать с ИК- совпадать с ИКспектромна спектромнаприлагаемомприлагаемомрисунке.рисунке.ЯМР13СПоказательЯМР-спектрспектроскопияотсутствуетстандартногообразца долженсовпадатьсЯМР-спектромприлагаемогорисунка.ПрозрачностьГФ XIII, Том 1, стр.542Раствор 0,5 г препарата Прозрачный или не Растворв10спиртамлэтилового болеедолженпрозрачным0,5гэталонного препарата в 10 млбыть раствора I (5 % этилового спиртараствор в этаноле) долженбыть122(ОФС.1.2.1.0007.15)ЦветностьГФ XIII, Том 1, стр.прозрачнымРаствор,Бесцветный или не Раствор,для более GY6 (5 % приготовленный«Прозрачность», раствор в этаноле) длятестаприготовленныйтеста545должен(ОФС.1.21.0008.15)бесцветнымбыть«Прозрачность»,долженбытьбесцветнымТемпература177-177,5177,5-плавления, 0С178-179.0От 177,0 до 182,0От 177 до 179 сразложением178,5ГФ XIII, Том 1, стр.560(ОФС.1.2.1.0011.15)Удельное-9,3-9,0-10,0От -8,5 до -10,5От -8,5 до -10,50,050,100,09ПоказательНе более 0,2вращение, оГФ XIII, Том 1, стр.605(ОФС.1.2.1.0018.15)Вода, %отсутствуетГФ XIII, Том 1, стр.719(ОФС.1.2.3.0002.15)Сульфатная зола, % 0,045ГФ XIII, Том 1, стр.7140,0670,044Не более 0,1Не более 0,1123(ОФС.1.2.2.2.0014.15)Тяжелые металлы0,0010,0010,001Не более 0,001%Не более 0,001%ГФ XIII, Том 1, стр.708(ОФС.1.2.2.2.0010.15)Остаточные0,0520,078 0,062 ± Показательорганические±±растворители0,0140,0110,013Этанол не болееотсутствует0,1 %ИндивидуальноСуммарноеГЖХПосторонниеНе обнаруженопримесийВЭЖХпримесине содержаниеболее 0,5%.единичныхпримесейСуммарноеболее 0,1%содержаниепримесейненеболее 1%КоличественноесодержаниеМетод Къельдаля99,7399,6699,57От 99 до 101%Не менее 99,5%ине100,5%более124ОБЩИЕ ВЫВОДЫ1.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
