Диссертация (Разработка фармакопейных стандартных образцов для лекарственных средств пептидной структуры), страница 6

Политературнымданным,дляидентификациипептидовпроводятреакцииобразования солей и гидроксамовых кислот. Данная группа соединений обладаетамфотерными свойствами, так как соединения обладают как кислотными, так иосновнымифункциональнымигруппами.Карбоксильнаягруппаможетреагировать с неорганическими основаниями, наиболее характерными будутпродукты реакции с солями меди – образование темно-синего или синефиолетового раствора, или осадка [77, 78, 101].Наличие в структуре ГБ-115 остатка триптофана позволяет провестиреакцию с диэтилбензальдегидом в среде хлористоводородной кислоты принагревании – образуется раствор пурпурно-голубого цвета.Другим характерным свойством препаратов пептидной структуры являетсяспособность к гидролизу амидной связи – образование гидроксамовых кислот вкислой среде.Обнаружение полученных гидроксамовых кислот проводят с помощьюобразования окрашенных внутрикомплексных солей с соединениями железа (III)и меди (II).Продукты реакции зависят от pH среды и количестваиспользуемых реагентов [76].В ГФ X реакция образования гидроксамовых кислот рекомендована дляанализа лекарственных препаратов группы пенициллина, новокаина и др., также,как и пептиды, являющихся амидами [80].35Описано определение с помощью гидроксамовой реакции препаратовпептидной структуры – Дилепта и ноопепта с образованием темно-вишневогоокрашивания [55, 81, 82].Так как вышеуказанные реакции не являются специфическими для группыпрепаратовпептиднойструктуры,онинемогутбытьдостовернымподтверждением подлинности и использоваться для идентификации стандартныхобразцов.1.6.2.Титриметрические методы анализаСогласно отечественной и зарубежной нормативной документации однимиз наиболее часто используемых методов количественного определения являетсятитриметрический метод.Для препаратов пептидной структуры может быть предложено нескольковариантовтитриметрическогоколичественногоопределения,аименнотитрование в неводных средах и определение общего азота методом Кьельдаля[67, 70, 71, 72, 73, 80, 83, 84].Препараты пептидной структуры являются слабыми основаниями, в связи сэтим их растворяют в протогенных растворителях таких как муравьиная ибезводная уксусная кислота, а также уксусный ангидрид.

Титрантом являетсяхлорная кислота [72].Также для количественного анализа соединений, содержащих в своемсоставе атом азота, используется метод определения общего азота по Къельдалю.Метод Къельдаля включен в общие и частные статьи ведущих фармакопей мира.Количественное определение стандартных образцов необходимо проводитьнезависимым химическим способом без использования сличительных методов,таким образом титриметрические методы необходимы для включения внормативную документацию по показателю «Количественное содержание» [40].361.6.3.Спектральные методы анализаОптические методы анализа описаны и рекомендуются всеми ведущимифармакопеями мира. Для качественного и количественного анализа субстанций илекарственных форм препаратов пептидной структуры широко применяютсяспектральные методы, однако в анализе стандартных образцов спектральныеметоды могут быть использованы только в анализе подлинности.1.6.3.1.

УФ-спектрофотометрияМетодУФ-спектрофотометрииширокоиспользуетсяванализеподлинности субстанций и лекарственных форм и описан в большинстве ведущихфармакопей мира. В контроле качества метод используется для веществ,имеющих сопряженные кратные связи. Метод УФ-спектрофотометрии являетсянеспецифичным, однако необходим в контроле качества стандартных образцовкак независимый дополнительный метод [34, 36, 37, 64, 65, 66, 67, 69, 70, 71, 73].Изучение УФ-спектров лекарственных препаратов обычно проводят винтервале длин волн 200-350 нм, используя в качестве растворителей вещества,не поглощающие в исследуемой области спектра и не вступающие в реакции сисследуемым веществом [85, 86, 87, 88, 89].Соединения пептидной структуры имеют характерные полосы поглощенияи определяются наличием в структуре двух хромофорных групп.

Пептиднаягруппа проявляет слабое поглощение, которое наблюдается при 200-220 нм, аосновными хромофорами в соединениях пептидной структуры являются остаткиароматических аминокислот: триптофан (ГБ-115) и тирозин (Дилепт). Спектрыфармакопейных субстанций были изучены ранее и характеризовалисьдвумямаксимума поглощения при 282±2нм и 290±2нм для ГБ-115 и максимумомпоглощения при 278±2нм для Дилепта. [44, 55].371.6.3.2.

ИК-спектрометрияСпектроскопиявинфракрасной(ИК)областиспектраявляетсяраспространенным методом качественного анализа, позволяющим провестиидентификацию соединения, установить его структуру, провести анализ смесей, атакже анализ чистоты. Широкий диапазон применения ИК-спектрометрииобусловлен высокой чувствительностью к колебанию функциональных групп,изменениям в структуре [90, 91, 92, 93, 94].Пептидные препараты имеют две полосы поглощения «Амид I» и «АмидII». Находятся эти полосы в интервалах 1690-1630 и 1620-1590 см–1соответственно. Первая полоса характеризуется наличием карбонильной группы вструктуре препарата.

Вторая амидная полоса проявляется в первичных ивторичных амидах. [95, 96, 97, 98, 99, 105]В Японской и Британской фармакопеях одним из методов идентификациитриптофана и ацетилтриптофана предложен метод ИК- спектроскопии [65, 73].Необходимость получения ИК-спектра стандартного образца обусловленаиспользованием в последующем процессе идентификации, субстанций илекарственных форм препарата путем сопоставления рисунков спектров [40].Несмотря на получение ранее ИК-спектров фармакопейной субстанции, так какСО являются более чистыми соединениями, именно ИК-спектр СО необходимоиспользовать в дальнейшем контроле качества как фармакопейных субстанций,так и лекарственных форм исследуемых веществ.

[43, 54]1.6.3.3. ЯМР-спектроскопияМетод ЯМР может быть использован для проведения качественногоанализа, исследования или подтверждения структуры органических соединений,определения чистоты. Метод ЯМР-спектроскопии включен в монографиибольшинства ведущих фармакопей мира.38Получение спектров стандартных образцов необходимо для подтвержденияих качества по показателям «Подлинность» и «Посторонние примеси». МетодЯМР-спектроскопиидолженприменятьсявсовокупностисдругиминезависимыми методами анализа.В качестве растворителей должны использоваться соединения, которые неимеют собственных сигналов в исследуемой области и не взаимодействующие сраствореннымиспользуютсявеществом.Длядейтерированнаяподобныхвода,исследованийнаиболеечастохлороформ,дейтерированныйдиметилсульфоксид [100, 101, 102, 103, 104, 106].

Фармакопейные субстанции,исследуемых препаратов были ранее изучены с помощью метода ПМР, однакодля идентификации стандартных образцов исследуемых веществ необходимоиспользовать более селективный метод ЯМР С13. [43,54]1.6.4. Хроматографические методы анализаВ настоящее время в фармакопейном анализе применяются различные видыхроматографии,высокоэффективнаянапример,жидкостнаятонкослойнаяхроматографияхроматография(ВЭЖХ),(ТСХ),газо-жидкостнаяхроматография (ГЖХ).Ввиду низкой селективности и чувствительности метода ТСХ, данныйметод не может применяться в контроле качества стандартных образцовпрепаратов пептидной структуры. В свою очередь на основе исследований,проведенных в ФГБНУ «Научно-исследовательский институт фармакологииимени В.В.

Закусова» были продемонстрированы преимущества метода ВЭЖХ ванализе субстанции лекарственных препаратов ГБ-115 и Дилепт по показателю«Посторонние примеси».Метод ГЖХ используют в контроле качества стандартных образцов попоказателю «Остаточные органические растворители». Это связано с тем, что вотличие от субстанций количественное содержание остаточных органическихрастворителей должно контролироваться отдельно от показателя «Вода» методом39К.Фишера, в таком случае определение потери в массе при высушивании непроводят.1.6.4.1.Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ)В настоящее время методики ВЭЖХ выполняются с применением следующихспособовдетектирования:ультрафиолетовые,флуориметрические,масс-спектрометрические. Для анализа препаратов пептидной структуры чащеиспользуют обращенно-фазовую ВЭЖХ, где в качестве сорбентов наибольшеераспространениеполучилиобращенно-фазовыесорбентыспривитымиоктильными (С8) или октадецильными (С18) радикалами.