Диссертация (Клинико-лабораторное обоснование дифференцированной терапии мелазмы у женщин), страница 7

Степень прозрачностиоптическойсистемой,встроеннойвустройство для измерения.Поверхностный жир впитывался пленкой, которая при этом меняласвою прозрачность. После обратного отсчет прибор оповещал об окончаниисигналом.Интерпретация результатов: недостаток кожного сала ˂70нг/см2, норма– 70-180 нг/см2, избыток - ˃180 нг/см2КорнеометрияИзмерение увлажнённости кожи основано на измерении электрическойёмкости диэлектрической среды.

Измерительный датчик помещался строгоперпендикулярно на кожу с лёгким нажатием. При контакте с кожейизмерения начинались автоматически, сигнал оповещал о том, что измерениезакончено. Измерения проводились на коже щёк, а результат измеренийотображался на экране монитора компьютера.Интерпретация результатов: очень сухая кожа  30 у.е., сухая – 30-60у.е., увлажнённая - ˃60 у.е.рН-метрияpH-фактор является отрицательным десятичным логарифмом молярнойконцентрации ионов H+: pH = -lg [H+]. Его значение определяется уровнемводородных ионов (H+, протоны) и гидрокисд-ионов (ОН-) при диссоциацииводы: H20  H+ + OHИзмерение уровня pH-фактора проводилось стеклянным электродом.Стеклянный электрод заполнен внутренним буфером (Hg/Hg2Cl2 или42Ag/AgCl).

Датчик промывался в дистиллированной водой. Электрод датчикастрого перпендикулярно устанавливался на поверхности кожи с лёгкимнажатием, и после нажатия кнопки начиналось измерение. Измеренияпроводились также на коже щёк и заканчивались с возникновениемзвукового сигнала.Интерпретация результатов: кислая среда - ≤4,3ед., норма 4,4-5,5 ед.,щелочная ≥5,6 .МексаметрияМексаметрия проводилась для определения уровня пигментации(меланина) и эритермы (гемоглобина) фотометрическим методом. Измеренияоснованы на двухволновом принципе поглощения (одна длина волнысоответствует максимуму поглощения, другая - опорная, используется, чтобыизбежать влияния других пигментов).

В датчик встроен источник света трехдлин волн: зеленая X =(568±3)нм, красная X =(660±3)нм, инфракраснаяА=(870±10)нм, выбранных в соответствии со спектрами поглощения разныхвидов пигмента. Свет от источника попадает на кожу, часть поглощаетсяпигментами, а отраженный свет измеряется приемником.Чем больше хроматофора содержится в коже, тем большее количествосвета будет поглощено и, соответственно, тем меньше света отразится откожи и вернется обратно в измерительную систему датчика.

Источник иприемник излучения расположены таким образом, чтобы измерять толькодиффузный рассеянный свет. Поскольку количество излучаемого светаизвестно, то можно вычислить количество поглощенного кожей света,пропорционального количеству гемоглобина и меланина.Процесс измерения запускался автоматически, как только датчик снебольшим нажатием размещался на поверхности кожи. Метод измеренияотносится к наиболее точным, так как вариабельность показателей измерениясоставляет от 0 до 1000 (как при выявлении индекса пигментации, так и43эритемы),тоестьмалейшиеизмененияданныхизмеренийбудутзафиксированы.2.3.3. Лабораторные методы исследованияИсследование гормонального статусаНе зависимо от состояния репродуктивной системы обследуемыхженщин все пациентки проходили обследование с целью выявленияотклонений в гормональном статусе.

Анализировали содержание половыхгормонов в сыворотке крови: белковых (ФСГ, ЛГ) и стероидных (эстрадиол,тестостерон, прогестерон и кортизол) иммуноферментным методом. Такжеоценивалась функция щитовидной железы с анализом концентрации ТТГ, Т3,Т4 и антител АТ-ТТГ, АТ-ТПО при помощи иммуноферментного анализа.Забор крови производился либо в первую фазу менструального цикла(на 5-8 день у женщин с сохранённой менструальной функцией) либо влюбой день при менопаузе, а исследование гормонов в независимойлаборатории.Исследование маркеров ангиогенезаАнгиогенез является одним из компонентов воспалительного процесса.Васкулоэндотелиальный фактор роста (VEGF) является провоспалительнымцитокином, индуцирующим активность макрофагов и эндотелия.Концентрацию свободного фактора роста эндотелия сосудов (VEGF)определяли в сыворотке крови исходно до проведения терапии и послеокончания лечения.Забор образцов сыворотки крови больных мелазмой из кубитальнойвены проводили натощак в период с 8.00 до 9.00 час.

Сыворотку кровицентрифугировали в течение 10 мин при 2500хg, разливали по аликвотам ихранили в течение не более 3-х недель при температуре -40ºС до проведенияисследования.44КонцентрациюопределялиVEGFиммуноферментным методомвсывороткекрови«сэндвичевого» типа с использованиемстандартного набора реактивов «Quantikine human VEGF» («R&D SystemsInс.», США).

Принцип метода основан на связывании свободного VEGF,находящегося в сыворотке крови, с моноклональными антителами мышей,покрывающими стенки пробирок и биотинилированными поликлональнымикроличьими антителами 66 к человеческому VEGF, в свою очередьсвязывающимися со стрептавидином, конъюгированным со щелочнойфосфатазой. Результаты оценивали по интенсивности окраски при помощикомпьютерной программы, предназначенной для анализа результатовиммуноферментногоанализа.Повышениепроцессовангиогенезарегистрировалось при значении VEGF более 300пг/мл.Оксидазотафизиологических(NO)участвуетпроцессов,ввтомрегуляциичислебиохимическихвключающихирегуляциюсосудистого тонуса, плазменного и тромбоцитарного звеньев гемостаза,формированиеиммунногоответаинейротрансмиссию,торможениепролиферации гладкомышечных клеток.

Повышение синтеза NO (II) можетбыть одним из звеньев адаптации в патогенезе воспалительных процессов, атакже при выраженной его экспрессии выступать в качестве повреждающегофактором для человеческого организма, поддерживающим воспаление ипроцессы дегенерации тканей.У всех больных определялся уровень концентрации метаболитов оксидаазота по методу Метельской В.А. (2005 г.). Пациенты за 24 часа до заборасывороткикровиизкубитальнойвеныпридерживалисьдиеты,сисключением сырых овощей, копченостей, любых консервированныхпродуктов алкоголя и кофеинсодержащих напитков.Уровень NO в сыворотке крови определяли по методу Скрининга.

Последепротеинизации сыворотки крови с помощью этилового спирта ицентрифугирования, уровень суммарной концентрации нитратов и нитритовопределяли колориметрическим методом по развитию окраски в реакции45диазотирования нитритом сульфаниламида, входящего в состав реактиваГрисса. Восстановителем служил ванадия хлорид (Германия). Нормальнымипоказателями считались 40,8-45,6 ммоль/л (Метельская В.А., Туманова Н.Г.,2005).2.3.4.

Статистическая обработка результатов исследованияРегистрацияполученныхвисследованииданныхклинического,лабораторного и инструментального обследования больных производилась вамбулаторных картах и индивидуальных регистрационных картах после чегосоставлялись обобщённые компьютерные таблицы в целях быстрого ипростого занесения зарегистрированных результатов в программу длястатистическойобработкирезультатов.Вданномисследованиииспользовались методы вариационной статистики. Для сравнения числовыхданных использовался метод дисперсионного анализа ANOVA и t-критерийСтьюдента для 2-х независимых выборок.

Для сравнения непараметрическихданных применяли методы Круаскала-Уоллиса (для нескольких групп). Длянахождения различий между качественными показателями использовалиметод χ2 с поправкой Йетса на непрерывность, для вычисления которогоприбегали к построению «сетки 2х2» и «3х2», а также точный критерийФишера для небольших выборок.

Статистически значимыми считалисьотличия при р≤0,05 (95% уровень значимости) и р≤0,01 (99% уровеньзначимости).46ГЛАВА IIIРЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ3.1. Клиническая характеристика больных3.1.1. Жалобы больныхВсе пациентки (n=97), вошедшие в исследование, предъявляли жалобына появление очагов пигментации на коже лица. Анализ появления первыхжалоб,отражающихвозникновениемелазмы,позволилопределитьвозрастные параметры преимущественного начала заболевания, а также егосреднюю продолжительность у пациенток, которые приняли участие висследовании (табл.

№6).Таблица №6. Распределение больных по возрасту появления первыхклинических признаков мелазмыВозраст≤2526-3031-3536-4041-45≥ 46(лет)Кол-вобольных 11/11,34% 13/13,40% 15/15,46% 24/24,74% 27/27,84% 7/7,22%(абс/отн)Как видно из таблицы наиболее часто дебют появления дисхромии кожилица пациентки, вошедшие в исследование, отмечали в возрасте от 36 до 45лет (51/52,58%). Реже всего мелазма начиналась в возрасте старше 46 лет иравнозначно часто в периоды жизни от 18 до 35 лет.Изучение продолжительности заболевания позволило установить, что всреднем она составила 7,05±2,14 лет (рис.2).474.12%9.28%22.68%≤1 года2-5 лет6-10 лет63.92%≥ 11 летРисунок 2.

Распределение больных мелазмой по продолжительностизаболеванияДанные рисунка свидетельствуют о том, что в исследование вошлипациентки с преимущественной продолжительностью заболевания в течение6-10 лет, что было обусловлено наличием рецидивирующего течения, иусугубления выраженности пигментации с течением времени. Наиболеечасто больные при опросе высказывали свои предположения о временномхарактере возникших косметических недостатков при появлении первыхклинических проявлений мелазмы, однако, наличие рецидивов, а главное,формирование стойких изменений пигментации кожи лица, побуждалопациенток обращаться за информацией к ресурсам интернета и к врачамспециалистам.3.1.2.

Данные анамнеза жизни и заболеванияПри сборе данных анамнеза заболевания была проанализированазависимость появления первых клинических симптомов мелазмы отбеременности. Из 97 женщин, вошедших в исследование, детей имели73/75,26% пациентки, а беременности в анамнезе были зарегистрированы у4881/83,51% женщин.

Несмотря на то, что в литературных источникахупоминается,чтовбольшинствеслучаевмелазмапровоцируетсябеременностью, у пациенток, вошедших в данное исследование, былазафиксирована данная связь только в 31,96% случаев (31 женщина). Уостальных больных (66/68,04%) появление первых явлений дисхромии неассоциировалось с беременностью и родами.Выявление связи появления, как первых симптомов, так и рецидивовмелазмы с воздействием солнечных лучей позволил её констатировать у89/91,75%. Остальные пациентки данную взаимосвязь либо отрицали, либонемогличёткоеёопределить.Приболеедетальномопросеопродолжительности пребывания пациенток под воздействием прямыхсолнечных лучей было выявлено, что места с повышенной инсоляциейвошедшие в исследование женщины посещали в различной степени ипродолжительности (рис.

3).8.25%6.19%29.89%13.40%7-14 дней в год15-30 дней в год31-60 дней в годй42.27%61-90 дней в годболее 3-х месяцев в годРисунок 3. Распределение больных по количеству дней пребывания в местахс повышенной инсоляцией49Непосредственноенахождениебольныхмелазмойвстранахсповышенной инсоляцией с посещением пляжей было различным. Вбольшинстве случаев (70/72,16%) продолжительность инсоляции в среднемне превышала более 30 дней в год и только 6/6,19% женщин находились подвоздействием прямых солнечных лучей более чем три месяца в год. Такимобразом, не было установлено зависимости возникновения мелазмы отпродолжительности контакта с солнечным излучением.Помимо того проводилась регистрация посещения солярия женщинамисмелазмой.Былоустановлено,чтотолько21/21,65%пациентокпрактиковали посещение косметологических кабинетов с целью достиженияискусственного загара, при этом никто из женщин не превышал какэкспозиционные нормы, рекомендованные международным сообществом взависимости от типа кожи, так и количество разрешённых сеансов.Важно отметить, что 100% больных применяли фотопротекторы припребывании на открытом солнце, однако в большинстве случаев (79/81,44%)фактор защиты не превышал 20.Важным аспектом в характеристики больных мелазмой являетсянаследственность по меланодермиям.