Диссертация (Этолого-иммунологическая характеристика экспериментального десинхроноза в условиях искусственного освещения и применения мелатонина), страница 7

Показано, что убольных сахарным диабетом мелатонин обеспечивает защиту β-клеток на уровнеклеточных мембран, ядра, митохондрий [107, 181, 330].35Мелатонинчерезактивациюспецифическихрецепторовспособенстимулировать секрецию бикарбоната за счет повышения высвобождения кальцияв энтерохромаффинных клетках слизистой желудка, увеличивать секрециюамилазы и холецистокинина клетками поджелудочной железы [250, 413].Мелатонин предотвращает образование острых стрессовых язв желудка икишечника и ускоряет заживление хронических язв за счет увеличенияактивностиNO-синтазы,циклооксигеназы,приводящихкулучшениюмикроциркуляции слизистой оболочки [132, 152, 277].Ограничивающеедействиемелатонинанаростраковыхопухолейреализуется за счет прямых и опосредованных механизмов.

Отмечено прямоедействие мелатонина как онкостатического агента через активацию апоптозаопухолевых клеток [186, 201, 207, 397]. Показано, что применение мелатонинасовместно с ретиноевой кислотой при раке молочной железы, приводило кпрекращению роста и уменьшению количества раковых клеток за счет активацииих апоптоза [188, 303].

Различные исследования показали, что мелатонинспособствуетснижениюпрогрессированияопухолевогоростазасчетингибирования / блокирования клеточного цикла раковых клеток [136, 305, 363,396]. Важным механизмом посредничества мелатонина на ингибирующеедействие роста опухоли является подавление рецептора эпидермального факторароста и активности митоген-активируемой протеинкиназы [123, 298]. Другиевозможные механизмы касаются способности мелатонина уменьшать ангиогенези ограничивать пролиферацию эндотелиальных клеток путем ингибированиясосудистого эндотелиального фактора [103, 271, 249, 352].Опосредованные механизмы действия мелатонина на канцерогенез связаныс его антиоксидантными эффектами [211, 261, 266, 444].

Мелатонин, обладаяантиоксидантнымиэффектами,способствуетснижениювыраженностиокислительного стресса, связанного с химиотерапией и лучевой терапией прионкологических заболеваниях [318, 394]. Представлено большое количестводоказательств, демонстрирующих иммуномодулирующий потенциал мелатонинакак в условиях in vitro, так и - in vivo [148, 174, 198]. Некоторые исследования36показали, что мелатонин способствует увеличению массы иммунных органов вусловиях ослабления работы иммунной системы [231, 367]. С другой стороны,мелатониноказываетантипролиферативноедействиенаактивированныелимфоциты [145]. Мелатонин модулирует основные клеточные компонентыврожденной иммунной реакции, способствуя повышению количества NK-клетоки моноцитов в костном мозге [172]. Введение мелатонина способствует усилениюдеятельности NK-клеток селезенки и лимфатических узлов [112].

Мелатонинспособен повышать поглотительную способность фагоцитов [385, 438].Espino J. С. с соавторами установлена способность мелатонина ксамостоятельной регуляции иммунных реакций, доказано его влияние напролиферативный ответ Т-лимфоцитов и их поликлональную стимуляцию,способность усиливать активность субпопуляции Th1 и ингибировать апоптоз[198, 422]. Мелатонин снижает возраст-индуцированную иммуносупрессию путемувеличения уровней IgG и IgM в крови [102]. В исследованиях Mazzoccoli G. ссоавторами показано участие эндогенного мелатонина в контроле циркаднойритмичности изменения субпопуляционного состава лейкоцитов и сывороточныхуровнях про- и противовоспалительных цитокинов [309].Представлена доказательная база, свидетельствующая о способностимелатонина стимулировать выработку ряда цитокинов, интерферонов [148, 215].Мелатонин ингибирует ЛПС-стимулированную выработку ФНО-α, ИЛ-1, ИЛ-6,ИЛ-8 и ИЛ-10 [163, 244, 256].

Глебездиной Н. С. с соавторами установленаспособность мелатонина в физиологических концентрациях индуцировать синтезТ-лимфоцитами ИЛ-17 [24].Кроме того, под действием данного индоламина снижается секрециятропных гормонов передней доли гипофиза - кортикотропина, тиротропина,соматотропина [127]. Мелатонин участвует в реакциях, обеспечивающихадаптацию к стрессовым нагрузкам, угнетая выброс адренокортикотропногогормона, уменьшая концентрацию кортизола, что обеспечивает седативный,умеренный снотворный эффекты, снижает чувство тревожности [52]. Также былоустановлено, что мелатонин ингибирует действие эстрогена и тем самым37ограничивает одну из причин развития метаболического синдрома [127, 437].Отмечено, что мелатонин увеличивает активность остеобластов, усиливает имипродукцию остеопротегерина, ингибирует остеокласты [147, 281, 395].Высказанысвидетельствующихпредположенияобиполученантидепрессивном,ряддоказательств,антиамнезическомсвойствахмелатонина, показана нормализация сна при его применении, причем полученныерезультатыподтвержденыполисомнографическойинепрерывнойактиграфической регистрацией моторной деятельности головного мозга [355].GuptaY.K.представленыдоказательствапротивосудорожныхэффектовмелатонина гипотензивных, гипохолестеринемических и гипогликемическихэффектов [226].Ambresin, G.

с соавторами представляют данные, свидетельствующие онейротрансмиттерных эффектах мелатонина за счет активного участия в передаченервного импульса через синапс [104].Выше перечисленные эффекты мелатонина в организме указывают на егозначительную роль в поддержании гомеостаза, что ведет к дальнейшемуизучению возможных механизмов его действия.38Глава 2Материалы и методы исследованияДля реализации поставленных задач по изучению этологического статуса ииммунногостатусаорганизмапридесинхронозебылипроведеныэкспериментальные исследования:1) в условиях in vivo - на 526 морских свинках,2) в условиях in vitro - на цельной крови 60 клинически здоровыхдобровольцев.2.1. Эксперименты в условиях in vivoЭксперименты выполнены на 526 нелинейных половозрелых морскихсвинках самцах массой 300±50 г, доставленных из питомника лабораторныхживотных филиала ФГУП НПО «Микроген» МЗ РФ (с.

Горный, Чишминскогорайона, Башкортостан), находящихся в стандартных условиях вивария, натиповом рационе в соответствии с нормами, утвержденными ПриказомМинздрава СССР № 1179 от 10.10.1983 г., свободном доступе к пище и воде.Все манипуляции с экспериментальными животными выполнялись всоответствии с Европейской конвенцией о защите позвоночных животных,используемых для экспериментов или в иных научных целях (ETSIN 123, 18марта 1986 г.), включая приложение А от 15.06.2006, с Директивой 2010/63/EUЕвропейского парламента и совета Европейского союза по охране животных,используемых в научных целях от 22.09.2010.В качестве объекта исследования выбрана морская свинка, т.к.

в отличие отдругих экспериментальных животных (крысы, мыши) по образу жизни являетсяживотным с дневной активностью [340, 407, 421] Световосприятие ицветовосприятиеуморскихсвинокнаиболееприближенокцветовойчувствительности человеческого глаза, что позволяет им являться наиболее39адекватным объектом для изучения свет-ассоциированных измененных состояний[247, 248].Модель десинхроноза. Световой десинхроноз создавали содержаниемморских свинок при круглосуточном (24 часа) искусственном освещении [55, 71].В исследовании были использованы два вида источников искусственногоосвещения, основные характеристики которых представлены в таблице 1.Таблица 1- Основные характеристики источников искусственного освещения,использованных для создания экспериментального десинхроноза:ПоказательПроизводительНапряжение питанияНоминальная мощность,Светодиодные источникиЛюминесцентныеосвещенияисточники освещения«ISAlight – Офис 32», ООО«LLAlight – Офис 30», ООО«Инженерные Системы«Инженерные СистемыАвтоматизации», РоссияАвтоматизации», Россия160-264В (50-60Гц) АС160-264В (50-60Гц) АС3232не менее 120не менее 115не менее 2300не менее 23004500 (холодный-белый)4500 (холодный-белый)ВтПолный угол излучения,градусыСветовой потоксветильника, ЛмЦвет излучения, КПульсация световогоменее 4% (1%)менее5 %потока, %Уровень освещенности,лк40042040Источники освещения располагались на расстоянии 250 см над клетками сэкспериментальными животными, таким образом, чтобы световой потокравномерно освещал весь периметр клетки.Для проведения исследования 526 нелинейных половозрелых морскихсвинок случайным образом были разделены на 7 групп:группа 1 –животные в условиях естественного освещения - ЕО, (n= 32);группа 2 –животные в условиях стандартного фиксированного (12 часовсвет / 12 часов темнота) освещения, создаваемого люминесцентными лампами СФЛО, (n=82);группа 3 –животные в условиях стандартного фиксированного освещения,создаваемого светодиодными лампами - СФСДО, (n=82);группа 4 –десинхроноз в условиях люминесцентного освещения - ДЕСЛО,(n=92);группа 5 - десинхроноз в условиях светодиодного освещения - ДЕССДО,(n=80);группа6-животные,которымпридесинхронозевусловияхлюминесцентного освещения вводили экзогенный мелатонин - ДЕСЛО+МТ,(n=78);группа 7 - животные, которым при десинхронозе в условиях светодиодногоосвещения вводили экзогенный мелатонин - ДЕССДО+МТ, (n=80).Раствор мелатонина готовили из препарата «Мелаксен» (МНН: мелатонин,«Юнифарм Инк.», США) в изотоническом растворе NaCl 0,9% ex tempore.Введение мелатонина животным 6 и 7 групп осуществляли per os в дозе 1мг/кгежедневно в вечернее время (21.00 час) с 1 суток эксперимента в течение 30 дней.Животным 4 и 5 групп вводили эквиобъемное количество изотонического 0,9%раствораNaCl.Продолжительностьэкспериментасоставила30суток.Исследования в группах 2, 3, 4, 5, 6, 7 проводили на 10, 20, 30 сутки.