Диссертация (Связь полиморфизма генов серотониновой системы с вариантом и возрастом дебюта ишемической болезни сердца), страница 7

Правильное понимание связи особенностей психикичеловека с развитием ишемической болезни сердца поможет не только болееэффективнолечитьпациентов,ноипроводитькачественныепрофилактические и реабилитационные мероприятия, а также формироватьгруппы риска с целью своевременной коррекции терапии и тактики лечения.39Глава II. Материалы и методы обследования пациентов.1. Объект исследования.Подбор пациентов для исследования.Наборучастниковкардиологическихдляотделенияхисследованиягородскойпроводилсяклиническойвтрехбольницы№7г.Москвы в период с 2010 по 2011 год. Пациенты были госпитализированыдля лечения и обследования с диагнозом «ишемическая болезнь сердца».ОбследованиеосуществлялосьсогласнорекомендациямВНОКсназначением соответствующей терапии.Критерии включения пациента в группу научного исследования.Пациентымужскогополаввозрастеот30до70лет,госпитализированные в кардиологические отделения ГКБ №7 города Москвыв период с октября 2010 по октябрь 2011 год с диагнозом ИБС,согласившиеся на участие в исследовании.

Верификация диагноза ИБСосуществлялась на основании клинической картины, наличия достоверныхданных инфаркта миокарда в анамнезе, данных обязательных исследований( ЭКГ, нагрузочных проб (велоэргометрический тест – ВЭМ, либо тредмилтест), суточного мониторинга ЭКГ по Холтеру, и на результатахкоронароангиографии (у части больных).Критерии исключения пациента из группы научного исследования.гемодинамически значимые пороки сердца,кардиомиопатии,сочетанная патология среднетяжелой и тяжелой степени тяжести,злокачественные новообразования,инсульт в анамнезе,тяжелые психические расстройства (шизофрения: параноидная – F20.0,40гебефреническая – F20.1, кататоническая – F20.2; вялотекущая – F21;хроническиебредовыерасстройства–F22;острыепсихотическиерасстройства – F23; шизоаффективные расстройства – F25; признакизависимостиотпсихоактивныхвеществ(F10-F19);органическиепсихические расстройства (F00-F09); болезнь Альцгеймера (G30) и прочиедегенеративные заболевания нервной системы (G31-G32), не уточнѐнные вдругих рубриках, затрудняющие сбор анамнеза.).Общая характеристика исследуемой группы.В исследовании приняли участие 260 мужчин в возрасте от 34 до 70 лет.Из исследования были исключены пациенты, не полностью заполнившиепсихологические тесты, и пациенты с сочетанными заболеваниями в стадииобострения.

В конечном итоге, в исследовании приняли участие 180пациентов мужского пола, средний возраст которых составлял 62,7 лет.Общая характеристика группы представлена в таблице 1.Таблица 1. Общая характеристика группы.Семейноеположение:Образование:РаботаютНе работаютВредныепривычки:в браке состоялив браке не состоялиразведенывдовцы2 высшихвысшеесредне-специальноесреднеесреднее неполноекурятбросили куритьне курилизлоупртребляют алкоголемзлоупотребляли алкоголем ранееотрицают употреблениеалкоголяКоличествопациентов166483140924257110979703182170%соотношение92,22,241,60,522,251,123,32,739,460,643,917,217,24,41,194,4412.

Обследование пациентов.2.1. Этапы обследования пациентов.Пациентызаполняли письменное информированное согласие. Сборданных и медицинского анамнеза осуществлялся врачом кардиологомпосредством интервью с ознакомлением подтверждающей документации.На третий день после поступления участники исследования былиосмотрены психиатром для исключения тяжелых психических расстройств иопределения уровня депрессии по шкале Гамильтона, а также психологом споследующим заполнением опросника Розенцвейга, опросника тревогиСпилберга, опросника Большая пятерка, опросника Басс-Перри и краткойшкалы жизнестойкости.На последнем этапе исследования проводилось взятие анализов длягенетического типирования по генам нейромедиаторов.2.2Патопсихологическиеипсихометрическиеметодыобследования пациентов.Дляпатопсихологическихипсихометрическихизмеренийиспользовались опросники, обладающии высокой валидностью, ретестовойнадежностью и адаптированные к русскоязычному населению (представленыв таблице 2).42Таблица 2.

Опросники, используемыи в исследовании.НазваниеопросникаОпросникРозенцвейгаАдаптированН.В.ТарабринойОпросник«Большаяпятерка»А.Б. ХромовымОпросникА.Басса иМ.ПерриС.Н.ЕниколоповымОпросниктревогиСпилбергаЮ.Л. ХанинымШкала ГамильтонаИсследуетРеакции на неудачу и способывыходаизситуаций,препятствующих деятельности илиудовлетворениюпотребностиличности [11]. С помощью даннойметодики определяется, на когоиндивид возлагает вину, а именно:обвиняет себя (интрапунитивныереакции),обвиняетдругих(экстрапунитивные реакции), илине придает фрустрации должногозначения (импунитивные реакции),а также, чему индивид придаетбольшее значение: препятствию,самозащите,удовлетворениюпотребности.Определяетдиспозиционнуюмодельличностичеловека,включающуюпять общих иотносительно независимых черт,такихкакэкстраверсию,доброжелательность,добросовестность, нейротизм иоткрытость опыту [9].Диагностируетагрессию(поведенческий компонент), гнев(аффективныйкомпонент,включающийвсебяфизиологическое возбуждение иподготовкукагрессии)ивраждебность(когнитивныйкомпонент,основанныйнапереживаниичувстванесправедливостииущемленности,неудовлетворенностижеланий)[5].Тревожность и как личностноесвойство (личностная тревога),проявляющееся в повседневнойжизни и в стандартных ситуациях,и как состояние индивида внастоящий момент, связанное стекущей угрожающей ситуацией(ситуационная тревожность) [8].Количественную оценку состоянияпациентасдепрессивнымирасстройствами до, во время ипосле лечения [106].

Пунктышкалыотражаютсостояниепациента в течение последнихнескольких дней или предыдущейнедели.СпособпроведенияОбследуемыйотвечаетзачеловека,изображенного насхематическомконтурном рисунке,занятымнезаконченнымразговором(24рисунка).КритериистратификацииОбщий%реакциисоставляет100%.Обследуемыйотвечаетна60утверждений,гдевыражаетсвоесогласие(несогласие),используя5-тибалльную шкалу.Обследуемыйотвечаетна29утверждений,гдевыражаетсвоесогласие(несогласие),используя5-тибалльную шкалу.Выраженностькаждогофактораоценивается от12до60включительно.Обследуемыйотвечаетна40высказываний, гдевыражаетсвоесогласие(несогласие),используя 1 из 4вариантов ответа.Проводитьсяпсихиатром в видеструктурированногоклиническогоинтервью,занимающего 20-25мин (21 вопрос).Низкаятревожность до30баллов;умереннаятревожность 3145,высокаятревожность 46и более баллов.Депрессияотсутствует 0-7баллов, легкаястепень8-13баллов, средняястепень14-18баллов, тяжелаястепень19-22баллов, крайнетяжелая степеньболее23баллов.Физическаяагрессия26,49 Ơ 6,22,Гнев20,29 Ơ 5,67,Враждебность22,08 Ơ 5,21432.3Методикагенетическоготипированияпогенамнейромедиаторов.Исследование выполнялось в лаборатории молекулярно-генетическойдиагностики НИИ экологии человека и гигиены окружающей среды имА.Н.Сысина РАМН.Реактивы и ферменты.

Приборы и оборудованиеИспользовались стандартные реактивы и лабораторное оборудование,необходимое для выделения ДНК из жидкой крови и проведенияполимеразной цепной реакции (ПЦР) с последующим определениемаллельных полиморфизмов исследуемых генов.Все методики доступны по запросу.Выделение геномной ДНКВыделение геномной ДНК из жидкой крови проводили по стандартнойметодике с использованием фенола.Полимеразная цепная реакция (ПЦР)ПЦРпроводилипостандартнойметодике.Условияипоследовательности праймеров приведены в таблице 3.Таблица 3. Последовательности праймеров и параметры ПЦРЛокусПоследовательностьТ отжига5’→3’[C]HTR2A,AACCAACTTATTTCCTACCACА-1438GAAGCTGCAAGGTAGCAACAGC58Длина ПЦР продукта468 п.о.528 п.о.

– длинныйSERT,GAGGGACTGAGCTGGACAACCAC5`-HTTLPRGGCGTTGCCGCTCTGAATGC68(L-long) аллель485 п.о. – короткий(S-short) аллель44Получали ПЦР продукты соответствующей длины (таблица 3).Для определения аллельного полиморфизма А-1438G гена HTR2Aпроводили рестрикцию с соответствующими рестриктазами (таблица 4).Таблица 4. Условия проведения рестрикции.ЛокусДлина ПЦРпродуктаРестриктазаУсловияДлина продукта рестрикцииHTR2A,А-1438G468 п.о.MspI37C,буфер "О"Аллель А - 244 и 224 п.о.Аллель G - 468 п.о.Электрофоретическое разделение ДНК.Разделениепродуктовамплификацииипродуктоврестрикцииампликонов проводили в горизонтальном 2% агарозном геле. Генотип покаждому гену определялся в соответствии с представленными в Таблицах 3 и4 длинами фрагментов амплифицированной ДНК.3. Статистическая обработка результатовПолученныеданныеобрабатывалисьобщепринятымиметодамивариационной статистики: вычисляли средние арифметические и ихстандартныеотклонения,сравнениесреднихвеличинпроводилосьиспользованием критерия Стьюдента, достоверность различий оцениваласьпо значениям вероятности «р», соответствующего вычисленной величинекритерия t.

Вычисления проводились на персональном компьютере IBMAT/PCсиспользованиемэлектронных таблиц Exсel,программногообеспеченияWindows–XP,достоверность различий оценивалась позначениям вероятности «р» с помощью методов непараметрическойстатистики: ANOVA тест. Достоверным считались результаты при р 0,05.Для оценки взаимосвязи изменения величин использовались программырегрессионного анализа.45Глава III. Результаты собственных наблюденийРаспространенность полиморфизмов генов серотониновой системыу пациентов с ИБС.В нашей выборке (n=180) наблюдалось следующее распределениегенотипов, отображенное на рисунке 1.

Для серотонинового рецептора 5HT2A (A-1438G) наблюдалось следующее распределение: генотип ААопределился у 31 (17,22%) пациента, генотип АG определился у 77 (42,78%)пациентов, генотип GG определился у 72 (40%) пациентов.Длябелкасеротониновоготранспортера(SERT)наблюдалосьраспределение: генотип LL определился у 69 (38,33%) пациентов, генотип SLопределился у 80 (44,44%) пациентов, генотип СС определился у 31 (17,22%)пациента.Рисунок 1.

Распределение генотипов.60524850444240304038Наша выборка3627Европейскаяпопуляция212017 1617100АААGGGHTR 2A (A-1438G)LLSLSSSERT46Ассоциацииполиморфизмовгеновсеротониновойсистемысфакторами риска ИБС.Для оценки ассоциаций генотипов исследуемых нами генов с факторамириска ишемической болезни сердца, мы разделили пациентов на 3 группы взависимости от генотипа исследуемого нами гена.Для гена серотонинового транспортера (SERT):1. группа – пациенты с генотипом LL (n=69)2. группа – пациенты с генотипом SL (n=80)3. группа – пациенты с генотипом SS (n=31)Для гена серотонинового рецептора 5-HT2A (A-1438G):1.