Диссертация (Морфологический анализ сперматогенеза - основа диагностики мужского идиопатического бесплодия (иммуногистохимический аспект)), страница 7

Положительными поэкспрессии CD117 являются практически 100% семином, а в смешанныхопухолях он окрашивает компонент семиномы [43, 68, 72, 90, 95, 96]. Однако,при проведении дифференциальной диагностики необходимо учитывать, чтотолько 40% случаев сперматоцитарной семиномы – опухоли, которыевстречаются в яичках пожилых мужчин, являются положительными приреакции с антителами к CD117 [23, 72, 92, 96, 122, 136].35В нормальных яичках, экспрессия CD117 наблюдается в клетках Лейдига ичастично в сперматогониях [90].Номенклатура видов мужских половых гамет в пренатальном онтогенезе,принятые ещё в середине прошлого века,* за последнее десятилетиепретерпели значительные изменения благодаря активному использованиюметодов иммунофенотипирования и молекулярной биологии (FISH, CISH иПЦР-диагностики).

При этом, идентификация гамет основывается наиспользовании таких маркеров как OСТ-4, CD117 (c-kit) и MAGEA4, режеPLAP. В современных условиях, протеомика дифференцировки мужскихполовых клеток в антенатальном развитии выглядит следующим образом:примордиальные,промежуточныегоноциты(OCT4++/PLAP+/MAGEA4–/CD117++),(OCT4+/MAGEA4–/CD117–),(OCT4–/MAGEA4+/CD117–).Трансформацияфетальныесперматогониипримордиальныхполовыхклеток в гоноциты является первым шагом на пути дифференцировки мужскихполовых клеток [72, 98].* Мужские половые клетки в антенатальном сперматогенезе, согласно номенклатурамFukuda, Hedinger (1975) и Wartenberg, Holstein, Vossmeyer (1971, 1978): гоноциты,примитивные, примордиальные, пресперматогонии – M (multiplying), T1 (transitionalnonproliferating) и T2 (transitional proliferating).РезюмеЕдинство функции и структуры является непреложным законом.Естественно,чтоприизучениипатологиисперматогенезанельзяограничиться функциональным аспектом проблемы – необходимо изучать иструктурные изменения.Особенно значительный прогресс в современных представлениях остроении, физиологии и развитии мужских половых клеток был достигнут запоследние 10 – 15 лет благодаря применению методов иммуногистохимии имолекулярной биологии.

На примере сперматогенеза выяснены важные36закономерности молекулярной и цитологической дифференцировки мужскихгамет. Изучение нормального сперматогенеза особенно актуально длявыяснения причин и патогенеза мужского идиопатического бесплодия,совершенствования методов искусственного оплодотворения, разработкимероприятий профилактики бесплодия.Анализируя вышеизложенные литературные данные можно заключить, чтовозможная роль биологических соединений в мужском идиопатическомбесплодии нуждается в уточнении. Кроме того, мало данных о возможнойположительнойэкспрессииидиопатическомбесплодии.онкомаркёровАтакже,вполовыхсуществуетклеткахмалопринаучныхдоказательств этиопатегенетического подхода в лечении идиопатическогобесплодия.Следовательно, мужское идиопатическое бесплодие, бесспорно, являетсяпредметом всестороннего изучения (патогенез) и в первую очередьнеобходимо дать максимально возможную в современных условияхморфологическуюкартинунормального сперматогенеза.заболевания,основываясьнатеченииПолученные структурно-функциональныеданные позволят в дальнейшем обозначить вектор в изучении патогенеза иразработке адекватных терапевтических подходов лечения (прежде всегоконсервативного), а также проведении возможной профилактики.В связи со сказанным возникла необходимость в обобщении и возможнойсистематизации имеющихся данных, переоценке прежних результатов всветесовременныхпредставлений,аперспективных направлений исследований.37такжевосвещенииновыхГлава IIМАТЕРИАЛ и МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯРетроспективныеисследованияматериалапроводилинабазах:Федеральное государственное автономное образовательное учреждениевысшего образования Первый Московский государственный медицинскийуниверситет им.

И. М. Сеченова Министерства здравоохранения РоссийскойФедерации (Сеченовский университет), кафедра патологической анатомииимени академика А. И. Струкова (заведующая кафедрой – д.м.н., профессорЕ.А. Коган); Негосударственное частное учреждение здравоохранения«НаучныйклиническийцентрОАО«РЖД»,урологическийцентр(руководитель – д.м.н., профессор О.В. Теодорович).Сцельюпроведенияретроспективногоисследованияклинико-морфологического материала были сформированы две группы:I.–группасусловнымконтролемфизиологическоготечениясперматогенеза, в семейном анамнезе – одно и более деторождений(возрастная выборка проводилась по Г.Г. Автандилову, 1998; A.C. Леонтюк ссоавт., 2000) [1]: А – мужчины 22–35 лет (28.5±6.5, n=10); Б.

– мужчины 64–75 лет (69.5±5.5, n=10);Объектом исследования в этой группе служил аутопсийный материаляичек, полученные при ранних вскрытиях трупов мужчин (не более 6 часовпосле констатации биологической exitus letalis). Он был собран впатологоанатомическомотделенииНКЦОАО«РЖД»исудебно-медицинском морге №10 г. Москвы (при ГКБ им. Боткина) у мужчин,погибших от случайных причин или умерших вследствие заболеваний, несвязанныхсустанавливалипатологиейпооргановзаключениюполоститаза.Причинуврача-патологоанатомаилисмертисудебно-медицинской экспертизы. Яички исследовали макроскопически на предметналичия/отсутствия воспалительного и/или опухолевого процесса.38II.

В группу были включены мужчины зрелого возраста 22–35 лет(28.5±6.5) с клинически (и морфологически) подтверждённым диагнозомидиопатического бесплодия (азооспермия) (n=30).Объектом исследования в этой группе служили биоптаты правых яичек(чаще выбор в пользу яичка большего объема – пальпаторно и по даннымультразвуковой диагностики). Медицинскими показаниями для получениябиоптатовяичекбылаазооспермия.Отпациентовприполучениибиоматериала и использовании результатов его исследовании в дальнейшейработе и публикациях были оформлены информированные добровольногосогласия (согласно Бюллетеня ВОЗ).Материал изучали на гистологических препаратах и отпечатках методомсветовой микроскопии.Все исследования проведены с соблюдением требований протокола № 1016 от 09.11.16, одобренного Этическим комитетом Первого МГМУ им.

И.М.Сеченова, атакжесоответствуютХельсинкскойдекларации(WMADeclaration of Helsinki – Ethical principles for Medical research involving Humansubjects, 64th WMA General assembly, Fortaleza, Brazil, October, 2013).М Е Т О Д ЫИспользованследующийморфометрические,И С С Л Е Д О В А Н И Якомплексгистохимические,методов:морфологические,иммуногистохимические(ИГХ),полимеразная цепная реакция в режиме реального времени (ПЦР-РВ) истатистические методы исследования.В качестве рутинных критериев оценки полученных результатоввыступали стадии сперматогенеза, предложенные Clermont Y. (1963),балльная система оценки сперматогенеза по Johnsen S.

G. (1970), балльнаяшкала нарушений сперматогенеза по доли семенных канальцев, содержащихвытянутые сперматиды (при их наличии), предложенная Bergmann M. (1998),осуществление оценки компенсаторно-приспособительных реакций по39морфометрическим характеристикам тканей яичка [Е. А. Дубова и др.«Морфологическая характеристика биоптатов яичка при бесплодии»; И.Ю.Саяпина и др. «Опыт использования программы видеотест – морфология 4.0в системном анализе структурно-функционального состояния семенников»],а также способ диагностики состояния структур яичка по расчёту индексасперматогенеза, рекомендованный Астраханцевым А. Ф.

(2001) [2].2.1. Клиническое (клинико-лабораторное) обоснование мужскогоидиопатического бесплодия (II-я группа)Согласно основным Положениям различных Комитетов, в том числе и подэгидой ВОЗ для оценки физиологической зрелости потомства животныхконтрольной и опытной групп использовали следующие показатели: пол,возраст, весовые параметры яичек; клинико-лабораторные данные (анамнез,спермограмма, первичная биопсия).Клинический материал (биоптаты яичек у 30 мужчин, страдающихидиопатическим бесплодием) был получен при биопсии под местнойанестезией (урологический центр НКЦ ОАО «РЖД», Клиника урологии им.Р.М. Фронштейна Первого МГМУ им. И.М.

Сеченова, клиника «Мать идитя»). Я выражаю благодарность врачам урологам-андрологам: к.м.н. А.В.Краснову (заведующий андрологическим кабинетом), к.м.н. Н.Г. Кульченко,к.м.н. Д.В. Москвичёву. Причиной обращения в медицинские учрежденияпациенты называли нарушение фертильности (первичное бесплодие) (n=24),атакженевынашиваниябеременности,неудачэкстракорпоральногооплодотворения и переноса эмбрионов или неудач интрацитоплазматическойинъекции сперматозоидов (ICSI) (n=6). Изначально было обследовано 50мужчин, обратившихся на приём к урологам-андрологам с проблемамифертильности (возраст 22 – 35 лет). Из дальнейшего исследования былиисключены20пациентов(критерииисключения):отягощённыйлекарственный анамнез (n=4; андрогены или анти-эстрогены), системныезаболевания (n=9), хромосомные транслокации (n=1), гипогонадотропный40гипогонадизм (n=6), а также другие эндокринные заболевания, ведущие кснижениюсекрециитестостерона:гипотиреоз,тиреотоксикоз,гиперпролактинемия (определяется на основании уровней тиреотропногогормона (ТТГ), свободного тироксина (Т4), пролактина), декомпенсациясахарного диабета, гиперкортицизм, а так же почечная или печеночнаянедостаточность, воспалительные заболевания урогенитального тракта встадии обострения.АНАЛИЗ КЛИНИЧЕСКИХ ДАННЫХ(Протокол обследования мужчин с азооспермией):Исследовались выписки из медицинских карт пациентов, включавшие в себяследующиеданные:паспортныесведения,жалобы,анамнестические,физикальные, лабораторные и инструментальные.Анамнез.1.

Употребление лекарственных средств (см. инструкцию к применениюкаждого лекарственного средства), в том числе длительная антибактериальнаятерапия инфекций, передающихся половым путём.2. Употребление наркотических средств (в том числе марихуаны).3. Наследственная отягощенность (выявление у отца и братьев бесплодия илиприменения вспомогательных репродуктивных технологий).4. Наличие в анамнезе воспалительных заболеваний урогенитального тракта.5. Частое посещение саун и прием горячих ванн. Объективный осмотр6. Измерение роста и массы тела, окружности талии и расчет индекса массытела.7. Пальпация грудных желез.8.