Диссертация (Морфологический анализ сперматогенеза - основа диагностики мужского идиопатического бесплодия (иммуногистохимический аспект)), страница 22

Н.И. Пирогова (РНИМУ),доктору медицинских наук, профессоруОльге Васильевне Волковойза развитие отечественной эмбриологии и репродуктологии,профессорамкафедры гистологии и эмбриологии педиатрического факультетаРГМУ им. Н.И. Пирогова:д.б.н., Г.Г. Кругликову,д.м.н., А.Ю. Цибулевскому,к.м.н., М.И. Пекарскомуза ценные советы и внимание к работе в ходе её выполнения,ректору Российского государственного медицинского университетаим. Н.И. Пирогова (1984 – 2007 гг.),академику РАН, доктору медицинских наук, профессоруВладимиру Никитичу ЯрыгинуОсобую признательность и благодарность приношу Пациентам, которыепринимали участие в клинико-морфологическом исследовании,а такжеврачу-лаборанту (биологу) патологоанатомического отделения ФГБУ«Национальный медицинский исследовательский акушерства, гинекологии иперинатологии имени академика В.И.

Кулакова», канд.хим.наук, Н.М.Файзуллиной; заведующему Отделом патологической анатомии опухолей человекаФГБУ «Российский онкологический научный центр им. Н. Н. Блохина», д.м.н.,профессору А.И. Карселадзе; заведующему патологоанатомическому отделениюФГБУ «Национальный научно-практический центр детской гематологии,онкологии и иммунологии имени Дмитрия Рогачева», к.м.н., Д.М. Коновалову запомощь при проведении морфологических исследований.134Приложение I. Сперматогенез (схема)135Приложение II. Нейрогуморальная регуляция сперматогенеза, схема136Приложение III.

Протеомика антенатального и постнатального сперматогенеза(полусхематично)Половые клетки (А): 1 – сперматогонии, 2 – сперматоциты I, 3 – сперматоциты II, 4 –сперматиды, 5 – сперматозоиды. Соматические клетки: B – клетки Сертоли, C – клеткаЛейдига, D – миоидная клетка, G – фибробласт. E – базальная мембрана извитогосеменного канальца. F – гемокапилляр соматического типа.ХХХХ – межклеточные коммуникации: плотные сертоли-сертолиевы (TG).ШШШ – межклеточные коммуникации: заякоривающие сертоли-гаметные.Гены и белки-регуляторы сперматогенеза и их топонемика в онтогенезе:□ – индифферентная стадия развития гонады (до 8 недели эмбриогенеза).□ – стадия дифференциации гонады по мужскому типу (8 – 9 неделя эмбриогенеза).□ – антенатальное развитие (фетогенез).□ – постнатальное развитие.□ – белки соматических клеток.CD34 – дендритические клетки интерстициальной ткани.137Приложение IV.

Гистохимические реакции при идиопатическом бесплодии.Рис. a. Яичко (в норме).Отпечаток, окраска по G. Giemsa, ×40.В центре – сперматоцит I, вокруг – сперматогонии иэритроциты (при резекции яичка).Рис. г. Яичко, SCO-sF.H&E, ×40. О – половые клетки, □ – клетки Сертоли(ядро и ядрышко), Δ – миоидные клетки.Рис. б. Яичко (в норме).Отпечаток, окраска по G. Giemsa, ×100.В центре – клетка Сертоли.Рис.

д. Яичко, SCO-sF.H&E, ×20. О – половые клетки в просвете семенногоканальца, □ – стенка кровеносного сосуда,Δ – стенка семенного канальца.Рис. в. Яичко (в норме).Отпечаток, окраска по G.Giemsa, ×40.Рис. е. Яичко. H&E, ×10. О – SCO-sF,Δ – тубулярная атрофия семенных канальцев.138Рис. ж. Яичко, SCO-sF. Окраска по van Gieson, ×40.О – половые клетки, Δ – коллагеновые волокна всоединительнотканном слое стенки семенныхканальцев и кровеносных сосудов.Рис.

к. Яичко, SCO-sF. Окраска PAS, ×100.О – половые клетки, Δ – включения гликогена всперматогониях, расположенных ближе к базальноймембране; □ – незрелые клетки Сертоли (ядро).Рис. з. Яичко, SCO-sF. Окраска по Masson, ×40.О – половые клетки, □ – клетки Сертоли (ядра), Δ –эластические волокна в соединительнотканном слоеизвитых семенных канальцев и кровеносных сосудов.Рис. л. Яичко, SCO-sF.Окраска по Weigert, ×40. О – половые клетки,Δ – эластические волокна в соединительнотканномслое семенного канальца.Рис.

и. Яичко, гиалиноз семенных канальцев.Окраска по Masson, ×40. О – семенные канальцы,Δ – коллагеновые волокна в стенке артерии.Рис. м. Яичко, SCO-s. Окраска: гематоксилинэозин, ×40. О – дегенеративные клетки Сертоли(ядра), Δ – гиалиноз стенки семенного канальца,– тубулярная атрофия139Приложение V. Протоколы исследования (шаблоны)ПРОТОКОЛ ЭКСПЕРЕМЕНТАЛЬНОЙ РАБОТЫДата проведения эксперимента: «___» «______________» 20__ год.Начало:_______ Окончание:_______Объект исследования: ______________________________Исследуемый фактор: __________________________Разведение первичных антител:___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________время1:1:1:1:1:1:разведениеколичествосрезов1.1.

Депарафинизация ( ксилол) 3 раза х 5 минут1.2. Дегидратация ( спирт 96%) 2 раза х 10 минут1.3. Aqua distillate 1 минута1.4. Цитратный буфер (Citrate buffer 1x 0,07 M pH 6)на водяной бане( t= 95ºС) 40минут1.5. Остужение в холодном ( t= 20ºС) цитратном буфере (Citrate buffer 1x 0,07 M pH6) 20 минут1.6. Aqua distillate 3 раза х 2 минуты1.7. Ограничить срезы жирным карандашом Liquid blocker super pap pen2.1.

Block Peroxidase ( t= 20ºС) х 5 минут2.2. Отмывание в PBS 10x Solution 0,01M pH 7,4 2 раза х 3 минуты2.3. Serum block х 20 минут2.4. Нанесение первичных антител х 1 час3.1. Отмывание в PBS 10x Solution 0,01M pH 7,4 2 раза х 3 минуты3.2. Нанесение вторичных биотилированных антител х 30 минут3.4. Отмывание в PBS 10x Solution 0,01M pH 7,4 2 раза х 3 минуты3.5. Streptavidin Peroxidase 30 минут3.6. Отмывание в PBS 10x Solution 0,01M pH 7,4 2 раза х 3 минуты3.7.

DAB Substrate Chromogen 30 секунд – 20 минут3.8. Aqua distillate 2 минуты, помешивая4.1. Окрашивание гематоксилином4.2. Aqua distillate 2 минуты, помешивая4.3. Промывание проточной водой4.4. Дегидратация ( спирт 96%) 2 раза х 10 минут4.5. Заключение в среду.Примечание:__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________140СВОДНАЯ ТАБЛИЦА ЭКСПЕРЕМЕНТАЛЬНОЙ РАБОТЫИсследуемый фактор: ______________________________№ п/празведениедата1.1.

клетки Сертоли1:1.2.сперматогенный пул1. семенной каналец1.2.2.1.сперматоциты 11.2.2.2.сперматоциты 21.2.3.сперматиды2.2.стенкасосуда2.1.рыхлаясоединительная ткань1.2.4.сперматозоиды2. строма (интерстиция)1:1:1:1:1:1:1:ЯЦ1.2.1.сперматогонии2.1.1.клеткифибробластическогоряда2.1.2.ЯЦЯЦЯЦЯЦЯЦЯЦЯ2.1.3.Ц2.2.1.эндотелийЯЦЯЦЯЦЯ2.2.2.гладкиемиоциты2.2.3.адвентиция2.3.клетки Лейдига1:Цhttps://www.morphology.pro/Фотографии (цветные), таблицы, графики и дополнительнаяинформацияпосперматогенезаидиопатическогодиссертации–основабесплодияаспект), а также другие«Морфологическидиагностикимужского(иммуногистохимическийматериалы располагаются воблачном хранилище данных (cloud storage).141анализ.