Отзыв Балабушевич Н.Г. (Разработка и применение методов ПЦР и ИФА для анализа остаточных ДНК и белков штаммов-продуцентов в биофармацевтических субстанциях)

ОТЗЫВ на автореферат диссертации Ковалевой Екатерины Викторовны иРазработка и применение методов ПЦР и ИФА для анализа остаточной ДНК и белков штаммов-продуцентов в биофармацевтических субстанциях»ч представленной на соискание ученой степени кандидата химических наук по специальности 03.01.0б — Биотехнология (в том числе бионанотехнологии) В своем исследовании диссертант Ковалева Е.В. затрагивает актуальные вопросы совершенствования методов контроля качества лекарственных препаратов.

Современные стратегии разработки технологии получения фармацевтических субстанций при использовании генно-инженерных штаммов предполагают надлежащий контроль примесей от штамма-продуцента. Важным моментом являегся оценка содержания остаточных белков и ДНК штаммапродуцента. Для решения поставленных задач выбраны два актуальных объекта генно-инженерные фармацевтические субстанции инсулина человека и гистона Н1.3 человека. Несомненным достоинспюм работы Ковалевой Е.В.

является четкое логичное построение плана исследований и реализация заданной цели. Научная новизна работы состоит в том, что разработанные диссертантом условия для метода ПЦР в реальном времени позволили повысить чувствительность в 30 раз по сравнению с применением коммерческого набора, который можно использовать лишь для приблизительной оценки содержания остаточной ДНК штамма-продуцента на первичных стадиях разработки технологии.

Практическая значимость работы состоит во внедрении разработанного метода в опытное биотехнологическое производство ИБХ РАН. Автором использованы различных подходы на этапе приготовления рабочего стандартного образца для оценки остаточной ДНК штаммов-продуцентов в субстанциях инсулина и гистона Н1.3 человека.

Стоит отметить большой объем проведенных исследований, на которые указывает диапазон размеров ампликонов, соответствующих выбранным праймерам. При разработке флуоресцентных зондов Тадао автором были также использованы несколько флуорофоров, гасителей флуоресцепции, длина зондов варьировалась. Итогом оптимизации стал разработанный метод ПЦР для оценки остаточных ДНК штаммов-продуцентов, с реальной возможностью применения не только для выбранных объектов исследования, но и для широкого диапазона субстанций рекомбинантных белков, экспрессируемых в системе Е.сой.

Размер ампликона в данном методе равен 100 п.о., поэтому его можно использовать для ПЦР в реальном времени с различными системами детекции, как с интеркалирующим красителем ЯУВВ. СВЕЕВ 1, так и с пробами системы ТацМап, содержащими флуоресцентную метку. Интересным подходом при анализе проинсулина в субстанции инсулина человека является применение набора для ИФА, разработанного для выявления и оценки содержания проинсулина в сыворотке крови человека. Это открывает возможность повышения специфичности методики рассматриваемого анализа в субстанциях инсулина с низким содержанием проинсулина и является важным моментом для подтверждения показателей безопасности субстанции гормона.

Работа Ковалевой Е.В. производит впечатление целостного законченного научно-практического исследования. Результаты работы хорошо отражены в публикациях журналов, рекомендованных ВАК, а также представлены на международных научно-практических конференциях, Выводы работы полностью обоснованы и логично структурированы. В качестве незначительных замечаний к автореферату можно отметить недостаточность рассмотрения динамики разрушения ДНК штамма-продуцента ультразвуком, а по оформлению - слишком подробные подписи к рисункам, которые можно былО изложить в тексте.

Приведенные замечания носят рекомендательный характер и не влияют на общее положительное впечатление от проведенной диссертантом работы и ее научной ценности. Таким образом, диссертация Ковалевой Е.В. «Разработка и применение методов ПЦР и ИФА для анализа остаточной ДНК и белков штаммов-продуцентов в биофармацевтических субстанциях» является законченной научно- квалификационной работой и соответствует п. 9 «Положения о порядке присуждения ученых степеней».

Полученные результаты представляют несомненную важность для разработки методик контроля качества при оценке показателей безопасности 6иофармацевтических субстанций. Автор диссертационной работы Ковалева Е.В. заслуживает присуждения ученой степени кандидата химических наук по специальности 03.01,06 — Биотехнология 1в том числе бионанотехнологии). Старший научный сотрудник кафедры химической знзимологии, химического факультета Московского государственного университета имени М.В. Ломоносова, кандидат химических наук, доцент ',Яб Л'~ Балабушевич Н.Г.

Полное наименование организации: Адрес: 119991, Российская Федерация, г. Москва, ГСП-1, Ленинские горы, д. 1, стр. 3, химический факультет Телефон: +7 (495) 939-16-71 Е-ша11: ое1сапа1®сЬеш.шзшти Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова» .